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首页医源资料库在线期刊中华医学研究杂志2007年第7卷第6期

江西省萍乡市HIV流行状况分析

来源:《中华医学研究杂志》
摘要:【摘要】目的对江西省萍乡市艾滋病感染者进行HIV基因亚型分析,了解我市HIV流行情况、亚型种类、毒株来源及其变异等,为我市预防控制决策提供技术资料。方法传统流行病学与分子流行病学相结合,对我市8例HIV感染者进行流行病相关因素分析和基因序列、系统进化分析。结果我市HIV感染人群中流行的毒株主要为HI......

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【摘要】  目的 对江西省萍乡市艾滋病感染者进行HIV基因亚型分析,了解我市HIV流行情况、亚型种类、毒株来源及其变异等,为我市预防控制决策提供技术资料。方法 传统流行病学与分子流行病学相结合,对我市8例HIV感染者进行流行病相关因素分析和基因序列、系统进化分析。结果 我市HIV感染人群中流行的毒株主要为HIV-1 CRF01-AE。结论 目前我市HIV-1感染者中流行毒株为 CRF01-AE 、主要在吸毒人群中传播,HIV流行已从吸毒人群向性乱人群蔓延,我市应加强对吸毒人群和性乱人群的行为干预。

【关键词】  HIV/AIDS; 流行; 分析

    人类免疫缺陷病毒(HIV)基因具有高度的变异性,使其在传播过程中产生出许多相对独立的基因序列特性的亚型,并在全球范围的流行蔓延过程中形成一定的地区性分布特点。根据HIV-1基因组中变异性较大、同时也被研究得最多的膜蛋白基因(ENV)和核心蛋白(GAG)基因序列的同源性,目前流行于全球的HIV-1分为三组,M组(主要组)、O组(外围组)和N组,M组内又可分为A~J 10个亚型,各亚型间的基因离散率是20%~35%[1,2]。HIV-1的分子流行病学研究不仅可追踪传染源研究毒株的变异规律,而且为我国疫苗及HIV-1诊断试剂的研制提供基础资料。

    我市自1996年在打工回家人员中发现首例HIV-1感染者以来,相继在吸毒者、临床病人、无偿献血等各种人群中发现了HIV感染者。而其中主要的传播途径为静脉吸毒共用注射器。从2000年开始,我市HIV感染在吸毒人群中呈局部爆发流行趋势。为掌握我市HIV-1感染人群流行传播的特点,监测和确定HIV-1在某一流行区的基因变异及新亚型的出现,分析其变异性和地区分布特点,追踪传染源和发展趋势,为政府部门制定相应的预防控制措施提供依据。我们将我市送省CDC部分HIV-1感染人群进行了基因亚型分析,现将结果报告如下。

    1  材料与方法

    1.1  流行病学调查  对HIV-1感染者进行分子流行病相关因素调查,主要采取问卷调查并结合个人深入访谈。

    1.2  样品收集和处理  对患者进行流行病学调查后,取无菌试管并编号,抽取患者静脉血5~10ml,去除针头加到含有0.15%EDTA抗凝剂的试管中,立即混匀,然后提取核酸(主要参照QIAGEN公司DNA Blood Mini Kit操作步骤)。

    1.3  PCR扩增  选择HIV病毒基因序列作为研究对象,使用套式PCR的方法,扩增HIV-1 env C2-V3区的基因序列,对得到的基因序列进行亚型分析和系统进化分析。套式PCR方法所使用的引物见表1。以ED5/ED12为外侧扩增引物,进行第一轮PCR,反应条件为:94℃ 2min,55℃ 1min,72℃ 2min,1 个循环;94℃ 30s,55℃ 30s,72℃ 1min30s,30个循环;72℃延伸10min, 4℃保温。取第一轮产物5 μl,以E7/E8作为内侧引物进行第二轮扩增,反应条件如下:94℃1min,55℃ 1min,72℃ 1min30s,1 个循环;94℃ 30s,55℃30s,72℃1min,共35个循环,72℃延伸10min,4℃保温。表1  PCR引物序列表

    1.4  PCR产物纯化  对PCR产物进行纯化,使用Qiagen Gel Extraction试剂盒,按使用说明操作。

    1.5  基因序列测定和分析  使用美国应用生物系统公司(ABI)的377型DNA全自动序列分析仪和荧光标记末端终止物循环测序试剂盒,进行基因序列测定,测得的序列用ABI公司的SEPED软件进行编辑校正,序列的排列,比较和同源性等分析使用GCG软件包。并使用MEGA(version 2.1)进行系统树分析。

    2  结果

    2.1  流行病相关因素调查  见表2。表2  萍乡市HIV-1基因分型样品流行病相关因素一般情况和亚型
    本次调查的HIV感染者8例,男7例,女1例,确认时间分别为1996、1999、2000、2001、2002年,年龄最小的为19岁,最大的42岁。静脉吸毒感染7例,性接触感染1例。在静脉吸毒感染者中有5例共用注射器伙伴为1~3人,其余2例在20人以上,全为本市人,提示在吸毒人群中还有大量的感染者存在。

    2.2  亚型结果分析  见表3。表3  萍乡样品与CRF01-AE参考株间的基因距离 从样品中提取核酸,经套式PCR扩增env基因C2~V3区,最终得到了8份样品的基因序列,将测序结果进行编辑整理后,根据测得的C2~V3区及其相邻的大约340个核苷酸序列,应用Pileup和Pretty 程序进行有关排列和比较,与HIV-1 M组各个亚型国际参考株的基因序列进行比较, 8份样品与CRF01-AE.TH.93TH253相近,亚型分类属于CRF01-AE,与CRF01-AE泰国代表株(CRF01-AE.TH.90.CM240)平均基因距离为9.47±2.71; CRF01-AE亚型样品中Jix0201、Jix0202、Jix0210、Jix0212、Jix0213、Jix0219、Jix0226、Jix9801聚在一起,有很近的基因距离,组内的基因距离仅有2.93±1.40(n=13),表明这些感染者具有相近的流行病学背景,来自同一传染源,这与这些感染者共用注射器的流调资料正好吻合。

    3  讨论                                                                  

    我市以CRF01-AE流行毒株为主,从本研究中基因距离的结果来看, CRF01-AE亚型毒株间的基因距离为2.93±1.40(n=8),根据HIV-1毒株基因平均每年以0.5%~1%的速率变异计算[1,2],可以认为,CRF01-AE亚型毒株在我市内局部暴发流行时间大约有2年半左右,从与国际其他地区和我国流行的重组毒株比较结果看,我市CRF01-AE亚型毒株与泰国CRF01-AE亚型毒株相近,这表明流行于我市的CRF01-AE亚型毒株与泰国流行的CRF01-AE亚型毒株有着密切的关系。HIV-1 CRF01-AE毒株1989年最先在泰国发现,主要在性传播人群中流行扩散,随后经有静脉吸毒妓女和嫖客造成在吸毒人群中广泛传播,改变了以往B亚型感染为主的流行格局[3,4]。近些年来经过贩毒通道向金三角及其周边地区如中国云南、广东、广西等地扩散漫延,并在静脉吸毒和性乱人群中流传[5,6] 。JIX9801,1997年在广西检出,后返回萍乡,在当地与多名男性(包括吸毒者)有过性关系,感染了不少人,并由此在萍乡和南昌静脉吸毒人员和有关人员中传播。但从基因距离看,其余7例CRF01-AE亚型与JIX9801的基因距离,在静脉吸毒人员7例中最大的为18.28,最小的为8.9;性接触感染者2例中,最大的为6.76,最小的为5.71,(与其他CRF01-AE亚型基因距离均在9.03以上),表明萍乡市性接触感染者与JIX9801有关。而静脉吸毒人员与JIX9801的基因距离相对远一点,是否因经性-静脉吸毒经血传播或是最先感染的静脉吸毒人员个体差异造成毒株的特殊的变异,有待进一步探讨。    

    综合上述分析结果,我市HIV-1人群中流行的毒株为CRF01-AE,其他 CRF-BC B(Bˊ)、C三种,在我市还未发现,并也在性传播人群中漫延,另外重组亚型毒株CRF-BC已进入我省,这将给我市艾滋病的防治带来新的挑战,因此,应加强对吸毒人群和性乱人群的行为干预。

【参考文献】
  1 Weniger BG,Yutaka Takebe,Ou CY,et al.The molecular epidemiology of HIV in Asia.AIDS,1994,8(supp12):1.

2 Janssons W,Fransen K,Loussert A,et al.Genetic and phylogenetic analysis of env subtype G and H in central Africa.AIDS Res Hum Retroviruses,1994,10:877.

3 Kalish ML, Baldwin A,Raktham S,et al. The evolving molecular epidemiology of HIV-1 envelope subtypes in IDU in Bangkok, Thailand; implications for HIV vaccine trials.AIDS,1995,9:851.

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5 冯铁建,邵一鸣,李良成,等.深圳地区HIV-1流行毒株的env基因序列测定和亚型分析.中华传染病杂志,1998,16(4):202-205.

6 陈杰,苏玲,梁绍伶,等.广西壮族自治区HIV-1流行毒株的基因序列测定和亚型分析.病毒学报,1998,14(3):240-244.

7 邢辉,潘品良,苏玲,等.1996~1998年中国流行的E亚型艾滋病病毒1弄毒株的分子流行性学研究.中国性病艾滋病防治杂志,2002,8(4):200-203.


作者单位:1 337000 江西萍乡,萍乡市疾病预防控制中心(Δ通讯作者)2 江西南昌,江西省疾病预防控制中心3 江西萍乡,萍乡市妇幼保健院

作者: 曾建国, 易志强, 张春之,邓兰, 舒红萍, 刘继连, 2008-7-4
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