一则生化检验结果与临床不符的探讨

　　【摘要】 目的  对生化检验结果与临床不符的探讨。 方法  在自动生化分析仪器上，观察到血清颜色对一部分生化检验结果具有很强的干扰作用。 结果  以甘油三酯为例:血红蛋白含量1g/L的血清标本测得甘油三酯平均值比标准高出0.27mmol/L;总胆红素含量232mmol/L的血清标本测得甘油三酯平均值比标准高出0.28mmol/L。 结论  我们通过改进自动生化分析仪的检测程序，在不影响系统资源的情况下较好地消除了这种干扰。
      
　　【关键词】  自动生化分析仪 检验结果 颜色干扰
      
　　根据临床观察，生化自动分析仪具有分析速度快，结果重现性好等优点。但偶尔也有医生反映黄疸病人的检测结果与临床不符，这应当仔细分析其原因。
   
　　众所周知，在医学检验中，血液中的许多化学物质大多是通过在血清中加入不同的化学试剂使之发生化学反应产生颜色变化来测定其含量。然而，不同的人体血清标本，颜色（如:黄疸、溶血）差异很大，标本底色的不同无疑会对检验结果产生影响和干扰。在传统的手工检测方法中，这种颜色差异的干扰通常用空白对照予以消除;在一些自动生化分析仪器上，为了节约系统资源和增加仪器的检测速度，大多数化验项目的检测程度均没有高设置标准的空白对照管，那么血清颜色对其结果是否有影响，影响有多大，怎样才能减小甚至消除这种影响?笔者以检测甘油三酯为例，做一个简单的实验:
   
　　我们在RA-500自动生化分析仪上用生理盐水代替试剂对溶血和黄疸标本分别进行了20次重复检测，其结果血红蛋白含量1g/L的标本测得甘油三酯的平均值为0.27mmol/L;总胆红素含量232mmol/L的标本测得甘油三酯平均值0.28mmol/L。可见血清颜色对RA系列自动生化分析仪检测甘油三酯有很强的干扰，笔者对其原因进行分析，发现其检测程序为不设空白对照管的终点法。因为该仪器出厂时设置的终点法操作程序在加入血清后不能再读空白，所以血清的颜色被累积入化学反应颜色的“加深”，从而使检测结果增高。因此，只要是以这种模式来进行试验操作的生化分析义，血清颜色都会影响它的检验结果。
   
　　如何消除这种影响?笔者尝试用双波长法进行补偿，但效果不理想;用增设标本空白来消除这种干扰，则使试剂消耗增加一倍，且生化分析仪的检测速度下降约50%，不利于系统资源的充分利用。为了解决这一问题，笔者对该仪器的操作程序进行了认真的分析，发现其一级速率反应法的操作程序比较其终点法可增加一次在加样后15s内再读空白的操作。于是笔者对它的一级速率法检测模式加以改良后用于甘油三酯做终点检测，结果显示可以有效地排除血清颜色对甘油三酯检验结果的影响。

　　1 材料与方法
    
　　1.1 材料 （1）RA-500自动生化分析仪。（2）元生甘油三酯检测试剂。
   
　　1.2 方法 在自动生化分析仪上设置一级速率法检测模式，标本3.5μl，试剂350μl，波长500nm，延迟时间15s孵育时间5min，RGT RATE=0;测得终点光密度减空白读数即得5min光密度增加值，再根据同样方法处理的标准溶液浓度和光密度即可求得每升血清中甘油三酯的含量。

　　2 实验结果
    
　　2.1 重复性试验 取一份定值1.20mmol/L质控血清，按上述方法测定20次经统计学处理，均值为1.19mmol/L，CV=1.22%，OCV符合世界卫生组织的规定。
   
　　2.2 干扰、对照试验 把溶血标本和黄疸标本用本法和有标本空白对照管的终点法分别进行20次检测对照。两种方法比较，结果经统计学处理，P>0.05;数据显示血清中含血红蛋白（1g/L）或总胆红素（232mmol/L）对实验结果无影响。
   
　　2.3 回收率测定 取已知含量的甘油三酯标准液一份，分别加入不同量的甘油三酯，然后再分别测定其含量，求得高、中、低值平均回收率为98.8%。
    
　　3 讨论
    
　　把一级速率法检测模式用于终点法检验项目，有两个值得注意的问题:一是由于这些反应的浓度与光密度增加的速度线性关系不够理想，所以孵育时间应足够长以测得其终点光密度为最好;二是为减少在延迟时间内的呈色损失，延迟时间应尽可能短，以试剂与标本刚好混合均匀为宜。
   
　　将一级速率法检测模式用于终点检测有一定的局限性，它要求呈色反应的速度不能太快，以15s左右开始反应，5min以内达到终点为最好。
    
　　我们将上述方法用于日常工作，两年多来，这一项目的检验结果均与临床相符合，医生反映良好。
   
　　可以参考我们的方法对其他分析仪器进行血清颜色的干扰试验，如果有干扰，可以采取上述方法或其他的应对措施使检验结果更加准确，更好地为临床服务，有兴趣的同行值得一试。 

　　作者单位:528301广东省顺德市伦教医院检验科