点击显示 收起
1 材料与方法
1.1 材料 Shandon恒冷切片机，北京铁路总医院术中冷冻标本500余例。
1.2 方法 （1）将取材后的新鲜组织放于组织托上（小组织用OCT包埋剂在其底部和周围加以衬托包埋）置于冷冻台。（2）恒冷箱的温度设定在-25℃深低温速冻 ［1］ ，一般组织削出平面后直接切片，肌瘤、甲状腺、淋巴结等硬脆组织，先削出平面，再用左手拇指指腹（戴橡胶手套，以保证组织面平滑）轻贴于组织平面2～3s后切片。（3）用干净的载玻片附贴，立即入冷冻固定液固定2min。（4）常规HE染色至无水乙醇脱水，吹干后不用二甲苯透明，直接封片。
2 结果
切片时间显著缩短:由于将恒冷箱的温度从传统的-20℃调至-25℃，组织冷冻时间缩短，特别是含脂肪多的组织以及同时收到几个冷冻标本时，这一优点更加突出。切片质量优良:90%以上的切片完整、组织结构清晰、染色对比度良好，消除了冰晶、裂隙等假象，特别是对肌瘤、甲状腺、淋巴结等硬脆组织，效果更加明显。给快速、及时、准确作出诊断提供了可靠的形态学依据。
3 讨论
传统的冷冻制片方法是在-20℃冷冻2～5min后切片，而改进后的方法在-25℃冷冻1min左右即可切片，这样，既节省了时间，还可以减少冰晶形成而引起的细胞间针状裂隙的产生。因为冷冻时间过长，其蛋白质与水形成的胶体状态受到破坏，水分从胶体状态的蛋白质中分离出来，在细胞间形成针状裂隙，造成形态学假象，很容易导致误诊 ［2］ 。手术室经常会在1～2min之内，同时送来几个冷冻标本（多时4、5个），若做完一个，再做一个，不仅中间等候时间太长，不能达到冷冻诊断30min出结果的要求，而且，组织在空气中暴露时间太长，细胞自溶，切片染色模糊不清，给诊断带来困难。我们将恒冷箱调至-25℃，送来的标本及时取材冷冻，再根据标本的特点先后切片，一同固定、染色。不仅缩短了每个标本的冷冻时间，更大大缩短了中间等候时间，所有标本在10min之内同时完成制片。即便有些硬脆组织，用指腹轻贴组织平面使之迅速回软，切出的组织片同样滋润、光滑、厚薄均匀，染色后组织结构清晰，颜色对比鲜明。
切片贴附后，不要在空气中停留，立即放入固定液。因为切片很薄，在较高的温度下长久停留，会破坏组织细胞成分，使染色模糊不清。应立即放入固定液中，及时固定2min，常规HE染色至无水乙醇脱水，吹干。由于取材、冷冻、切片、固定都非常及时，切片可以不用二甲苯透明，直接封固。这样做出的切片透明度良好，既节省时间、节省试剂，又避免了二甲苯污染空气，还能保证诊断。
经过近几年500例左右冷冻切片实践结果总结，此法可行，切片质量接近石蜡切片，确保冷冻诊断安全、可靠，减少了冷冻诊断的差错。500例中仅有8、9例因组织学形态不典型而等候常规石蜡结果，其余均正确发出报告。
参考文献
1 Culling C.F.A.著.孔庆雷译.组织病理学与组织化学技术手册.北京:科学出版社，1982，132-142.
2 骆新兰.冰冻切片常见问题分析与预防.临床与实验病理学杂志，1999，8（4）:356.
作者单位:100038北京北京铁路总医院病理科