大鼠视前区-下丘脑前部神经降压素对体温影响的机制探讨

【摘要】  目的 探讨下丘脑神经降压素（Neurotensin;NT）降低体温的机制。方法 使用微量注射的方法向核团内注射NT及相应的受体阻断剂及激动剂，观察体温的变化。结果 （1）第三脑室分别注射氟哌啶醇和6-羟多巴胺，均能对抗PO/AH注射NT所致的体温下降（P<005）。（2）腹腔分别注射阿托品和利其丁+心得安，对NT的降温效应无明显影响（P>005）。（3）PO/AH注射NT后，该区的多巴胺含量明显增高（P<005）。（4）注射NT后，该区注射抗NT血清，体温无明显改变（P>005）。（5）改变大鼠所处的环境温度，下丘脑内NT-IR(NT免疫活性物质)含量无显著改变（P>005）。结论 PO/AH外源性NT可能参与体温调节过程，其作用机制可能与该区内多巴胺含量增加有关，并可能通过多巴胺D2受体起作用。生理情况下，内源性NT可能不参与体温调节过程。

【关键词】  大鼠;神经降压素;下丘脑;体温

Research on hypothermy mechanism after injecting neurotensin into preoptic and anterior hypothalamus of rats

    ZHU Bao-liangDepartment of Physiology, Jining Medical College, Rizhao 276826，China

    【Abstract】  Objective  To explore hypothermy mechanism after injecting neurotensin into preoptic and anterior hypothalamus Methods  Neurotensin, ANTS, receptor agonist and receptor antagonist were respectively micro-injected into preoptic anterior hypothalamus (PO/AH) and cerebral ventricle of rats The body temperature of the rats was observed Results  Aloperidin and 6-hydroxydopamine with IC could antagonize hypothermy of neurotensin (P<005) Atropine, Propranolol and Phentolaminum with IP could not affect hypothermy of neurotensin (P>005) The content of dopamine in PO/AH increased obviously after injecting NT into the area (P<005) Micro-injecting NT into PO/AH after injecting ANTS into the area could not affect the body temperatures of the rats The content of NT in hypothalamus was same in different environment temperature Conclusion   The ectogenic NT in PO/AH perhaps has a role in the process of thermoregulation This properly relates to the increasing of content of dopamine and the role due to dopamine D2- receptors is activated Endogenous NT has not a role of thermoregulation

    【Key words】  rat; neurotensin; hypothalamus; body temperature

    自1973年Carraway等发现神经降压素（Neurotensin;NT）以来，已证明NT是一种脑-肠肽。脑室内和PO/AH注射NT可使实验动物的体温降低，且呈明显的量效依赖关系［1］。由于PO/AH是体温调节的中枢整合部位，且NT在下丘脑的含量很高［2］， 脑室内注射NT引起的体温降低可能是通过PO/AH起作用的，但PO/AH内的NT影响体温调节的机制目前尚不清楚。据此，本文旨在探讨视前区-下丘脑前部(Preoptic anterior hypothalamns;PO/AH)NT影响体温的机制。

    1  材料与方法

    11  实验分组  实验选用体重为200～250g的健康雄性Wistar大鼠(购自青岛动物所)72只,按以下四个内容随机分为12组(每组6只):(1)注射不同的阻断剂后PO/AH注射NT对体温的影响,PO/AH注射NT 025μg 15min前，第三脑室分别注射利其丁50μg+心得安100μg、阿托品50μg、氟哌啶醇50μg和6-羟多巴胺240μg（均使用生理盐水稀释至300μl），观察体温变化。以第三脑室注射生理盐水300μl 和PO/AH内注射NT025μg作为对照组。 (2)PO/AH注射NT 025μg 1min后，再向该区注射抗NT 2μl，以注射等容量的生理盐水作为对照组。(3)环境温度对下丘脑NT-IR的影响,实验组大鼠分别放置于4℃、22℃和35℃的恒温箱内48h，在此期间每小时更换箱内空气2次，以保持箱内充分的氧气，并给大鼠足够的饮食。迅速断头取脑，置于沸生理盐水中煮5min，取下丘脑称重，匀浆，离心后取上清液。采用放射免疫分析法［4］测定NT-IR的含量。(4)PO/AH注射NT对该区多巴胺含量的影响,实验组大鼠PO/AH注射NT 025μg(2μl)，30min后断头，取脑，浸于冰生理盐水中，取下丘脑称重，荧光分光光度法测定PO/AH多巴胺的含量。PO/AH注射生理盐水2 μl为对照组。

    12  实验条件和方法  除“环境因素对下丘脑NT-IR含量影响研究组”外，其余实验组与其对照组大鼠，在实验前后均放置于室温为（2200±10）℃的实验室内，实验动物分别于实验前和实验后的30、60、90和120min测肛温。采用PHILPS肛温计（精确度为001℃），插入直肠内4cm以观察记录体温。动物以20%氨基甲酸乙酯（1g/kg）麻醉后，固定于江湾Ⅰ型C脑立体定位仪上，头部正中切口，剥离骨膜，止血。参照George图谱，用牙科钻在颅骨顶钻孔定位，定位坐标：（1）PO/AH : PO(视前区)：前囟前14mm,旁开10mm；颅骨表面下85mm;AH(下丘脑前部)：前囟后10mm,旁开1mm, 颅骨表面下8mm;(2)第三脑室：前囟后08mm, 旁开1mm, 颅骨表面下40mm。将自制同心套管插入上述部位，套管外径07mm,内管外径04mm,内管前端比外管前端长05mm。以502胶和自凝牙托粉固定同心套管，备作微量注射用。微量注射以1μl/min的速度分别通过套管插入上述部位。注射完毕停留1min后拔出微量注射器。

    13   组织学鉴定  每次实验完毕，经套管注射甲苯胺蓝染色，断头取脑，置于10%福尔马林溶液中固定。连续切片，50μm厚，光镜下行组织学鉴定。定位不准确者不记入统计。

    14  实验用药物  NT、利其丁、6-羟多巴胺均为美国Sigma公司生产；氟哌啶醇为陕西省医药工业研究所产品；阿托品和心得安系无锡市第四制药厂生产；抗NT血清由青岛大学医学院生理教研室制备，正常兔血清自制。

    15  统计学处理  所得数据采用均数±标准差（x±s）表示。实验组和对照组采用两样本均数比较的t检验。取P<005作为判定显著性界限。

    2  结果

    21  注射不同阻断剂后，PO/AH注射NT对体温的影响  脑室注射阿托品50μg 或利其丁50μg +心得安100μg均不能改变NT引起的体温降低（P>005）（见表1），而脑室注射氟哌啶醇50μg或6-羟多巴胺200μg却能对抗NT的降温效应（P<005）。表1  使用阻断剂后PO/AH注射NT后的体温值

    22  PO/AH注射抗NT血清对体温的影响  PO/AH注射抗NT血清（效价为1：14000）和正常兔血清，大鼠体温均无明显改变（P>005）（见表2）。表2  PO/AH注射抗NT血清和正常兔血清后的体温值

    23  不同环境温度对下丘脑NT-IR含量的影响  将大鼠分别放置在40℃、20℃和35℃的环境内48h后，断头取脑放射免疫分析法测定下丘脑NT-IR的含量。与对照组相比，大鼠下丘脑内NT-IR的含量无明显改变（P>005）（见图1）。

   3  讨论

    已证明，脑室内和PO/AH注射NT均可使实验动物的体温降低，且呈明显的量效依赖关系［3］ 。NT在中枢神经系统内以神经递质的方式影响其他神经递质的代谢和释放，例如：NT可直接作用于下丘脑肾上腺素能神经末梢，增加下丘脑肾上腺素的释放量；脑室注射NT可增加某些脑区内乙酰胆碱的代谢，降低乙酰胆碱的含量［4］。为了探讨上述现象是否与NT影响体温有关，本实验在向PO/AH注射NT前15min经腹腔注射利其丁和心得安以阻断肾上腺素能α和β受体，结果表明，上述各阻断剂均不影响NT的降温效应。这表明，NT的降温效应可能与PO/AH内肾上腺素能递质系统和胆碱能递质系统无关。

    据文献报道，脑室注射微量的多巴胺，大鼠体温明显降低; 向大鼠的PO/AH注射微量多巴胺，体温也下降明显。NT在下丘脑可增加多巴胺的代谢，且和多巴胺是共存递质［5］。本实验经第三脑室注射氟哌啶醇阻断脑内的多巴胺D2受体、注射6-羟多巴胺耗竭脑内的多巴胺后，均可明显对抗NT的降温作用（P<005）。PO/AH注射NT后30min，断头取脑，下丘脑多巴胺的含量明显增高。提示NT在PO/AH引起体温降低可能与下丘脑内多巴胺的含量增加有关，且通过多巴胺D2受体起作用。故推测脑室注射NT引起的体温降低，可能使NT扩散入PO/AH，并通过增加该区内多巴胺的释放所致。至于NT怎样增加多巴胺的释放。以及多巴胺通过何种途径引起体温变化，目前尚不清楚。有学者认为，NT降低体温是通过降低机体的代谢率实现的。甲状腺切除后的大鼠，体温调节功能部分丧失，脑室注射NT后，体温调节功能障碍加重［6］。但NT是否通过TRH影响甲状腺激素的分泌，目前尚无定论。有资料表明，大鼠脑室注射TRH可对抗NT的降温效应，合适剂量的TRH能完全中和NT的降温效应［7］，但尚没有证据表明PO/AH内的多巴胺递质系统和下丘脑内的TRH有关。

    为了探讨PO/AH内源性NT在体温调节中的作用，采用PO/AH注射抗NT血清，结果大鼠体温无明显改变。将大鼠分别放置在4℃、20℃和35℃的环境内48h，断头取脑，下丘脑NT-IR含量也未见明显变化。这提示，在生理情况下，内源性NT可能不参与体温调节过程。

【参考文献】
  1 Popp E, Schneider A, Vogel P, et al Time course of the hypothermic response to continuously administered neurotensin Neuropeptides, 2007, 41(5):349-354

2 Reyes R, Valladares F, Díaz-Flores L, et al Immunohistochemical localization of hormones and peptides in the human pituitary cells in a case of hypercortisolism by ACTH secreting microadenoma Histol Histopathol, 2007, 22(7):709-117

3 朱宝亮,程小东,张艳霞,等大鼠下丘脑内神经降压素对体温的影响济宁医学院学报，2004, 27（3）：16-17

4 Belsham DD Hormonal regulation of clonal, immortalized hypothalamic neurons expressing neuropeptides involved in reproduction and feeding Mol Neurobiol, 2007,35(2):182-194

5 Geisler S, Bérod A, Zahm DS,et al Brain neurotensin, psychostimulants, and stress--emphasis on neuroanatomical substrates Peptides, 2008, 27(10):2364-2384

6 Fantegrossi WE, Ko MC, Woods JH, et al Antinociceptive, hypothermic, hypotensive, and reinforcing effects of a novel neurotensin receptor agonist, NT69L, in rhesus monkeys Pharmacol Biochem Behav,2005，80(2):341-349

7 Boules M, McMahon B, Warrington L, et, al Neurotensin analog selective for hypothermia over antinociception and exhibiting atypical neuroleptic-like properties Brain Res, 2001,919(1):1-11

(编辑：悦 铭)

作者单位：276826 山东日照，济宁医学院日照校区生理学教研室