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【摘要】 目的 观察仙甲汤对实验性前列腺增生大鼠血浆胰岛素生长因子1(IGF-1)和其结合蛋白3(IGFBP-3)含量的影响。方法 去势加丙酸睾酮注射法复制大鼠前列腺增生模型,放射免疫法检测大鼠血浆IGF-1和IGFBP-3含量的变化。结果 模型组与正常组相比,IGF-1和IGFBP-3值明显增加(P<0.01),仙甲汤组较模型组大鼠血浆IGF-1和IGFBP-3含量不同程度的减少。结论 胰岛素生长因子1及其结合蛋白与前列腺增生有关联,仙甲汤可以抑制血浆胰岛素的分泌。
【关键词】 前列腺增生 胰岛素生长因子1 胰岛素生长因子结合蛋白3 仙甲汤
在前列腺增生发生过程中,生长因子起了很大作用。我们的前期研究工作表明[1],表皮生长因子(EGF)与前列腺生长调节有关,对前列腺上皮细胞有促分裂作用;转化生长因子β1(TGF-β1)是细胞有丝分裂抑制因子,具有直接促进前列腺细胞凋亡的作用,补肾泻肝法具有调节生长因子从而抑制前列腺增生的作用。新近研究表明,胰岛素生长因子1(IGF-1)和其结合蛋白3(IGFBP-3)对前列腺细胞有促分裂和抗细胞凋亡作用,从而在前列腺增生过程中起重要作用[2]。因此,我们将进一步研究补肾泻肝法对前列腺增生胰岛素生长因子的影响。
1 材料与方法
1.1 实验动物 3月龄雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠90只,体重(300±20)g。由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供。
1.2 药物及制备 (1)仙甲汤:由淫羊藿、枸杞子、穿山甲、丹参、菟丝子、败酱草等组成,由湖北中医学院附属医院制剂室制成浸膏(每1ml含生药4.68g),临用时用双蒸水配成浸膏混悬液。其中仙甲汤低剂量组每1ml含生药1.17g、中剂量组每1ml含生药2.34g、高剂量组每1ml含生药4.68g;(2)丙酸睾酮注射液:10mg/(ml·支),上海第九制药厂生产(批号001002);(3)癃闭舒胶囊:每粒含成药0.3g,石家庄科迪药业有限公司生产(批号010601),临用时用双蒸水配成0.0324g/ml的混悬液。
1.3 造模与分组 将大鼠普通饲养1周以适应环境,并经普通观察无异常后,随机取15只作正常对照组,其余75只进行造模。造模方法按文献[2],并稍做改进。先用戊巴比妥钠麻醉后,常规消毒皮肤,经阴囊摘除双侧睾丸,残端处结扎,以确保止血,缝合皮肤,肌肉注射青霉素20万U/只。待大鼠苏醒后,随机分为模型组、癃闭舒组、仙甲汤低剂量组、仙甲汤中剂量组、仙甲汤高剂量组。从去势第8天起,每只大鼠皮下注射丙酸睾酮1mg/(300g·d),连续30天。
1.4 给药剂量与方法
1.4.1 正常组与模型组 普通饲养,从去势第8天起,按1ml/100g体重给予生理盐水灌胃,每日1次,连续30天。
1.4.2 仙甲汤低、中、高剂量组 从去势第8天起,按1ml/100g体重分别给予低、中、高浓度仙甲汤浸膏混悬液灌胃,每日1次,连续30天。
1.4.3 癃闭舒组 从去势第8天起,按1ml/100g体重给予癃闭舒混悬液灌胃,每日1次,连续30天。
2 检测方法与实验结果
2.1 取材与制样 给药30天后,每组随机取10只大鼠,眼球取血,静置30min,2000r/min离心15min,用吸管吸取上置血清,放入-20℃冰箱保存备检。采用放射免疫法检测各组大鼠血浆胰岛素生长因子1(IGF-1)和其结合蛋白3(IGFBP-3)含量。胰岛素生长因子1(IGF-1)和其结合蛋白3(IGFBP-3)放射免疫试剂盒由南京建成生物技术研究所提供(按试剂盒提供方法进行)。
2.2 统计学处理 实验数据均以x±s表示,用t检验进行统计分析。
2.3 实验结果 模型组大鼠血浆胰岛素生长因子1、胰岛素生长因子结合蛋白3含量明显高于正常组,二者差异有非常显著性(P<0.01),而仙甲汤组和癃闭舒组较模型组显著下降。其中仙甲汤中剂量组与癃闭舒组差异无显著性(P>0.05),仙甲汤高剂量组明显低于癃闭舒组,二者差异有显著性(P<0.05),仙甲汤低剂量组则显著高于癃闭舒组(P<0.05)。仙甲汤对前列腺增生大鼠血浆IGF-1、IGFBP-3含量的影响见表1。表1 对前列腺增生大鼠血浆IGF-1、IGFBP-3的影响 注:与正常组比较,△P<0.05,△△P<0.01;与模型组比较※P<0.01;与癃闭舒组比较▲P<0.01
3 讨论
胰岛素生长因子1具有促进生长发育,促进物质代谢,降低血糖,促进细胞分裂增殖作用。由于它能介导生长激素的作用,也曾被称为生长介素。它对细胞的生物效应是通过其受体来实现的[3]。随着分子生物学的发展,已广泛受到重视。
胰岛素生长因子1是一个由70个氨基酸组成的单链多肽,在结构上与胰岛素45%相似。它是由垂体分泌的生长激素(GH)作用于肝脏等外周组织和器官合成并分泌的,分泌入血的胰岛素生长因子1与其结合蛋白结合(主要为IGFBP-3),运输到靶组织,与靶组织上的受体(IGFR)结合而发挥其生物学效应[4]。它通过促使细胞由G1期进入S期而促使多种细胞的增殖[5]。
胰岛素生长因子1是一种重要的促细胞生长和分化因子,是潜在的上皮细胞有丝分裂源,胰岛素生长因子-1mRNA在人体许多组织中表达,包括肝、脑、肾、皮肤、乳腺、胰、肺、子宫、卵巢、胃肠道等,其中在女性生殖系统作用和表达研究较多[6,7]。由于胰岛素生长因子-1mRNA水平在胚胎后期或出生后开始明显增加[8],显然细胞增殖、身体发育等与胰岛素生长因子1表达密切相关。
那么,是什么因素导致胰岛素生长因子1在前列腺增生组织中高表达,目前还不清楚,但这种只在胚胎期才具有的高表达使我们想起了“胚胎状态再唤醒”假说[9],即某些因素刺激下前列腺基质细胞返回到类似其在胚胎时期的状态,诱发细胞内一些基因大量表达,产生更多的肽类因子、癌蛋白等促细胞生长、增殖,使细胞处于一种无序的快速生长状态,破坏了细胞内的“稳定状态”,导致其发生病理生理改变。胰岛素生长因子1受体为一种跨膜蛋白,同时也是一种酪胺酸激酶,与其配体结合引起一系列生物学反应。
有研究报道,胰岛素生长因子1可促进前列腺上皮细胞的生长和腹侧前列腺重量的增加,并且胰岛素生长因子1受体在上皮细胞中表达[10]。本实验结果表明模型组大鼠血浆胰岛素生长因子1、胰岛素生长因子结合蛋白3含量明显高于正常组,证实了胰岛素生长因子1及其结合蛋白与前列腺增生有关联。其中仙甲汤高剂量组接近正常组,说明仙甲汤可以抑制血浆胰岛素的分泌。
【参考文献】
1 曹继刚,周安方.仙甲汤对前列腺增生大鼠前列腺组织EGF、TGF-β1表达影响.中医药学刊,2004,9.
2 GiovannuDci E.Insulin-like growth kactor-1 and binding protein-3 and risk of cancer.Horm Res,2003,51(Suppl 3):34-41.
3 于静萍,吴秀梅.良性前列腺增生患者IGF-1、IGFBP-3水平的探讨.放射免疫学杂志,2003,16(2):68-70.
4 Jones J I,Clemmons DR.Insulin-Like growth factors and their blinding proteins:biological actions.Endocrine Rev,1995,16:3.
5 Froech ER,Schimid C,Schimid C,et al.Action of insulin-like growth factors.Ann Rev Physiol,1995,47:443.
6 Lund PK,Moats.Staata BM,Hynes MA,et al.Somtomedin C/Insulin like growth factor-I and Insulin like growth factor-II mRNAs in rat fetal and adult tissues.J Biol Chem,1986,261:14539.
7 Hoyt EC,Van Wyk JJ,Lund PK.Tissue and development specific regulation of a complex family of rat Insulin like growth factor Imessenger ribonucleic cacids.Mol Endorcrinol,1988,2:1077.
8 Rotwein P,Pollock KM,Watson M,et al. Insulin like growth factor Gene expression during rat embryonic development.Endorinology,1987,121:2141.
9 Mc Neal JE.Origin and evolution of benign prostatic enlargement.Invest Urol,1978,15:340.
10 迟伟玲,刘贤锡.前列腺癌的早期信号-IGF-1.生命的化学,1999,19:39.
作者单位:430065 湖北武汉,湖北中医学院