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首页医源资料库在线期刊中华医学研究杂志2009年第9卷第7期

D-氨基半乳糖诱导大鼠急性肝衰竭模型的实验研究*

来源:《中华医学研究杂志》
摘要:【摘要】目的筛选D-氨基半乳糖(D-Gal)造模的最佳剂量,比较不同剂量D-Gal造成的大鼠急性肝损伤模型的优越性,为保肝新药的筛选提供合适的实验动物模型和理论依据。方法采用64只SD大鼠,以D-Gal作为肝损伤试剂,建成急性肝损伤动物模型,以血液生化、肝功能、肝组织学的改变为观察指标,筛选大鼠最佳用药剂量,并观察D......

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【摘要】  目的 筛选D-氨基半乳糖(D-Gal)造模的最佳剂量,比较不同剂量D-Gal造成的大鼠急性肝损伤模型的优越性,为保肝新药的筛选提供合适的实验动物模型和理论依据。方法 采用64只SD大鼠,以D-Gal作为肝损伤试剂,建成急性肝损伤动物模型,以血液生化、肝功能、肝组织学的改变为观察指标,筛选大鼠最佳用药剂量,并观察D-Gal所致大鼠肝损伤的动态变化。结果 本实验条件下,D-Gal 800mg/kg为大鼠的最适剂量,此剂量建立的肝损伤模型肝组织形态变化显著且死亡率低。结论 D-Gal 800mg/kg诱导大鼠急性肝损伤模型最适用于保肝新药的筛选与评价。

【关键词】  肝损伤;模型;D-氨基半乳糖;大鼠

The empirical study of acute hepatic failure rat model induced by D-galactosamine

    FAN Xu, FANG Nian.The First People's Hospital of Taizhou City, Taizhou 318020,China

    【Abstract】  Objective  To optimize the dosage of D-galactosamine (D-Gal) to make a rat model of hepatic injury as a tool for the development of hepatic drug. Methods  The model was induced with different doses of D-Gal in 70 rats. The levels of ALT and AST were determined by using automatic biochemical analyzer liver specimens were processed for pathological examination. Results  Comprehensive evaluation of the results showed that the use of D-Gal500mg/kg in rats could induce stable models with low mortality. Conclusion  The hepatic injury model induced with D-Gal500mg/kg in rats is recommended for hepatic pharmaceutical studies.

    【Key words】  hepatic injury; model;D-galactosamine; rat

    肝细胞损伤引起的肝功能障碍在临床比较多见,如病毒性肝炎、重症消耗性疾病及药物中毒等。随着保肝新药的不断问世,有必要建立一种相对稳定的肝损伤动物模型,用以筛选药品、比较疗效并探讨作用机理。人们习惯将CCl4致肝损伤模型作为筛选具有保肝降酶作用药物的常用模型之一[1~3]。而D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-Gal)作为急性肝损伤工具药,仅需给药1次,较CCl4方便,目前已被广泛用于小鼠和大鼠肝损伤模型制备,但其造成肝损伤的剂量,国内外报告差别较大(100~2300mg/kg)[3,4],且D-Gal所致的肝损伤模型动物的血清转氨酶量存在很大的个体差异。为此,本实验对比D-Gal致大鼠肝损伤实验,就D-Gal致动物肝损伤的优越性及最佳剂量选择进行探讨。

    1  材料与方法

    1.1  材料

    1.1.1  药品与试剂  临用前将D-Gal(Sigma公司产品)加生理盐水配成10%的D-Gal溶液,用0.……01mol/L NaOH调pH至7.2~7.4。

    1.1.2  动物  健康SD大鼠64只,体重180~220g,由徐州医学院实验动物中心提供。

    1.1.3  主要仪器  全自动生化分析仪(美国杜邦)。

    1.2  实验方法

    1.2.1  大鼠D-Gal最佳剂量的筛选  40只大鼠按体重随机分成4组,每组10只,3个实验组分别一次性腹腔注射D-Gal,剂量依次为600mg/kg体重(D600组)、800mg/kg体重(D800组)、1000mg/kg体重(D1000组);对照组给以等量的生理盐水。24h后采血测肝功能,并解剖肉眼观察肝脏表面病变,H-E染色观察肝脏病变。

    1.2.2  D-Gal致肝脏损伤的动态观察  24只大鼠随机分为4组,每组6只,除空白对照组外,其余18只均一次性腹腔注射D-Gal 600、800、1000mg/kg体重,分别于给药后72h测肝功能,观察肝脏形态学改变。

    1.2.3  检测指标  在检测时间点,动物分别采静脉血2ml, 分离血清,全自动生化分析仪测定丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)。

    1.2.4  肝脏病理检查  各组实验动物采血处死后立即解剖摘取肝脏,肉眼观察肝脏表面病理变化,并固定于4%甲醛溶液中,取材后流水冲洗,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋切片,HE染色,光学树脂胶封片,光镜下观察。

    1.3  统计学处理  数据用均数±标准差(x……±s)以及均数向量表示,肝功能比较,用Stata9.0软件进行多变量方差分析(multivariate analysis of variance, MANOVA)。

  2  结果

    2.1  D-Gal对大鼠肝组织形态学影响  腹腔给予不同剂量的D-Gal 24h后小剂量组D600大鼠肝脏色泽较空白对照组浅白,其他没有明显改变,D800、D1000组大鼠肝脏表面病理改变明显,色泽灰白,并有弥漫白色小点或白色坏死病灶,部分大鼠肝脏增大,其程度随D-Gal剂量的增加而加重,D1000组有1只大鼠死亡。HE染色镜下有不同程度病变,随D-Gal剂量增加,病变加重。大剂量组有肝细胞广泛坏死。坏死的肝细胞解离,胞质嗜酸或呈空泡状,核碎裂、崩解,坏死细胞间及汇管区有少量中性粒细胞、单核细胞及淋巴细胞浸润,并有脂肪变性改变。

    2.2  不同剂量的D-Gal对大鼠ALT、AST的影响  不同剂量组大鼠血清AST、ALT均明显增高,随剂量增加增高明显,与空白对照组相比较差异均具有显著性(P<0.01)(见表1)。综合肝功能与形态学改变,D-Gal 800mg/kg剂量组肝损伤明确,这一剂量可作为筛选药物用实验剂量。表1  不同剂量的D-Gal对大鼠肝功能的影响

    通过Stata9.0软件先对三组大鼠的肝功能进行多变量方差分析(multivariate analysis of variance, MANOVA)结果:Wilks lambda统计量(W)=0.……0831, F值=13.02,查F界值表,F0.01,(9.70)=2.……67。F>F0.01,(6.70)所以P<0.01。认为三组大鼠的肝功能差异有显著性。

  3  讨论

    肝细胞内许多物质代谢过程与磷酸尿嘧啶核苷密切相关,足量的磷酸尿嘧啶核苷是维持肝细胞正常代谢及生物转化功能的必要物质,如果发生耗竭,可以引起肝细胞损伤甚至坏死。D-Gal是一种肝细胞磷酸尿嘧啶核苷干扰剂,通过竞争生成二磷酸尿苷半乳糖使磷酸尿苷耗竭,导致物质代谢障碍,引起肝细胞变性、坏死[5]。因此,用D-Gal作为致毒物可制成特异性肝损伤模型。肝损伤动物模型的建立是筛选保肝药物的关键步骤之一。本实验结果表明,采用D-Gal诱导大鼠做急性肝衰竭动物模型, D-Gal 剂量800mg/kg为大鼠的最适剂量,此剂量建立的肝损伤模型肝组织形态变化显著且死亡率低,更适用于保肝新药的筛选与评价。

【参考文献】
  1 侯艳宁,粱晓莉,程桂芳,等.干扰花生四烯酸的药物对实验性肝损伤的影响.解放军药学学报,1999,15(1):13-16.

2 张孝卫,耿秀兰,黄丽华,等.四氯化碳致大鼠、小鼠肝损伤的对比实验.基础医学与临床,2003,3(3):351-352.

3 杨新波,黄正明,曹文斌,等.CCl4,D-Gal,ANIT致小鼠肝损伤模型的实验研究.世界华人消化杂志,1998,6(1):19-20.

4 黄正明,杨新波,曹文斌,等.化学性及免疫性肝损伤模型的方法学研究.解放军药学学报,2005,21(1):42-46.

5 汤新慧,高静.实验性肝损伤的损伤机制.中西医结合肝病杂志,2002,12(1):53-55.

(编辑:李 木)


作者单位:台州市科技局资助项目(编号:051KY28) 318020 浙江台州,台州市第一人民医院感染科

作者: 2009-8-24
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