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Home医源资料库在线期刊中华医学研究杂志2005年第5卷第11期

三种分枝杆菌L型培养基的比较

来源:中华医学研究杂志
摘要:【摘要】目的采用三种结核菌L型培养基对临床标本进行检测,并进行比较,以便为临床应用提供参考。方法采用相同的酸碱前处理方法,在相同的条件下,将260例痰标本和1株用INH诱导的稳定结核菌L型菌株接种在三种培养基上,观察其生长速度、菌落大小(液体培养基除外)、污染率、阳性率及菌落形态。结果结核菌L型在92-3TBL......

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  【摘要】  目的  采用三种结核菌L型培养基对临床标本进行检测,并进行比较,以便为临床应用提供参考。方法  采用相同的酸碱前处理方法,在相同的条件下,将260例痰标本和1株用INH诱导的稳定结核菌L型菌株接种在三种培养基上,观察其生长速度、菌落大小(液体培养基除外)、污染率、阳性率及菌落形态。结果  结核菌L型在92-3TBL液体培养基内生长速度最快(10±2d),阳性检出率以92-3TBL液体培养基和羊血培养基最高,两者与改良TSA-L培养基比较差异有显著性(P<0.05)。羊血培养基上的菌落大于改良TSAL培养基。污染率以液体培养基为高,但三者之间差异无显著性。结论  三种培养基各有特点,临床应用时,可根据情况任选一种固体培养基,可同时接种一支液体培养基。

  【关键词】  分枝杆菌L型;培养基;比较
   
  Comparison for three culture media of mycobacteria L-forms

  LU Run-sheng,LI Ding-yue,JIANG Shao-shuang,et al.

  Antituberculous Institute of Sichuan CDC,Chengdu 610036,China

  【Abstract】  Objective  To evaluate the quality of 3 kinds of L-forms culture medias,then to offer reference for clinical selection.Methods  All specimens were adopted identical pre-treatment methods,and respectively,inoculated on 3 kinds of culture media under the same condition,at the same time,stable L-forms that was induced with INH was inoculated into them.Then observing their growth speed,the size of colonies(liquid medium was excepted),as well as pollution rate,positive rate,and the forms of these colonies.Results  Of all media,L-forms grew rapidly in 92-3 TBL liquid culture medium(10±2d) than other media,the highest positive rate was found in 92-3 TBL liquid culture and in sheep blood culture medium,which have a statistical significant with improved TSA-L culture medium(P<0.05).Pollution rate is remarkable in liquid culture medium,but there is no statistical significant of these 3 media.The colony size on the sheep blood culture medium were larger than improved TSAL culture medium.Conclusion  Every medium has virtues of its own.We could choose a solid culture medium in clinical application,and select one liquid culture medium at the same time.

  【Key words】  mycobacteria of L-forms;culture medium;comparison

    从分离出第一株分枝杆菌L型[1]到现在,已过去40余年。但在结核菌L型检查方面并没有多大的突破,从而制约了临床检测工作的开展。本文以临床标本和诱导菌株为研究对象,观察已知的三种结核菌L型培养基,在检出率、污染率、菌落特征以及生长速度方面的情况。

  1  材料与方法

  1.1  标本来源  (1)H37RV经INH诱导传代(主要为圆球体)菌株[1]。(2)经X线片诊断和痰涂片镜检为分枝杆菌阳性的患者和X线片显示肺部有病灶,并伴有结核病的临床症状,抗炎治疗无效,又查不出结核杆菌的患者。

  1.2  培养基  92-3TBL培养基,由蚌埠医学院微生物教研室提供。改良TSA-L固体培养基,参照庄氏[2]配方配制。羊血TBL固体培养基,由本室配制[3]。

  1.3  方法  (1)痰标本经酸碱中和前处理后(即1份痰标本加1mol/L NaOH 3~4份,并加入2滴酚红作指示剂,待20~30min后用1mol/L HCl中和),每种培养基接种2支,每支0.1ml标本。(2)诱导菌株直接接种在三种TBL培养基内,每支0.1ml。(3)置37℃孵箱培养,观察其生长速度,污染率以及菌落形态。

  2  结果

  2.1  三种结核菌L型培养基检测260例痰标本的检出率  共检出77例结核菌-L型感染者,其中,L型阳性与杆菌阳性的45例;只有L型感染的为32例。92-3TBL培养基的检出率为94%(30/32);TSA-L培养基的检出率为84%(27/32);羊血TBL培养基的检出率为91%(29/32)。92-3TBL培养基与羊血TBL培养基的检出率无差异(t检验,P>0.05)。TSA-L培养基和羊血TBL培养基的检出率高于TSA-L培养基(t检验,P<0.05)。

  2.2  将诱导菌株接种在三种结核菌L型培养基内  固体培养基表面都可见典型的L型菌落,液体培养基为L型圆球体。

  2.3  三种培养基的污染率比较  92-3TBL培养基的污染率为8.8%(23/260);TSA-L培养基的污染率为6.9%(18/260);羊血TBL培养基的污染率为6.5%(17/260)。经统计学(单因素方差分析)处理,三种结核菌-L型培养基的污染率差异无显著性。

  2.4  生长时间的比较(天,±s)  92-3TBL培养基为(10±2)天;TSA-L培养基为(14±3)天、羊血TBL培养基为(14±3)天。

  2.5  菌落形态和菌体形态  固体培养基上的菌落为颗粒型(见图1)和典型油煎蛋型(见图2)。挑取菌落涂片检查(Z-N染色),所有培养阳性的菌落都由结核菌L型圆球体组成(见图3)。液体培养基中的细菌也均为圆球体,未见其他形态的细菌。

  2.6  培养基保存时间  92-3TBL液体培养基加入血清配好分装后,置4℃冰箱保存3年仍然可以使用;两种固体培养基(玻璃试管分装)置4℃冰箱保存9个月可以使用。

  3  讨论

  近年来,结核病发病率在全球呈上升趋势,结核菌的多耐药率也在逐年增多,这给结核病的疫情控制带来了许多困难。结核菌L型对结核病疫情的影响以及与其它疾病的关系也受到了较多的关注。近年来的研究结果显示,结核菌L型不仅会导致结核病复发,还会使结核菌的耐药率上升[4]。结核菌L型感染还与肺癌[5],恶性淋巴瘤[6],慢性前列腺炎[7]等疾病密切相关。因此,建立及时、准确的结核菌L型检测方法具有重要的临床意义。

    结核菌L型是结核菌失去或部分失去细胞壁的变异型,抗酸染色可阳性亦可阴性,菌体形态多变,与原菌的差异较大(可表现为丝状体、巨型体、抗酸颗粒或圆球体等),直接检测较为困难,常需培养才能作最后确诊。近年来,国内出现了多种结核菌L型培养基,如1984年庄玉辉等制备出改良TSA-L固体培养基,在国内首次诱导和培养出结核菌L型。1992年蚌埠医学院微生物教研室制备出92-3TBL液体培养基。2004年卢润生等制备出羊血TBL固体培养基。虽然这三种培养基,都有相关的病例检测报告,但未见系统比较的研究文献。

  我们用诱导菌株和临床标本,对三种结核菌L型培养基进行了检测比较。其结果显示:三种培养基都可以用于结核菌L型的检测。但结核菌L型在92-3TBL液体培养基内生长速度最快(10±2d),阳性检出率以92-3TBL液体培养基和羊血TBL培养基最高,两者与改良TSA-L培养基比较差异有显著性(P<0.05)。而羊血培养基上的菌落大于改良TSAL培养基(肉眼观察)。关于污染率,以液体培养基为高,但三种培养基之间差异无显著性。因此,在临床标本检测中,建议选用一种固体培养基的同时,再加上液体培养基培养,不但可以提高检出率,还可以增加检测结果的准确性。

  (本文图片略)

  【参考文献】

  1  Mattman LH.L Variation in mycobacteria.Am Rev Respir,1960,82:202.

  2  庄玉辉,李国利,韩元华.抗酸菌L型TSAL培养基的改进.微生物学通报,1986,2(13):94.
  
  3  卢润生,蒋绍双,李定越,等.结核菌L型培养基的改进.四川医学,2004,25(7):735.

  4  Golanov VS.Clinical sinificance of drug resistance of tuberculosis mycobacteria and L-forms.Tubercle,1991,12:27.

  5  汪万英,姚敏,郭彬.结核菌L型感染与肺癌关系.中国人兽共患病杂志,1997,13(2):79.

  6  汪万英,何杰,张世馥,等.结核菌L型与恶性淋巴瘤关系的研究.中国微生态学杂志,1995,7(3):47.

  7  王利娟,吴士彬.抗酸菌及其L型感染与慢性前列腺炎和不育的关系.中国微生态学杂志,1999,11(1):47.

  作者单位: 610036 四川成都,四川省疾病预防控制中心结核病控制所

  (编辑:秋  实)

作者: 卢润生李定越蒋绍双郑德福王召伟邓大志杨筠陈秋 2006-8-19
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