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【摘要】 目的 采用高效液相色谱法测定复方鱼腥草颗粒中绿原酸的含量。方法 色谱柱:VP-ODS C18柱 (150mm×4.6mm,5μm)以乙腈-0.4%磷酸溶液(12:88)为流动相,流速1.0ml/min,检测波长327 nm。结果 绿原酸进样量在0.12~0.96μg范围内与峰面积具有良好的线性关系,相关系数0.9996,平均回收率99.63%(n=6)。结论 本方法操作简便,精密度好,结果准确可靠,适用于复方鱼腥草颗粒中绿原酸含量的测定。
【关键词】 高效液相色谱法; 绿原酸; 复方鱼腥草颗粒
复方鱼腥草颗粒为临床上常用的清热解毒药品,主要用于外感风热所致的急喉痹,急喉音,急乳蛾,症见咽喉肿痛,声音嘶哑咳嗽咳痰,发热急性咽炎、扁桃体腺炎等。由鱼腥草、黄芩、金银花、板蓝根、连翘等药材组成。原标准[1]中未对主药之一金银花进行含量检测,为确保该产品的疗效及有效控制产品质量,本文采用高效液相色谱法对其的绿原酸含量进行了测定,该方法操作简单,精密度好,结果准确可靠。
1 仪器与试药
TSP型高效液相色谱仪(P4000,UV2000),绿原酸对照品(含量测定用,批号:110753-200413购自中国药品生物制品检定所);乙腈、甲醇均为色谱纯,磷酸为分析纯,水为重蒸馏水;药品购自市场(广西邦奇药业有限公司,批号:081224 )。
2 方法及结果
2.1 色谱条件
色谱柱为VP-ODSC18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(12:88);流速为1.0ml/min;检测波长为327 nm;检测温度为30℃;理论塔板数以绿原酸计算,不低于1500。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品适量,加50%甲醇溶解制成每1ml含60μg的绿原酸对照品溶液,即得(10℃以下保存)。
2.3 供试品溶液的制备
取本品5袋,研细,取约1.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加50%甲醇50ml,称定重量,超声处理(功率250W,频率35 kHz)40min,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液5ml,置25ml棕色量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即得。
2.4 阴性对照溶液的制备
按处方取缺金银花的其他各药物,按处方工艺制备,制得阴性对照品溶液。照供试品的测定方法进行测定,结果表明,其他组分对绿原酸的测定无干扰,结果见图1。
2.5 线性关系的考察
分别精密吸取绿原酸对照品溶液(0.120mg/ml)1、2、4、6、8ml,各置10ml棕色量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,精密吸取各稀释液10μl,按供试品项下试验方法,分别注入液相色谱仪。以对照品的进样量X(μg)对峰面积Y进行线性回归,回归方程为:Y=8.43×105X+1.64,r=0.9996。
结果表明:绿原酸进样量在0.12~0.96μg 范围内与峰面积具有良好的线性关系。
2.6 精密度试验
取对照品溶液连续进样5次,峰面积积分值的RSD为1.16%。
2.7 重复性试验
取样品1批,平行制备5份供试品溶液,分别按供试品项下方法测定含量,测定结果的RSD为0.96%。
2.8 稳定性试验
取供试品1份,在0.5、1、4、8、24h分别按供试品项下方法试验,试验结果的RSD为0.93%,试验表明在24h内供试品溶液是稳定的。
2.9 回收率试验
精密称取已知含量的供试品6份(各约1.5g),精密称定,各精密加入绿原酸对照品溶液(1.20mg/ml)1.5ml ,依供试品溶液制备法进行提取及含量测定,计算回收率,结果见表1。表1 回收率试验数据表
2.10 样品的含量测定
精密称取3批复方鱼腥草颗粒样品,按供试品项下方法试验,精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,记录峰面积,以外标法计算绿原酸含量。测得结果分别为7.026、7.215、7.116mg/袋,平均为7.119 mg/袋。图谱见图1。 A.对照品 B.供试品 C.阴性对照 1 连翘苷图1 复方鱼腥草颗粒的HPLC图谱
3 讨论
本试验的提取及含量测定应于当天完成,试验证明若提取后超过24h测定含量,绿原酸的含量会偏低。为保证绿原酸能提取完全,比较了50%甲醇和甲醇超声提取的效果,结果表明以50%的甲醇及超声40min测定绿原酸含量为最高。本方法的阴性对照品在与绿原酸对照品的吸收峰处无干扰峰,且方法简单,具重复性,可以作为复方鱼腥草颗粒的质量标准,建议在以后的标准修订中,增加绿原酸的含量测定,以提高该药品的质量检测水平。
【参考文献】
1 《国家药品标准》WS3-666 ( Z-127 )-2004 (Z)