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【摘要】 目的 建立格列吡嗪缓释片(秦苏)中格列吡嗪含量测定的RP-HPLC法。方法 色谱柱EclipseXDB-C18柱(150 mm×4.6mm,5μm)，流动相：流动相为0.1mol/L磷酸二氢钠溶液-甲醇(56:46)，流速1.0 ml/min，检测波长225nm。结果 格列吡嗪在5.00~250.00μg/ml范围内线性关系良好，r=1.00000。平均回收率为99.99%，RSD为0.12%(n=6)。结论 本方法简便，准确，其他组分不干扰测定,可以用于格列吡嗪缓释片中格列吡嗪的定量分析。
【关键词】 RP-HPLC; 格列吡嗪缓释片; 格列吡嗪
【Abstract】 Objective To establish a new method for Determination of Glipizide in Glipizide Sustained Release Tablets by RP-HPLC.Methods Separation was carried out on an EclipseXDB-C18 column using 0.1mol/L sodium dihydrogen phosphate-methanol (56:46) at detection wavelength 225 nm,and the flow was 1.0 ml/min.Results The linear range of Glipizide concentration was from 5.00 to 250.00μg/ml and correlation coefficient was 1.00000,The average recovery of sample was 99.99% and RSD was 0.12%(n=6).Conclusion This method is convenient,accurate without interference and is suitable for quantitative determination of Glipizide in Glipizide Sustained Release Tablets.
【Key words】 RP-HPLC; Glipizide Sustained Release Tablets;Glipizide
格列吡嗪缓释片(秦苏)是扬子江药业集团有限公司生产的第二代磺酰脲类口服降血糖药，临床上主要用于轻、中度非胰岛素依赖型糖尿病患者，格列吡嗪缓释片能缓慢释放药物，使病人血药浓度维持在一个稳定的状态，方便患者服药并确保疗效，而且作用持久，每天只需服用1次，治疗效果优于普通制剂，满足了临床治疗的迫切需要。本文参照原质量标准[1]和药典方法[2]对RP-HPLC法测定本品中格列吡嗪含量的方法进行了验证，结果表明RP-HPLC法简便、准确，其他组分不干扰测定，可以用于本品的质量控制。
1 仪器与试药
1.1 仪器
瑞士Mettler Toledo XS205 电子天平， 昆山市超声仪器有限公司KQ-500B型超声波清洗器，美国安捷伦公司高效液相色谱仪Agilent1100 Series(配置四元泵，自动进样器，DAD检测器，柱温箱，在线真空脱气泵，色谱工作站等)等。
1.2 试药
格列吡嗪对照品(批号为：100281-200901，含量为99.9%)购于中国药品生物制品检定所，格列吡嗪缓释片(批号分别为：11010111，11010211，11010311)为扬子江药业集团有限公司生产，配制流动相用甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余化试均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件和系统适应性试验
色谱柱：Agilent XDB C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相：0.1mol/L磷酸二氢钠溶液-甲醇(56:46)，检测波长，225nm，柱温30℃，流速1.0ml/min。在此色谱条件下，格列吡嗪色谱峰与样品中的其他组分色谱峰达到了基线分离，理论板数以格列吡嗪峰计>2000;阴性对照溶液色谱图中格列吡嗪相应位置上无色谱峰出现，可见其他成分对此检测方法无干扰，此色谱条件可行。见图1。A.阴性对照溶液;B.对照品溶液; C.样品溶液;1.格列吡嗪(对照品峰名)图1 高效液相色谱图
2.2 对照品溶液的配制
精密称取格列吡嗪对照品适量，加甲醇溶解制成每1ml含5mg的对照品贮备液。
2.3 线性关系试验
分别精密吸取上述对照品贮备液适量，用甲醇稀释制成浓度分别为：5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、250μg/ml的溶液，按上述色谱条件分别进样20μl，以格列吡嗪浓度为横坐标(X)，其峰面积积分值为纵坐标(Y)，得回归方程为： Y= 31.22X-3.1289 相关系数r=1.00000。结果表明格列吡嗪在5.00~250.00μg/ml范围内，对照品浓度和其峰面积积分值具有良好的线性关系。
2.4 精密度试验
精密量取浓度为0.05064mg/ml的格列吡嗪对照品溶液20μl，按样品测定项下方法操作，重复进样6次，结果格列吡嗪峰面积均值为1561.41553， RSD为0.58%，表明精密度良好。
2.5 稳定性试验
精密吸取新制备的供试品溶液20μl,按样品测定项下方法在25℃下每隔1h测定1次，共测定12次，记录峰面积，格列吡嗪峰面积均值为1635.5601，RSD为0.37%，表明供试品溶液在12h内稳定。
2.6 重复性试验
取批号为11010111的样品，按照“2.8”项下方法制备8份供试液，结果格列吡嗪缓释片含量均值为99.88%，RSD为0.34%。
2.7 加样回收率试验
采用加样回收法。取已知格列吡嗪含量的样品(11010111，11010211，11010311)适量，分别精密加入格列吡嗪对照品溶液(0.05mg/ml)10ml，按照“2.8”项下方法制备6份供试液，分别进样20μl，按上述色谱条件测定，计算得平均回收率为99.99%，RSD为0.12%，结果见表1。 表1 加样回收率试验结果
2.8 样品含量测定
取本品20片，精密称定，研细，精密称定细粉适量(约相当于格列吡嗪5mg)，置100ml量瓶中，加甲醇50ml，超声处理(功率500W，频率40kHz)30min，放冷，用0.1mol/L磷酸二氢钠溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，即得，精密量取续滤液20μl。按上述色谱条件测定，以外标法计算样品中格列吡嗪的含量。
2.9 阴性对照品溶液的制备
阴性对照品溶液即缺格列吡嗪空白溶液，其制备按处方比例准确称取除格列吡嗪以外的其他物料，模拟本品的制备工艺和供试品溶液的制备方法，制成缺格列吡嗪的空白溶液。
3 讨论
3.1 色谱条件的选择
分别选取不同配比的0.1mol/L磷酸二氢钠溶液-甲醇为流动相，不同厂家不同规格的色谱柱进行分析，结果选择0.1mol/L磷酸二氢钠溶液-甲醇(56:46)为流动相，Agilent XDB C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱，在柱温30℃，1.0ml/min流速，225nm波长条件下检测时，格列吡嗪与样品中的其他组分分离度良好，阴性对照无干扰。
3.2 提取方法的选择
选取甲醇分别超声处理(功率500W，频率40kHz)20、30、40min进行试验，含量测定结果差异无显著性(P<0.05)。因此，供试品溶液制备时选择用甲醇超声处理(功率500W，频率40kHz)30min。
【参考文献】
1 中华人民共和国卫生部药品标准(试行).WS-167(X-146)-97.
2 国家药典委员会.中国药典(二部).北京：化学工业出版社，2010：811-812.