点击显示 收起
【摘要】 目的 通过对两种制片方法所做各种标本的分析研究，探索能够提高细胞学检查阳性率的方法。方法 用传统方法和液基细胞两种方法制片，研究两种制片的诊断结果。结果 传统涂片细胞学诊断结合了细胞形态、排列方式、背景等，比较容易诊断，但细胞厚薄不一，单个细胞易漏诊；液基制片所取标本量大，偶然性小，细胞平铺，单个细胞容易识别，但大多数失去了细胞排列方式和背景细胞。结论 两者配合，相互结合，同时制片，有利于提高癌细胞的检出率。
【关键词】 液基制片；细胞学检查； 传统涂片
The research about TCT used on nongynecology cell examination
ZOU Cui-wen, WANG Shan, HE Qing, et al.
Department of Tests Section,No 3 Hospital of Zibo City, Shandong 255029,China
【Abstract】 Objective To study and explore the ways of increasing the positive rate of cell examination by means of the analysis and study of the subjects which are made through two kinds of ways of making plates. Methods To study the diagnosis results of the two ways of making plate by means of traditional way and TCT. Results It is easy to diagnose by using the traditional way of smear cell diagnosis.Although it is easy to identify the individual cell,most of the individual cells lose the way of queuing and backgrounds due to the difference of the cells and the large amount of the subjects.Conclusion It will be helpful to increase the examination rate of the cancer cell by means of these two ways of making plates.
【Key words】 TCT; cytological examination;traditional making plate
超薄细胞检测在妇科方面的应用是近年来应用最广泛的一个方面，而在痰、尿、胸腹水等非妇科方面的细胞学检查应用也开始广泛推广使用［1］，而在这一方面的使用研究还处于探索状态，我们对59例诊断为癌细胞的标本同时做了传统涂片和超薄细胞制片研究分析，总结液基细胞制片是否优于传统的制片方法，能否提高检出率，对细胞学的诊断有无帮助，能否代替传统的细胞涂片。
1 材料与方法
1.1 标本来源 痰、尿、胸腹水标本细胞学检查时，我们同时做了液基细胞制片和传统细胞制片，我们选取了其中59例脱落细胞、组织病理诊断为癌的病例标本，进行分析。其中选取痰33例，尿12例，胸腹水14例。33例痰标本中，鳞癌9例，腺癌17例，小细胞癌7例，尿移行细胞癌12例，胸腹水14例。
1.2 方法
1.2.1 痰 我们先取痰用传统的拉片方法制成痰涂片2张，而后再取2～3ml痰加入20ml CytoLyt及1ml DDT（Dighrothreitol），振荡器振荡10min，使其破坏粘性，充分液化，有利于细胞分散，在保存液中利于制片，再1500r/min离心5min，弃去上清液，将沉淀物吸入20ml preservCyt保养液中混匀，用液基超薄细胞检测系统制片。涂片均用95%的乙醇固定，HE染色镜检。
1.2.2 尿 取混匀的尿5ml加入细胞离心器（cytospin）直接甩片,再取20ml尿于CytoLyt中，1500r/min 5min，弃去上清液，取沉淀加入20ml preservCyt 保养液中混匀，用液基制片机制片，如果有血尿，则在离心后的沉渣中加入10ml冰醋酸稀释液振荡10min，破坏红细胞后离心5min，取沉渣加入20ml PreservCyt保养液中混匀，制片方法同痰。
1.2.3 胸腹水 传统制片方法：取5ml胸腹水加入细胞离心器（Cytospin）直接甩片，再取20ml混匀的胸腹水加入CytoLyt中离心5min，弃去上清液，在沉渣中加入10ml冰醋酸稀释液振荡10min，1500r/min离心5min，弃去上清液，取沉渣加入20ml PreservCyt保养液中,制片方法同痰。
2 结果
2.1 痰 标本中传统涂片与液基制片同时阳性的标本，鳞癌6例，其中2例鳞癌液基制片阳性而传统涂片阴性，我们对这2例提示隔日重取标本重做传统涂片，显示阳性；1例鳞癌液基制片阴性而传统涂片阳性。腺癌17例，16例腺癌两种方法制片均阳性，1例液基制片阳性，传统涂片阴性，注意隔日重留标本检查阳性。7例小细胞癌，5例2种方法同时阳性，2例传统涂片阳性，液基制片阴性。
2.2 尿 移行细胞癌中两者同时阳性11例，1例液基细胞制片阴性而传统方法制片阳性。
2.3 胸腹水 14例癌细胞标本中，同时阳性的14例，均腺癌。
2.4 两种方法制片比较 见表1。通过对59例癌细胞标本的研究发现两种方法制片在非妇科细胞学检查中经卡方检验(P＞0.05)无统计学意义。
表1 两种方法制片结果比较（略）
2.5 癌细胞分型 两种制片方法在癌细胞分型上无差异。
3 讨论
对于痰来说：肺癌的癌细胞学阳性检出率为60%～70%，有的报告80%以上［2］。痰查癌细胞是当前确诊肺癌的主要方法之一，由于过高的阴性结果而使其受到影响［3］。所以如何提高阳性率是我们探索的一个方面。痰中的癌细胞分布不均，且常局限于某一部分，若选不中则成假阳性，特别是传统涂片法。鳞癌细胞多单个散在分布，形态多样，常可出现不规则，多边形、梭形、蝌蚪形，癌细胞界限一般比较清楚，但分化差的也不清楚，核染色质呈块状，或粗颗粒状，深染，有的可呈墨水滴样，分化差的鳞癌细胞可见核仁，分化好的一般看不到，成片鳞癌细胞可带有一定程度的鳞状上皮的排列特点，由于肿瘤组织特别是浸润癌和分化差的癌易发生出血坏死，所以，涂片中常常可见成片的红细胞和坏死细胞碎片，这种背景往往提示该涂片可能为阳性，可见到成片无核的“鬼”细胞，结合鳞癌细胞形态和背景诊断鳞癌比较容易。液基制片标本由于经过化痰处理、振荡、离心、制片机的充分混匀，而使痰中成片的细胞分散，而在片中散在的细胞多，坏死物质和炎性细胞大多被膜过滤去除，细胞总的量少、平铺、背景清晰，细胞散在，如果标本中癌细胞数量多，也比较容易诊断，当标本中癌细胞量少，没有成片的癌细胞和背景物，仅靠少量单个的癌细胞则很难作出诊断。传统涂片存在的不足是取标本量少，偶然性大，但对诊断来说比较容易。液基细胞制片所取标本量大，细胞是在充分混匀的情况下吸到膜上再转移到玻片上，细胞分散，检出的几率大。腺癌细胞常成团，癌细胞团大小不一，形状不一，极性消失，失去正常的蜂窝状结构，由于癌细胞繁殖迅速，而空间有限，所以常常相互积压，相互适应，呈镶嵌状改变。可呈现桑椹样，卵圆形，细胞界限不清楚，核膜厚，核染色质颗粒排列疏松，核仁大而明显，成团癌细胞核常重叠，单个癌细胞往往偏位，胞浆常有分泌空泡。传统涂片法癌细胞在片中多数是成团存在的，细胞形态相互挤压、抱团等样式，背景淋巴细胞多［4］，结合形态特点诊断起来也比较容易。液基细胞制片的玻片中癌细胞常单个，或以3～5个小团细胞存在，很少见到大团（＞20个）的腺癌细胞，因此多数是只靠细胞形态方面诊断。小细胞癌：一般认为起源于支气管上皮的嗜银细胞，癌细胞小，圆形、卵圆形或瓜子形，胞浆极少，细胞核约比淋巴细胞大半到一倍，有的比淋巴细胞小。单个存在时，如果经验不足很容易误认为淋巴细胞。核畸形明显，染色深。癌细胞排列紧密而不重叠，成片出现时，往往呈镶嵌样结构，单行排列时呈束状，常常成群出现［5］。传统涂片由于痰被牵拉而呈带状细胞索，掌握这个特点诊断起来也比较容易。而液基细胞制片中由于细胞散在，则不可能见到此现象。传统涂片中小细胞癌常常排列成脊椎样、葡萄状，液基细胞制片时膜的过滤作用把小的癌细胞及大部分的淋巴细胞被滤去，由于加入DDT使细胞散在更失去了大多数细胞成片分布及排列方式，仅见少量细胞脊椎样排列。液基细胞制片优点在于所取标本量多，标本内细胞充分混匀制片，所以同一个标本在玻片上总的细胞量不会很大，但检出癌细胞的几率大一些，而传统涂片在诊断上由于背景细胞沿着粘液丝的走势，细胞的分布、细胞团的大小排列方式等特点易于诊断。从尿方面来说，移行细胞癌涂片中常见大量坏死的细胞碎片及炎症细胞，尿不存在化痰样处理，移行细胞癌多是单个、小团状出现，传统制片方法与液基制片无多大差别，液基制片优于传统涂片的方面在于液基玻片上的红细胞较少，避免了由于红细胞大量的出现，干扰视野诊断。从胸腹水方面看，由于胸腹水多数是转移癌细胞的存在［6］，占98%以上，资料报道以腺癌最多占80%以上［4，7］。所以原发部位的不同胸腹水中癌细胞形态、排列方式及细胞团的大小也不尽相同。来自肺癌的腺癌细胞多以小团出现，呈腺样、梅花样；乳腺癌多以团出现，也有散在，细胞群呈中空圆球状，外围细胞密集重叠，中间细胞较疏松；卵巢癌紧密排列成团或乳头状，呈片状或矛头状镶嵌排列。有经验的工作人员可以从多方面推断癌细胞的来源，有助于指导临床诊断。而液基制片中的癌细胞由于加入冰醋酸稀释液振荡、离心、混匀等多步骤对细胞的处理，使成团的癌细胞分散，失去了原来的排列方式，破坏了大的细胞团的存在，所以液基制片中对癌细胞的原发部位推断造成一定的困难，但在癌细胞的检出率上还是有所提高。结论：两种方法制片，各有优缺点，传统的方法结合了背景排列方式，易于诊断；缺点是厚薄不一，单个癌细胞容易漏诊。液基制片细胞薄，背景清晰，单个细胞易于诊断，所取标本量大，克服了细胞不均，偶然性强的不足；缺点是多数失去排列方式和背景。当前基于两方面的优劣势，我们采取的诊断方式是：传统涂片见到典型的癌细胞，无论液基制片是否阳性，报告查到癌细胞（鳞癌、腺癌、小细胞癌等）；传统涂片未见到典型的癌细胞，而液基制片中出现阳性，则提示重留标本，重复常规涂片，直到在传统涂片中查到癌细胞才报告。两者配合，相互结合，同时制片，有利于提高癌细胞的检出率。
【参考文献】
1 何淑蓉，马正中，贺青.中华病理学杂志，2005，7(34)：7.
2 李玉松.病理技术.2000，6：966-984.
3 施春花.痰液脱落细胞K-ras基因检测对肺癌诊断的临床价值.国际呼吸杂志，2006，26：2.
4 方芳.浆膜腔积液中转移癌原发部位的细胞学研究.中华病理杂志，2005，10(34)：10.
5 梁英锐.脱落细胞检验.北京：人民卫生出版社，1991，22-99.
6 张煜和.浆膜腔积液脱落细胞端粒酶逆转录酶mRNA检测及其意义.中华消化杂志，2005，2(25)：2.
7 李永，尹芙蓉.痰液脱落细胞学检查在肺癌诊断中的价值.安徽卫生职业技术学院学报，2006，5(1)：86.
(编辑：李 木)
作者单位： 255029 山东淄博，淄博市第三医院
北京，北京医院病理科