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【摘要】 目的 通过对国产定性试剂检测HBsAg弱反应结果分析，探讨HBsAg检测影响因素及“灰区”的设定。方法 用国产的ELISA试剂对10870份血清样本进行HBVM定性检测，再用Abbott公司试剂进行定性检测HBVM。对定性和定量结果不符合的样本用另一种定性试剂进行检测，并采用定性和定量两种试剂对HBsAg定值参比血清进行检测比较其灵敏度。结果 对10870份样本中HBsAg可疑者98份（0.901%），弱阳性83份（0.763%），对其中78份可疑样本和65份弱阳性的样本进行定量检测，结果阳性分别是62份和51份，符合率分别为79.59%和78.46%。并取9份HBsAg定性弱反应性的而定量阴性的样本用另一种定性试剂检测，结果一份为弱反应性，其中一份为弱阳性。国产的ELISA试剂检测HBsAg灵敏度为0.5ng/ml, Abbott试剂为0.05ng/ml。结论 我国的HBV感染人群中，有一部分血清HBsAg呈低水平状态存在，并且部分感染者存在病毒复制。国产的HBsAg ELISA定性试剂灵敏性度比Abbott定量试剂低，因此必须重视弱反应结果，特别是位于阳性判断值以下者，灰区的设置非常必要。
【关键词】 乙型肝炎表面抗原：酶联免疫吸附试验：灰区
酶联免疫吸附试验（ELISA）是检测乙肝表面抗原和乙肝两对半较常用的检测方法，实验中弱反应性结果在不同实验室、不同试剂和方法学之间往往有较大的差异。我们按照样本的吸光度（A）值高低将弱反应区分为可疑、弱阳性两个部分进行研究，为正确了解弱反应结果实质提供可靠的依据。
1 材料与方法
1.1 样本来源 2008年3—9月本院住院、门诊患者及体检者血清样本10870份。
1.2 仪器 深圳雷杜RT-6000酶联仪；雷杜RF-3000洗板机、Abbotti2000SR免疫荧光分析仪。
1.3 试剂 科华公司HBsAg ELISA定性检测试剂（批号为20080710、20080320、20080520、20080620、20080820、20080810、20081006、20081008）；Abbott公司HBV定性检测试剂（批号为HBsAg：50372HNOO；anti-HBS：52549M200；HBeAg;48711HN00；anti-HBe;48711HN00; anti-HBc;43503M100）; HBsAg ELISA定性检测试剂购自金豪公司（批号为20070715）；1ng/ml HBsAg定值参比血清由卫生部临床检验中心提供［批号为GBW（E）090040）］。
1.4 方法和检测流程 先用科华公司的检测HBV血清标志物（HBVM）再用Abbott试剂对弱反应性样本进行定量的检测；定性和定量的结果不符合者采用金豪公司定性试剂进行验证，二种定性试剂均有反应者判断为有反应性，反之阴性。将1ng/ml定值参比血清稀释成0.5、0.1、0.05、0.01ng/ml系列浓度，分别采用科华公司的试剂和Abbott试剂重复检测5次，取平均值作为其最终检测的结果。
1.5 判断标准
1.5.1 HBsAg定性可疑的标准 将 ELISA定性检测A值为0.063～0.126（s/co0.6～1.2）范围定义为灰区（以“0”表示），对该范围标本进行2份的复检，其中至少有一份为灰区者为可疑，反之为阴性（试剂阴性对照要求A≤0.05,A=0.065是因洗板不充分造成半颜色反应的最低吸光度值）。
1.5.2 HBsAg定性弱阳性标准 将ELISA定性检测A值为0.142～0.2（s/co1.2～1.9）范围的标本进行2份复检，2份检测A值均在该范围弱阳性（以“±”表示）。其中一份在该范围为可疑，2份均无反应则报告为阴性。
1.5.3 HBsAg定量的阳性标准 ≥0.05IU/ml 有反应性，HBsAg含量在1.0IU/ml以下者2份进行复检，如只有一份有反应性须根据中和实验的结果确定阴阳性，2份均无反应则报告阴性。
1.5.4 HBsAg中和试验确定阳性标准 测定同一份标本加入和未加中和抗体的HBsAg A值，其中和率（%）≥50%为HBsAg确定实验阳性。
2 结果
2.1 科华公司ELISA定性试剂检测结果 10870份样本中HBsAg可疑者98份（0.901%），弱阳性83份（0.763%）。
2.2 弱反应样本经Abbott试剂定量检测结果 对78份可疑样本和65份弱阳性样本进行定量检测，结果阳性者分别为62份和52份，符合率为79.59%和78.46%，其HBsAg含量x（s）分别为2.18 IU/ml和2.56IU/ml。HBsAg定量阳性的HBVM定性模式主要为HBsAg（0）、抗HBe（+）/抗HBc（+）和HBsAg（±）、抗HBe（+）/抗HBc（+），分别占65.3%、70.53%；HBsAg（0）、抗HBs（+）和HBsAg（±）、抗HBc（+）、抗HBs（+）模式中HBsAg定量阳性分别为41.67%、33.43%。
2.3 HBsAg定性和定量结果不一致样本分析 对9份HBsAg定性弱阳性而定量阴性标本，采用金豪公司试剂进行验证，结果有2份呈弱阳性，其中1份样本可疑，建议做HBV-DNA定量检测。
2.4 HBsAg中和试验结果 上述20份HBsAg定性弱阳性标本中，有3份标本含量在1.0IU/ml以下呈反应性，2份标本为阳性，其1份样本一周后复查仍为阳性。
2.5 国产试剂和Abbott试剂检测灵敏度分析 国产试剂检测灵敏度为0.5ng/ml，Abbott试剂为0.05ng/ml，结果见表1。
3 讨论
在我国对HBsAg的灰区的设定和对灰区的理解尚未达成共识，在检验报告单上则只报阴性和阳性，因此普遍存在结果不一致现象。表1 国产试剂和Abbott试剂对HBsAg定值参比血清检测结果 注：试剂和规定HBsAg定性阳性标准s/co≥1；定量阳性标准≥0.05IU/ml有反应性
HBV普遍将导致常规试剂检测A值降低［1］，同时有部分血清HBsAg呈低水平状态存在，因此忽视弱反应性结果尤其是阳性判断值以下的结果将造成该人群的漏检，其次检测试剂阳性判断值的设立方法决定了灰区的客观存在；不同试剂由于使用材料纯度、组合、来源、方法学的不同，以及国产定性试剂检测存在变异系数大［2］等因素均会造成结果差异，也影响到弱反应结果的报告。因此除选择质量较好的试剂、订购长批号试剂，对定性检测过程进行标准化以减少变异系数外，还应根据实验结果设立本实验室合适的灰区和弱阳性标准，并对弱反应样本及少见模式样本进行严格复查，有条件者可采用定量或者HBV- DNA检测，并对结果有必要的说明，如“结果已复查，建议定期复查或定量检测”。并对结果的解释应结合临床及其实验数据进行综合分析，以免绝对化。
【参考文献】
1 田拥军，覃莉，刘慎沛，等.8种国产HBsAg试剂盒检测变异HBsAg效果评价.临床检验杂志,2007,25（4）：250-252.
2 陈伟华,吴朝梅,冯志山.七家三级甲等医院HBV标志物测定结果可比性的调查.临床检验杂志,2007,25（2）：157.
作者单位：836500 新疆阿勒泰，阿勒泰地区人民医院检验科