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【摘要】 目的 用改良7H9琼脂培养基对涂阳复治肺结核病人的痰进行直接药敏试验及评价。方法 采用改良7H9琼脂培养基进行痰直接药敏试验及分离培养，并与改良罗氏培养基进行对照比较。结果 40%痰标本在二周内可获得药敏结果，68%痰标本在三周内可获得药敏结果，93%标本在四周内可获得药敏结果，痰标本直接药敏试验与分离物间接药敏试验结果完全一致。结论 改良7H9琼脂培养基用于涂阳痰标本直接药敏试验，可同时对多种抗结核药物进行药敏试验，操作简便，结果准确，快速高效。
【关键词】 分支杆菌；结核；肺；直接药敏试验
A trial and evaluation on a direct drug sensitivity test on applying improved agar culture medium to phlegm mycobacterium tuberculosis
WANG Ping, ZHANG Bang-ming.
Tuberculosis Department, Second Hospital of Yichang, Hubei 443000，China
【Abstract】 Objective To do a direct drug sensitivity test by applying improved 7H7 agar culture medium to smear positive tuberculosis patients' phlegm; then, to evaluate this trial.Methods To apply 7H7 improved agar culture medium to a direct drug sensitivity test on phlegm; to culture it separately and compare it with improved Roche culture medium. Result As for drug sensitivity test, 40% phlegm samples can get results in 2 weeks, 68% phlegm samples in 3 weeks, and 93% in 4 weeks; results from direct and separate drug sensitivity test on phlegm samples are absolutely the same.Conclusion Improved 7H7 agar culture medium can be applied direct drug sensitivity test on smear positive phlegm, and drug sensitivity tests can be conducted on different antituberculosis medicine at the same time. It is easy to operate, and the results come out accurately and efficiently.
【Key words】 mycobacterium; tuberculosis; lung; direct drug sensitivity test
随着我国继发耐药率的增加，复治病例尤其是难治性肺结核的治疗，是各结核专科医院最感棘手的问题，对这类病人进行快速而准确的药敏试验，并根据药敏结果选择治疗方案，是减少结核病传播、提高治愈率的关键。可以避免盲目用药，减少费用，提高病人依从性。但目前常使用改良罗氏培养基做药敏试验，需先进行2～8周的分离培养，然后再进行药敏试验，不仅费时而且由于加热及蛋白质对药物的吸附等因素影响，药敏试验结果与临床治疗观察结果不完全相符。我院从解放军309医院引进改良7H9琼脂培养基用于复治病人涂阳痰标本进行直接药敏试验，结果表明此方法不仅快速，而且可同时对多种抗结核药进行药物敏感试验，结果可靠，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 一般资料 72份痰标本取自我院结核科住院复治涂阳患者，男61例，女10例。
1.2 培养基的制备 由解放军309医院结核中心临床实验室匡铁吉研究员提供指导，分离培养基及药敏培养基制作过程详见报道［1～3］。
1.3 痰标本前处理及接种 患者留晨痰10～20ml，放入干净玻璃瓶中，加2～5倍体积2%NaOH处理20min，用无菌管吸取0.15ml接种于分离琼脂培养基及含药琼脂培养基，放入37℃温浴及培养，同时用改良罗氏培养基进行分离培养。
1.4 结果观察 接种后每周观察一次，详细记录菌落数。
1.5 药敏试验 4周后改良罗氏培养基有40例标本有阳性培养物生长，依据结核病细菌学检验规程进行药敏试验。
2 结果
2.1 直接药敏试验报告时间 见表1。
表1 涂阳复治患者痰直接药敏试验报告时间 略
72份痰标本5例培养4周，1例为非典型分支杆菌生长，4例无论培养还是直接药敏试验均为阴性，有67例获得药敏结果，占培养总数的93.1%，这表明直接药敏成功率高。同时71例（98.6%）在4周内可报告药敏结果，仅有1例在第6周内分离培养基上才出现阳性生长物，因菌量少未获得药敏结果。本实验中还对35例涂阴痰标本做直接药敏试验，其中1例有少量非典型分支杆菌生长，其余为阴性，这说明涂阴痰标本不适合做直接药敏。
2.2 直接药敏结果 见表2。
表2 常用抗结核药物耐药 略
耐药率以SM最高，依次为INH、RFP、EMB、KM、PAS、OFLX。培养结果说明复治涂阳病人对OFLX、KM、PAS、AMK敏感占绝大部分，为进一步验证直接药敏试验结果的可靠性，在培养4周时，我们对琼脂培养基与改良罗氏培养基上同时有阳性生长物的40例标本做了间接药敏试验对照，结果表明间接药敏试验与直接药敏试验一致。以后根据药敏结果改用化疗方案，追踪观察20例病人，在治疗2个月后，无论痰菌阴转、症状改善及肺部病灶吸收方面均有明显好转，临床治疗结果与药敏结果相符。
本实验中还发现4例标本对INH有依赖性生长，6例对RFP有依赖性生长，7例有对SM有依赖性生长。本实验还发现，病菌量越多，痰菌生长速度越快。
3 讨论
用琼脂培养基进行结核菌培养及药敏试验，无论初生时间、阳性率均高于改良罗氏培养基已得到世人公认［1］，对复治涂阳痰标本进行直接药敏试验，结果表明痰标本在琼脂培养基上做直接药敏试验在4周可以报告结果。但是按照标准化规则，改良罗氏培养基药敏通常需8～12周，据报道，痰标本经前处理，致病性结核菌生长活力不受影响，而非致病性结核菌生长活力受影响较大，生长时间明显延迟［2］。本实验有1例标本6周分离培养基上出现阳性生长物，含药培养基无阳性生长物，由此可推测此菌株致病力较弱。
本实验比较了40例直接药敏试验与间接药敏试验，结果基本一致，本实验发现INH、RTP、SM耐药率高，与病人对这几种药知晓率高、多次间断使用有关。对PAS、KM、OFLX耐药率相对较低，与这几种药物近年来使用较少有关。
琼脂培养基药物是在琼脂培养基灭菌后加入，加之药物在琼脂中能自由扩散，故实验结果可靠，而改良罗氏培养基由于加热及蛋白质的吸附等问题至今未解决，药敏结果不完全可靠，本实验追踪观察了根据药敏结果更改化疗方案病人20例，临床上取得很好的疗效，表明琼脂培养基与临床治疗结果相符。
国外7H等系列琼脂培养基由于价格昂贵、设备要求高，仅在发达国家使用，国内匡氏在分支杆菌琼脂培养基研究中取得了突破性进展［5］。其改良7H9培养基在培养阳性率与BACTEC-MGIT960相似［6］，但由于BACTEC-MG等系列仪器和试剂昂贵，放射性培养基弃物难以处理限制了它的使用，其仅能做HRES 4种药物敏感试验，不能满足临床需要［4］。改良琼脂培养基报告药敏结果时间虽然较BACTEC系列分支杆菌培养药敏系统长，但4周内均能报告药敏结果，也显著短于改良罗氏培养基的8～12周，某些培养基虽然能进行快速培养［7］，但未见直接药敏报告。
复治菌涂阳病人耐药率高，与本地区DOTS覆盖范围小、结防人员及经费不足有关。表明需加强本地区结核病控制工作。根据药敏结果尽早选用敏感药物治疗复治涂阳肺结核是提高治愈率、减少耐药菌传播的关键。利用改良琼脂培养基可对多种药物进行直接药敏试验，即经济、快速、准确、操作简便，又能满足临床需要，值得推广。
【参考文献】
1 张莉．结核分支杆菌联合药敏试验.中国防痨杂志，1993，（15）：33．
2 宋礼章．我国三十年来抗结核药物耐药性及有关问题．中国防痨通讯，1986，（4）：32．
3 何合宁．512株结核菌耐药试验及297株分支杆菌菌型鉴定结果分析．中国防痨通讯，1987，（1）：7．
4 郭润志，杨永庆．结核菌放射性快速药物敏感试验．中华结核和呼吸杂志，1984，（6）：339．
5 匡铁吉．一种新型干燥培养基用于分支杆菌分离培养的研究．中国防痨杂志，1993，(1)：23．
6 王巍，李洪敏，王安生，等.BACTEC-MGIT960快速培养药敏对肺结核诊治的应用评价．中国防痨杂志，2003，12(6)：379-381．
7 熊礼宽，何林，曹开源，等．变色液体培养基系统快速鉴定结核分支持菌和耐药性测定．中华检验医学杂志，2001，24（5）：306-307.
作者单位： 443000 湖北宜昌，宜昌市第二人民医院结核科
(编辑：守 中)