射干总黄酮中的高效液相色谱/电喷雾电离-质谱分析

【摘要】  建立了高效液相色谱化/电喷雾电离-质谱定性分析射干总黄酮的方法，通过质谱识别了其中的5种化学成分。结果表明射干的总离子流色谱图和紫外色谱图相比具有一定的特征性，以质谱作为检测器是一种很好的研究中药指纹图谱的方法。

【关键词】  高效液相色谱/电喷雾电离-质谱;射干

　Shegan total flavonoids in the high performance liquid chromatography/electrospray ionization-mass spectrometry

　　YAN Qi-xin,ZHAO Jin-hua,LIN Yong-cheng,et al. School of Chemistry and Chemical Engineering of Zhongshan University,Guangzhou 510000,China

　　【Abstract】 The method of high performance liquid chromatography/electrospray ionization-mass spectrometry(HPLC-ESI-MS) was used for qualitative analysis of Belamcanda chinensis (L.)DC.Five component was identified by MS .The result showed that the total ion current (TIC) chromatogram of Belamcanda chinensis (L.)DC was as characteristic as UV the chromatogram.MS detector is a good alternative in the fingerprint study of traditional Chinese medicines.

　　【Key words】 high performance liquid chromatography/electrospray ionization-mass spectrometry(HPLC-ESI-MS); Belamcanda chinensis (L.)DC

　　射干为鸢尾科(Iridaceae)射干属植物射干Belamcanda chinensis (L.)DC.的干燥根茎。为常用正品中药，射干载于2000年版《中国药典》，是具有国家标准的中药材。主产于河南、湖北、浙江、安徽、江苏等省。射干味苦、寒，入肝、肺经，降火、解毒、散血、消肿，用于热毒痰火郁结，咽喉肿痛，咳嗽气喘、肝炎、乳腺炎等，为治疗喉痹咽痛之要药。主治咽喉疾患之方剂，大多以射干为君药组方，疗效较好。其主要成分为异黄酮类[1，2]，对其含量测定有见报道[3]，但采用高效液相色谱-电喷雾离子化-质谱分析方法的研究尚未见报道，为此，我们对其进行深入研究，为射干的质量控制提供了依据。

　　1 实验部分

　　1.1 试剂和样品 乙腈为色谱纯，水为纯净水;其他试剂均为分析纯。射干总黄酮提取物自制(按大孔树脂方法制备)。对照品射干苷(tectorigenin)自提(HPLC检测纯度99%)。

　　1.2 仪器和条件

　　1.2.1 液相色谱部分 Agilent 1100型高效液相色谱仪，包括低压四元梯度泵、二极管阵列检测器、自动进样器、在线脱气机。色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C8, 4.6mm×250mm。检测波长266nm,温度40℃。流动相为水/乙腈梯度洗脱,洗脱程序条件为，0min:A：B为85：15;40min:A：B为50：50(其中:A为含0.2%磷酸水，B为乙腈)。

　　1.2.2 质谱部分 仪器:ICQ advantage 型质谱仪(美国Finnigan 公司)，Thermo Fingan surveryer (包括MS pump、Auto sampler-poA Detector)。ESI源:源电压：4.5kV;正离子检测;鞘气(N2);流速:70;辅助气(N2),流速:20;碰撞气体为氦气;毛细管温度280℃;毛细管电压43V;采用扫描方式，扫描范围m/z=200～1000。

　　1.3 样品处理 取样品适量，80℃减压干燥(4～6h)至恒重，精密称定25mg,转移至50ml容量瓶中，加70%乙醇40ml，常温下超声30min,取出冷却到室温，加70%乙醇至刻度，摇匀、过滤，取续滤液2～10ml容量瓶中,70%乙醇定容至刻度，摇匀。即可测定。

　　2 结果和讨论

　　2.1 色谱图 通过对样品进行DAD190-400nm紫外扫描和质谱仪全扫描,得到紫外色谱图和总离子流图谱，见图1。图1 中间体的紫外色谱图(A)和总离子流色谱图(B)UV chromatography (A)and TLC chromatogram (B)of the extract of Shegan

　　2.2 质谱解析 见图2～6。在RT为12.34时，为射干苷(tectoridin)，其分子量为C22H22O11(462),UV为266，333，ESI-MS中：m/z463为[M+H]+，301[M+H]+-glu(162), 286[M+H]+-glu(162)-CH3,270[M+H]+-glu(162)-CH3O。在RT为13.82时，为野鸢尾苷(iridin)，其分子量为C24H26O13(522),UV为266，333，ESI中：m/z523为[M+H]+，361[M+H]+-glu(162)，331[M-glu(162)-CH3O,301[M-glu(162)-2CH3O, 226[M+H]+glu(162)-145(4CH3O,2OH,O)。在RT为22.33时，为鸢尾苷元(tectorigenin)，其分子量为C16H12O6(300),UV为266，333，ESI中：m/z301为[M+H]+。在RT为24.13时，为野鸢尾黄素(irigenin)，其分子量为C18H16O8(360),UV为267，322，ESI中：m/z361为[M+H]+，361[M+H]+-CH3(15)，343[M+H]+-H2O。图2 在RT为12.34峰的质谱图 图3 在RT为13.82峰的质谱图图4 在RT为22.33峰的质谱图图5 在RT为24.13峰的质谱图图6 在RT为31.39峰的质谱图在RT为31.39时，为次野鸢尾黄素(irisflorentin)，其分子量为C20H18O8(386),UV为265，322，ESI中：m/z387为[M+H]+，357[M+H]+-CH3O(15)，301.8 。

　　3 结论

　　射干总黄酮主要为射干苷(tectoridin)、鸢尾苷元(tectorigenin)、野鸢尾苷(iridin)、野鸢尾黄素(irigenin)和次野鸢尾黄素(irisflorentin);射干的总离子流色谱图和紫外色谱图相比具有一定的特征性，以质谱作为检测器是一种很好的研究中药指纹图谱的方法。

【参考文献】
  　1 Qin Minjian(秦民坚),Ji Wenliang(吉文亮),Wang zhengtao (王峥涛). Chinensis Traditional and Herbal Drugs(中草药)，2004,35(5):487-490.

　　2 Qin Minjian(秦民坚),Ji Wenliang(吉文亮),Wang zhengtao (王峥涛).Journal of China pharmaceutical university(中国药科大学学报),2001,32(3):197-199.

　　3 Huang Dein(黄得林),Gao Zhongyi(高仲义).West China Journal of Pharmaceutical Sciences.(华西药学)1997,12(2):115-116.