点击显示 收起
【摘要】 目的 本试验通过研究滋阴补肾丸对青木香中马兜铃酸A含量的影响，以初步探讨青木香的解毒问题。方法 青木香与滋阴补肾丸共煎后用RP-HPLC法测定马兜铃酸A的吸收值，观测其含量的变化情况。结果 加入滋阴补肾丸后，青木香中马兜铃酸A的含量明显降低。结论 滋阴补肾丸可显著降低青木香中马兜铃酸A的含量。
【关键词】 滋阴补肾丸；青木香；马兜铃酸A；减毒
Preliminary study on reducing poison effect of Ziyin Bushen Pill on slender Dutchmanspipe root
MAO Xiao-chun, SUN Yun, FENG Gao-ping.Institute for Biochemical Drug Control of Zhangye City, Gansu 734000，China
【Abstract】 Objective To study the reducing poison effect of Ziyin Bushen Pill on slender Dutchmanspipe root.Methods The absorption value and its change of descresept A was determined by HPLC after slender Dutchmanspipe root and Ziyin Bushen Pill were decocted together. Results The content of descresept A decreased obviously as Ziyin Bushen Pill was added. Conclusion Ziyin Bushen Pill can markedly decrease the content of descresept A in slender Dutchmanspipe root.
【Key words】 Ziyin Bushen Pill; slender Dutchmanspipe root; descresept A; attenuation
青木香的药用标准虽然已被取消，但其中所含主要毒性成分马兜铃酸的解毒一直是许多专家致力解决的问题。国内有1例服用“木通”导致肾损害，停用肾透析后连服中药六味地黄丸加减使病情稳定，肾功能恢复正常的报道［1］。为了深入研究滋阴补肾丸对青木香的减毒作用及机理，我们设计了以下实验。
1 仪器与试药
1.1 实验仪器 日立L6000型高效液相色谱系统，包括L-4200H UV-VIS Detector D-2500型色谱数据处理仪。MA240D电子分析天平，上海第二天平仪器厂。GQ7OE-5型红外快速干燥箱，上海市吴淞五金厂。数显恒温水浴锅，金坛市大地自动化仪器厂。
1.2 药物 青木香，为马兜铃科植物马兜铃Aristolochia debilis Sieb. et Zucc.的干燥根，购自中国生物制品检定所，批号：919-9001。滋阴补肾丸（浓缩丸），甘肃省河西制药有限公司，批号：060601。
1.3 试剂 马兜铃酸A对照品（aristolochic acid A,以下简称AA-I），中国药品生物制品检定所，批号110746-200406。甲醇、乙腈为色谱纯，山东省禹王实业总公司禹王化工厂。无水乙醇、冰醋酸为分析醇，中国安徽医药公司。水为纯化水，符合国家饮用水标准。
2 色谱条件
色谱柱：依利特Hypersil C18(4.6mm×250mm),柱号：E:1417177。流速：1ml/min。柱温：室温。检测波长：250nm。进样量：10μl。流动相:乙腈-（水+冰醋酸）=48：52，其中,水：冰醋酸=62.5: 1。理论塔板数不低于2000。
3 试验方法与结果
3.1 标准溶液的制备 称取AA-I对照品7mg，置于50ml量瓶中，加无水乙醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.14mg/ml的对照品储备液，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液2.00ml，于10 ml量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，即得浓度为0.028mg/ml的AA-I对照品溶液，作为对照品溶液。
3.2 供试液的制备
3.2.1 青木香样品溶液的制备 精密称取青木香0.6g，置于200ml烧杯中，加120ml水，煎煮30min，过滤，收集滤液，残渣加80ml水，煎煮30min，过滤，收集滤液，合并2次滤液，置于水浴上，浓缩至干。用适量的无水乙醇溶解并完全转移至10ml的量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀。放入冰箱冷藏，静置过夜。抽取上清液过滤，弃去初滤液，收集续滤液，放入1ml塑料离心管中，作为供试液1。
3.2.2 青木香与滋阴补肾丸供试液的制备 分别取青木香样品、滋阴补肾丸粉末少许，各精密称取0.6g置于200ml烧杯中，混合两种药物，加入120ml水，按3.2.1项下制备青木香样品溶液的方法进行操作，其制备液作为供试液2。
3.3 AA-I的定性分析 分别吸取供试液1和对照品溶液，注入液相色谱仪,按2项下的色谱条件，测绘其色谱图。色谱图见图1。
由图1可以看出，A（对照品溶液）、B（供试液1）中峰1的保留时间一致（tRA=7.78min，tRB=7.80min）,说明峰1是AA-I。图1 青木香样品与马兜铃酸A对照品的HPLC色谱图
Fig.1 The typical HPLC Aristolochia debilis and Aristolochia achidA of sample
A.马兜铃酸A对照品 B. 青木香样品 （峰1为马兜铃酸A）
3.4 标准曲线的制备 精密吸取对照品储备液1、2、3、4、5、6ml，分别置10 ml的量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度。按2项下的色谱条件，依次进样测定，测得AA-Ⅰ的峰面积。以AA-Ⅰ的进样量（μg）为横坐标，以对应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线。由标准曲线可知，在0.08～0.40μg之间，进样量与峰面积之间呈良好的线性关系，回归方程为Y=1.7×105X+5248，相关系数R=0.9999。
3.5 仪器精密度试验 精密吸取对照品溶液10μl，按2项下的色谱条件，注入液相色谱仪，测定对照品溶液的峰面积，平行测定5次。结果见表1，表明精密度良好。 表1 精密度试验结果
3.6 稳定性试验 在2项的色谱条件下，精密吸取供试液1：10μl，注入液相色谱仪，测定，然后于2、4、6、8、12、24h各测定1次，结果见表2，表明供试品溶液在24h内测定结果稳定。 表2 稳定性试验结果
3.7 重复性试验 取青木香样品0.6g，精密称定，共称取5份，照青木香样品溶液的制备项下操作，制成供试品溶液。在2项下的色谱条件下，分别精密吸取供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算AA-Ⅰ的质量。结果见表3，说明该方法的重复性良好。 表3 重复性试验结果
3.8 加样回收率试验 取0.2ml上述供试液1，用无水乙醇定容为1ml，取0.2ml上述供试液1，加入对照品溶液0.15ml，用无水乙醇定容为1ml；取对照品溶液0.15ml，用无水乙醇定容为1 ml，精密取以上各溶液10μl，按2.1项下的色谱条件测定，测定结果:回收率为（99.5±0.5）%，RSD为0.5%。
3.9 青木香与滋阴补肾丸共煎前后AA-Ⅰ含量的变化（AA-Ⅰ的定量分析） 分别取供试液1、2，按2项下的色谱条件测定，并计算各样品中AA-Ⅰ的含量，结果见图2及表4。图2 青木香与滋阴补肾丸共煎前、后的HPLC色谱图比较 表4 青木香与滋阴补肾丸共煎后的AA-I含量
结果表明，青木香与滋阴补肾丸共煎后，马兜铃酸A含量降低了45.16%，可见，滋阴补肾丸可以明显降低青木香中马兜铃酸A的含量。
4 讨论
国内外学者现已公认，青木香的肾毒性与其所含主要成分马兜铃酸有关，而其中马兜铃酸A为主要毒性成分［2］，且含量较大，故将马兜铃酸A作为测试指标。在提取方法上为了尽量符合临床实际，我们选用了加热水提取的方法，提取次数为2次。
青木香行气止痛，解毒消肿，降血压，主治胃肠疼痛、风湿性关节炎、跌打损伤、咽喉肿痛、高血压病，外用治牙痛、毒蛇咬伤等症［3］。湿热之邪极易伤阴，同时青木香行气亦易伤阴。故需配伍养阴药，使邪正兼顾。肾阴为一身津阴之根，滋阴补肾丸为中医滋补肾阴的代表方剂，滋补肾阴，增强正气，既能补已伤之阴液，又能防阴液之再耗。其滋阴之作用，恰恰能制约青木香的行气伤阴之性。因而滋阴补肾丸能够降低青木香行气伤阴的副作用。
本研究表明，滋阴补肾丸可以明显降低青木香中马兜铃酸A的含量，为青木香等含马兜铃酸类中药的解毒提供了科学依据和新的思路。
【参考文献】
1 LI Q.Kidney injury due to Aristolochiac manshuriensis.Shandong J.Tradit Chin Med，1997，16（2）：87.
2 Vanhaelen M,Vanhaelen-Fastre R,But P, et al.Identification of aristolochin acidi in Chinese herbs.Lancet,1949, (343):174.
3 XU G J.Pharmakognosie.Vol1.Beijing:People,s Medical Publishing House,1987,157.
(编辑：李 木)
作者单位：734000 甘肃张掖，张掖市药品检验所