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【摘要】 目的 本试验通过研究脑灵片对青木香中马兜铃酸A含量的影响，以初步探讨青木香的解毒问题。方法 青木香与脑灵片共煎后用RP-HPLC法测定马兜铃酸A的吸收值，观测其含量的变化情况。结果 加入脑灵片后，青木香中马兜铃酸A的含量明显降低。结论 脑灵片可显著降低青木香中马兜铃酸A的含量。
【关键词】 脑灵片 青木香 马兜铃酸A 减毒
Preliminary study on reducing poison effects of Naoling tablet to Aristolochia debilis
SUN Yun, FENG Gao-ping,CHEN Lin-xi .Zhangye Institute for Drong Control, Gansu Zhangye 734000，China
【Abstract】 Objective To study the effects of Naoling tablet on Aristolochia acid A from in Aristolochia debilis,preliminary study on reducing poison effects of Naoling tablet to Aristolochia debilis.Methods Determined absorption of Aristolochhia aicd A by HPLC after Aristolochia debilis and Naoling tablet common boilling, to observed change of Aristolochia acid A.Results Aristolochia acid A content of Aristolochia debilis was markedly decreased after Naoling tablet was added.Conclusion Naoling tablet can markedly decreased Aristolochhia aicd A content of Aristolochia debilis.
【Key words】 naoling tablet;aristolochia debilis;aristolochia achid A;reducing poisonousness
青木香的药用标准虽然已被取消，但其中所含主要毒性成分马兜铃酸的解毒一直是许多专家致力解决的问题。国内有1例服用“木通”导致肾损害，停用肾透析后连服中药六味地黄丸加减使病情稳定，肾功能恢复正常的报道［1］。为了深入研究脑灵片对青木香的减毒作用及机理，我们设计了以下实验。
1 仪器与试药
1.1 实验仪器 日立L6000型高效液相色谱系统，包括L-4200H UV-VIS Detector D-2500型色谱数据处理仪。MA240D电子分析天平，上海第二天平仪器厂。GQ7OE-5型红外快速干燥箱，上海市吴淞五金厂。数显恒温水浴锅，金坛市大地自动化仪器厂。
1.2 药物 青木香，为马兜铃科植物马兜铃Aristolochia debilis Sieb. et Zucc.的干燥根，购自中国生物制品检定所，批号：919-9001。脑灵片（糖衣片），甘肃省河西制药有限公司，批号：050301。
1.3 试剂 马兜铃酸A对照品（aristolochic acid A,以下简称AA-I），中国药品生物制品检定所，批号110746-200406。甲醇、乙腈为色谱纯，山东省禹王实业总公司禹王化工厂。无水乙醇、冰醋酸为分析醇，中国安徽医药公司。水为纯化水。自来水，符合国家饮用水标准。
2 色谱条件
色谱柱：依利特Hypersil ODS25 (4.6mm×250mm),柱号：E:1417177。流速：1ml/min。柱温：室温。检测波长：250nm。进样量：10μl。流动相:乙腈-（水+冰醋酸）=48：52，其中,水：冰醋酸=62.5: 1。理论塔板数不低于2000。
3 试验方法与结果
3.1 标准溶液的制备 称取AA-I对照品7mg，置于50ml量瓶中，加无水乙醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.14mg/ml的对照品储备液，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液2.00ml，于10 ml量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，即得浓度为0.028mg/ml的AA-I对照品溶液，作为对照品溶液。
3.2 供试液的制备
3.2.1 青木香样品溶液的制备 精密称取青木香样品0.6g，置于200ml烧杯中，加120ml自来水，煎煮30min，过滤，收集滤液，残渣加80ml自来水，煎煮30min，过滤，收集滤液，合并2次滤液，置于水浴上，浓缩至干。用适量的无水乙醇溶解并完全转移至10ml的量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀。放入冰箱冷藏，静置过夜。抽取上清液过滤，弃去初滤液，收集续滤液，放入1ml塑料离心管中，作为供试液1。
3.2.2 青木香与脑灵片供试液的制备 分别取青木香样品、脑灵片粉末少许，各精密称取0.6g置于200ml烧杯中，混合两种药物，加入120ml自来水，按3.2.1项下制备青木香样品溶液的方法进行操作，其制备液作为供试液2。
3.3 AA-I的定性分析 分别吸取供试液1和对照品溶液，注入液相色谱仪,按2项下的色谱条件，测绘其色谱图。色谱图见图1。
3.4 标准曲线的制备 精密吸取对照品储备液1、2、3、4、5、6ml，分别置10ml的量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度。按2项下的色谱条件，依次进样测定，测得AA-Ⅰ的峰面积。以AA-Ⅰ的进样量（μg）为横坐标，以对应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线。由标准曲线可知，在0.08～0.40μg之间，进样量与峰面积之间呈良好的线性关系，回归方程为Y=1.7×105X+5248，相关系数R=0.9999。
3.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μl，按2项下的色谱条件，注入液相色谱仪，测定对照品溶液的峰面积，平行测定5次。结果见表1，表明精密度良好。表1 精密度试验结果
3.6 稳定性试验 在2项的色谱条件下，精密吸取供试液110μl，注入液相色谱仪，测定，然后于2、4、8、12、24h各测定1次，结果见表2，表明供试品溶液在24h内测定结果稳定。表2 稳定性试验结果
3.7 重复性试验 取青木香样品0.6g，精密称定，共称取5份，照青木香样品溶液的制备项下操作，制成供试品溶液。在2项下的色谱条件下，分别精密吸取供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算AA-Ⅰ的质量。结果见表3，说明该方法的重复性良好。
3.8 加样回收率试验 取0.2ml供试液1，用无水乙醇定容为1ml，作为供试液3。取0.2ml供试液1，加入标准溶液0.15ml，用无水乙醇定容为1ml，作为供试液4。取标准溶液0.15ml，用无水乙醇定容为1ml作为供试液5。取以上各供试液10μl，按2项下的色谱条件测定，测定结果:回收率为（99.5±0.5）%，RSD为0.5%。
3.9 青木香与脑灵片共煎前后AA-Ⅰ含量的变化（AA-Ⅰ的定量分析） 分别取供试液1、2，按2项下的色谱条件测定，并计算各样品中AA-Ⅰ的含量，结果见图2及表4。表3 重复性试验结果表4 青木香与脑灵片共煎后的 AA-I含量debilis and Naoling Table common boilling 结果表明，青木香与脑灵片共煎后，马兜铃酸A含量降低了55.3%，可见，脑灵片可以明显降低青木香中马兜铃酸A的含量。
4 讨论
国内外学者现已公认，青木香的肾毒性与其所含主要成分马兜铃酸有关，而其中马兜铃酸A为主要毒性成分［2］，且含量较大，故将马兜铃酸A作为测试指标。在提取方法上为了尽量符合临床实际，我们选用了加热水提的方法，提取次数为2次。
青木香行气止痛，解毒消肿，降血压，主治胃肠疼痛，风湿性关节炎，跌打损伤，咽喉肿痛，高血压病，外用治牙痛，毒蛇咬伤等症［3］。湿热之邪极易伤阴，同时青木香行气亦易伤阴。故需配伍养阴药，使邪正兼顾。肾阴为一身津阴之根，脑灵片既补气血，养心肾，又滋补肾阴，增强正气，能防阴液之再耗。其滋阴之作用，恰恰能制约青木香的行气伤阴之性。因而脑灵片能够降低青木香行气伤阴的副作用。
本研究表明，脑灵片可以明显降低青木香中马兜铃酸A的含量，为青木香等含马兜铃酸类中药的解毒提供了科学依据和新的思路。
【参考文献】
1 李青.木通中毒致肾功能不全.山东中医杂志，1997，16（2）：87.
2 Vanhaelen M,Vanhaelen-Fastre R,But P, et al.Identification of aristolochin acidi in Chinese herbs.Lancet,1949, (343):174.
3 徐国钧.生药学.北京：人民卫生出版社，1987，157.
作者单位：734000 甘肃张掖，张掖市药品检验所