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【摘要】 目的 通过动物实验来初步探讨大豆小分子肽（分子量300～700Da）的抗氧化作用。方法 采用昆明种小鼠,实验组小鼠分低、中、高［3.0g/（kg·d）、 6.0g/（kg·d）、9.0g/（kg·d ）］三个剂量组灌胃大豆小分子肽25天，测定小鼠耐缺氧能力的影响。老年雄性Wistar大鼠20只，随机分为老年对照组10只，老年实验组10只，老年实验组灌服大豆小分子肽，按6.0g/（kg·d）剂量，老年对照组灌服同体积的生理盐水。第60天末取样测定血红细胞和肝脏中丙二醛含量和超氧化物歧化酶(superoxide dimutase，SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)活性。结果 大豆小分子肽实验组中的高剂量组与对照组（生理盐水组）相比（小白鼠死亡只数），耐低压缺氧能力增强，老年实验组与老年对照组比较，血红细胞SOD酶活性升高(P<0.05)，肝脏组织SOD酶活性有升高的趋势，但无统计学意义(P>0.05) 。血红细胞与肝脏组织丙二醛含量有减低趋势，但无统计学意义(P>0.05)； GSH-Px酶活性升高(P<0.05)。结论 大豆小分子肽（分子量300～700Da）具有一定的提高老龄大鼠体内抗氧化酶活性、抑制脂质过氧化的作用。
【关键词】 大豆小分子肽；抗氧化；耐缺氧能力；SOD 丙二醛；GSH-Px
Preliminary study on anti-oxidative capability of soybeanminor peptides
GUO Hong,LI Mao-hui，YAN Ping,et al.
Dep of Preventive Medicine, Shenyang Medical College,Shenyang 110034，China
【Abstract】 Objective To study and discuss the anti-oxidationeffectsand the antiaging effectofsoybean minor peptides（MW300-700Da）inold rats．Methods Soybean minor peptides was administered to mice in treated group for 25 days by 3.0g/(kg·d）,6.0g/（kg·d），9.0g/（kg·d）respectively，and the changes of the bear anoxia abilitywere measured. Twenty Wister old rats were randomly divided into 2 groups：old control group and testing old group with 10rats in each group．Testingold group were perfusedwith soybean minor peptides6.0g/(kg·d）for 60 days．The rats old control group were fed with water in the same volume．At the end of the 60th days． biochemical index were measured:the activities of superoxide dismutase(SOD)and glutathione peroxidase(GSH—Px) and the concentration of malondialdehyde(MDA)in Hb and liver. Results compared with control group, the bear anoxia abilityof the administered mice in treated group were longer ,Compared with those in the old control group．The activities of S0D in Hb were decreased(P<0.0 5),the activity of SOD in liver had a increase tendency,but without any significant difference(P>0 05),and theconcentrations of MDA in Hb and liver had also a increase tendency，but without any significant difference(P>0.05).As compared with those incontrol the the activities of GSH—px had a increase tendency，(P<0.0 5).Conclusion Soybean minor peptides（MW300～700Da）have the tendencyin increasing the activity of antioxidant enzymes and decreasing lipid peroxidation．
【Key words】 soybean；minor peptides；anti-oxidation；bear anoxia ability；SOD，GSH-Px；MDA
在20世纪4O年代，一些西方学者用酶法改性蛋白质来补充极其缺乏的动物蛋白质，当时由于技术水平的限制，大 豆肽的研究无多大进展。到6O年代末，随着生物技术的进步和生命科学的发展，生理活性肽的生理功能逐步被 人们发现，并受到越来越多的重视，尤其是一些活性肽的结 构和生理功能逐渐明确，推动了活性肽的研究，也促进了大豆肽的研究与开发［1］。
大豆多肽是大豆蛋白质的水解产物，能有效刺激甲状腺激素分泌，促使胆固醇代谢生成胆汁酸。胆汁酸又被食物纤维所吸附，排出体外从而阻碍对胆固醇的吸收，起到降低胆固醇作用。我国于20世纪80年代中后期开始了大豆多肽的研究。目前在大豆多肽的研究与开发中存在的主要问题是大豆多肽与生理功能的关系［2］。大豆小分子肽的抗氧化以及抗衰老作用仅见体外实验报道，而动物体内实验尚少见报道。本实验是用我们实验室自己研制的大豆小分子肽，通过动物实验模型来探讨其抗氧化的作用，为更好地开发大豆小分子肽提供初步的理论依据。
1 材料与方法
1.1 原料及处理 大豆小分子肽的生产工艺：脱脂大豆饼→水提取→豆乳→粗胰酶预酶解→酶解乳→中性蛋白酶水解→酶解液→分离→大豆多肽→脱色→脱盐超滤→大豆小分子多肽液经浓缩→喷雾干燥→大豆小分子肽粉→用去离子水配成透明溶液以备灌胃用。该工艺制成大豆小分子肽采用高效凝胶过滤色谱法（HPGFC）测定：小分子多肽峰值分子量范围为300～700Da之间。
1.2 实验动物 实验动物昆明种小白鼠由本学院实验动物中心提供。Wistar种老龄大白鼠由沈阳药检所提供。昆明种小白鼠80只，雌雄各半，体重（18±2）g，按性别、体重随机分为1个对照组和3个试验组。分组后饲养观察3天，剔除不合格个体后灌胃，空白对照组灌胃适量生理盐水，各实验组灌胃大豆小分子肽溶液，剂量分别为每天3.0g/kg、6.0g/kg、9.0g/kg。连续25天，实验期间，小鼠自由摄食及饮水［3］。取鼠龄为20个月,体重为（381.75±39.23）g， Wistar老龄雄性大白鼠20只，按体重随机分为1个对照组和1个实验组。分组后饲养观察3天后灌胃，对照组灌胃生理盐水5ml/d，试验组灌胃大豆小分子肽溶液 6.0g/(kg·d）。饲养60天，实验期间，大鼠自由摄食及饮水［4］。
1.3 低压缺氧状态的影响组 小鼠连续给样第25天后，于末次给样后2h将小白鼠放入减压至负压80mmHg，持续时间为5min，记录小白鼠死亡只数［5］。
1.4 对大白鼠各组SOD、GSH-Px活性和脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量的影响［6］ 大鼠连续给样60天后，分别剪断股动脉，血用肝素抗凝，取肝脏用冰生理盐水冲洗，滤纸吸干，精确称重，加入冰生理盐水，玻璃匀浆器制成10％的组织匀浆，离心后吸取上清液备用。按微量邻苯三酚快速测定红细胞，肝脏的SOD活性。而GSH-Px活性和脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量测定采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒。
1.5 统计学处理 所有数据输入计算机，用SPSS 10.0 For Windows统计软件进行单因素方差分析，统计处理数据用x±s表示。组间比较用t检验，显著性水平为P<0.05。
2 结果
2.1 大豆小分子肽对低压缺氧的影响 大豆小分子肽实验组中的高剂量组与对照组（生理盐水组）相比（小白鼠死亡只数），耐低压缺氧能力是否明显增强，差异有显著性（P＜0.05）。见表1。
2.2 大豆小分子肽对老年大白鼠SOD活性的影响 大豆小分子肽实验组与对照组相比，实验组的红细胞（Hb）SOD活性显著增加(P<0.05)，而肝脏的SOD活性有增加趋势，但两组没有统计学意义(P>0.05)。见表2。
表1 大豆小分子肽对低压缺氧的影响 略
表2 大豆小分子肽对的红细胞（Hb）肝脏的SOD活性影响 （略）
2.3 大豆小分子肽对老年大白鼠谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性的影响 大豆小分子肽实验组与对照组相比，实验组的红细胞（Hb）GSH-Px活性显著增加(P<0.05)，而肝脏的GSH-Px活性有增加趋势，但两组没有统计学意义(P>0.05)。见表3。
表3 大豆小分子肽对的红细胞（Hb）肝脏的GSH-Px活性影响 （略）
2.4 大豆小分子肽对老年大白鼠的血红细胞与肝脏组织中丙二醛含量的影响 大豆小分子肽实验组与对照组相比，实验组的红细胞（Hb）和肝脏中的MDA含量虽有降低的趋势，但两组没有统计学意义(P>0.05),见表4。
表4 大豆小分子肽对的红细胞（Hb）肝脏的丙二醛含量影响 （略）
3 讨论
目前一般认为，机体的衰老与自由基有很大的关系。机体在正常代谢过程中可以产生多种活性氧，如超氧阴离子(.O2-)、羟自由基(.OH)、过氧化氢（H2O2)等，其中.OH与机体中的多不饱和脂肪酸(LH)作用，可以产生LPO。LPO 的最终代谢产物，如小分子的醛、酮等可以与生物大分子作用，使其失去生理功能，最终导致机体损伤。生物体内的抗氧化物酶，如SOD、GSH-Px可以清除活性氧，对生物体起保护作用，因此SOD、GSH—Px活性大小，LPO浓度的高低可反映出机体被氧化损伤的程度［7］。
丙二醛(MDA)是脂质过氧化(脂褐素)LPO代谢物，其含量高低可反映体内自由基的反应程度，脂质过氧化物可引起细胞代谢及功能障碍甚至死亡，故丙二醛(MDA)的含量常可间接反映出机体受自由基攻击程度［8］。
实验表明：大豆小分子肽可明显增加血红细胞（Hb）SOD、GSH—Px活性，而对肝组织中二酶的活性却不明显，对MDA含量的抑制作用亦不明显。
有关活性肽的抗氧化机制还不清楚，可能是通过增加SOD、GSH-Px的活性，加快体内自由基的清除，从而抑制肝脏内过氧化脂质的二级分解产物MDA的含量，有利于保护细胞免受过氧化损伤,对自由基有关的疾病有一定的防治作用。但具体是哪种物质对抗氧化起主要作用，尚需进一步的研究［9］。
本实验大豆小分子肽只能增加血红细胞（Hb）SOD、GSH—Px活性，而对肝组织的活性却不明显，并对MDA含量几乎没有抑制作用。仍需进一步实验研究来解释。
肽类功能性食品被国内外专家称为21世纪食品。功能性食品是高附加值产品，关系到各年龄段人们的健康保健，市场潜力巨大。东北地区又是大豆的主产区，大豆小分子肽的开发可为食品工业提供了更为优质的食品辅料，同时为功能性食品的开发，提供了强大的物质基础。在实现经济和社会效益同时，又拉动了大豆种植业，激活了大豆初加工工业，也会促进交通运输、水、电、煤等基础产业的发展。
【参考文献】
1 蔡木易.大豆肽的国外开发现状.中国食品报，2004,（3）：18.
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4 李茂辉，叶丽杰，卢桂华,等. 心肌多肽抗疲劳效应的实验研究.现代预防医学,2006,33（7）：1097-1099.
5 Gopalakrishnan J，Decker E A，Means W J．Antioxidant activity of mechanically separated pork extracts．Meat Sci，1999,52：101-110．
6 陈勤．抗衰老研究实验方法．北京：中国医药科技出版社，1996,499-500.
7 凌智群，谢笔钧．莲房原花青素对氧自由基和脂质过氧化的作用．营养学报，2002,24(2)：121-125．
8 庞战军，周玫，陈瑗．自由基医学研究方法．北京：人民卫生出版社，2000,118-120．
9 孙普存，张建中，段绍瑾．自由基生物学导论，合肥：中国科学技术大学出版社，1999,19-92．
作者单位：1 110034 辽宁沈阳，沈阳医学院预防医学系卫生检验中心
2 110031 辽宁沈阳，沈阳体育学院运动生化教研室
3 110001 辽宁沈阳，辽宁省疾病预防控制中心
(编辑：守 中)