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【摘要】 目的宫颈癌是一种多因素、多阶段的相关疾病，在宫颈癌变的过程中增殖细胞核抗原PCNA在促进细胞DNA 合成和细胞增殖中发挥着重要的作用。本研究通过检测人宫颈癌，CIN和正常宫颈组织中PCNA 蛋白表达水平来探讨其在宫颈癌发生发展过程中的作用。方法应用免疫组化方法对73例宫颈癌，122例CIN,33例正常宫颈组织中PCNA蛋白表达进行检测和比较，建立数据库，采用SPSS10.0软件对数据进行统计学分析，以探讨 PCNA 蛋白表达水平与宫颈癌发生发展的关系。结果PCNA在宫颈癌组织的阳性率为90.4%(66/73),CIN组的阳性率为 59.0%(72/122), 正常宫颈组织的阳性率为 15.2%(5/33)，其表达水平依宫颈癌、CIN、宫颈正常组织依次减弱的趋势(χ2trend =10.44,P<0.05 )。PCNA表达与组织类型无关(χ2=4.48,P>0.05),但与宫颈癌FIGO分期，细胞分化程度的高低，有无淋巴结转移有显著相关(P<0.05)。结论PCNA 相对高表达与宫颈癌的发生密切相关，该基因相对高表达可能是宫颈癌发生的一个标志。
【关键词】 增殖细胞核抗原;宫颈癌;宫颈上皮内瘤变;生物标志物;免疫组织化学
【Abstract】ObjectiveThe aim of this study was to get insight into the role of gene proliferating cell nuclear antigen in cervical cancer tissues.MethodsWe tested the level of proliferating cell nuclear antigen protein expression in 73 cases of cervical cancer,122 CIN and 33 cases of nomal cervical tissue by immunohistochemistry, SPSS10.0 statistic software was used to analysis the database.ResultsThe proliferating cell nuclear antigen protein expression was positive in 66 of 73(90.4%) cervical cancer patients , whereas there were only 5 of 33 (15.2%) in normal cervical tissues, and the levels proliferating cell nuclear antigen protein expression in CIN was 72 of 122(59.0%),the difference among them was statistic significant. χ2=10.44,P<0.05，OR=5.96, 95% CI(2.02，17.60),so the high expression of proliferating cell nuclear antigen was a dangerous factor for cervical carcinogenesis ,and the status of age , clinicopathologic features such as TNM staging, differentiation, lymph node invading were correlated with the expression of proliferating cell nuclear antigen, and the histology of the cervical cancer was not correlated with the expression of proliferating cell nuclear antigen.ConclusionProliferating cell nuclear antigen plays a key role in carcinogenesis of cervical ,and postive expression of proliferating cell nuclear antigen gene may be used as a valuablely susceptible biomarker of human cervical cancers.the high express of PCNA in CIN may be a indicator for CIN to development to cancer.
【Key words】proliferating cell nuclear antigen(PCNA);cervical cancer;CIN;biomarker;immunohistochemistry
宫颈癌的发生是一个多因素相关疾病,从宫颈正常上皮组织历经CIN到原位癌到浸润癌,是一个多阶段的过程,其中增殖细胞核抗原PCNA是反映细胞增殖程度的客观指标,并已广泛用于肿瘤生物学行为的研究。本研究采用免疫组化技术通过检测PCNA在正常宫颈组织、CIN、宫颈癌组织中蛋白水平的表达差异比较来探讨其在宫颈癌发生发展过程中的作用及临床意义。
1对象与方法
1.1研究对象收集2004—2010年首次手术诊断未经治疗的原发性宫颈癌73例(鳞癌27例、腺癌 22例、小细胞癌11例、其他13例), 选择经子宫颈活组织检查确诊的子宫颈正常标本33例, CIN标本122例,范围在25~65岁。
1.2标本收集及处理宫颈癌组织标本取自病灶中央非坏死部分, 正常宫颈组织标本取自远离癌灶经病理组织学检查确无癌细胞浸润，CIN组织114份。宫颈组织标本离体后剪为2块,一块作冰冻或石蜡连续切片,用于病理组织学和免疫组化检测;一块用经焦碳酸二乙酯(DEPC)处理的冷PBS液冲洗,去血迹,置液氮速冻后转入-70℃冰箱保存。
1.3免疫组织化学检测PCNA基因的蛋白质表达切片经预处理,分别用购自Neomarkers 公司的鼠抗人的单克隆抗体PCNA Ab-1,按迈新公司超敏SP试剂盒(KIT9710)使用说明书检测程序进行，DAB显色,苏木素复染,光镜下观察。
1.4免疫组织化学染色结果判断每次检测试验均设阴性、空白及阳性对照，PCNA Ab-1免疫组化染色细胞质、核、膜呈棕黄色为阳性标记。先观察整张切片，肿瘤细胞着色淡且阳性细胞数<5%者为阴性;着色明显的阳性细胞数≥5%为阳性。
1.5统计学分析建立数据库，用SPSS11.0软件分析，计算其OR值及95%C.I，分析PCNA在不同组织间的表达差异和变化趋势,探讨其宫颈癌变中的发生作用。
2结果
2.1宫颈癌组织中PCNA的表达定位PCNA表达主要位于癌巢的细胞核,表达信号呈棕黄色,同时癌旁组织细胞也可见阳性表达，特别是距离癌巢较近的黏膜细胞呈现较强的着色，随着距离的增加，表达强度逐渐变低如图1，正常宫颈组织相对较弱或无表达信号如图2。
2.2PCNA在宫颈癌组织中的差异表达情况见表1，PCNA基因蛋白在宫颈癌、CIN、正常宫颈组织内的表达率依次降低，差异有显著性(χ2=10.44，P<0.05)。表1PCNA在宫颈癌、CIN、正常宫颈组织的表达
2.3宫颈癌组织PCNA基因的表达与病理学细胞类型和临床特征的关系见表2,PCNA蛋白表达与TNM分期，组织分化程度的高低，淋巴结有无转移有关，差异显著。而与组织学类型无关(χ2=4.48，P=0.21)。表2宫颈癌组织PCNA基因的表达与病理学细胞类型和临床特征的关系
3讨论
宫颈上皮内瘤变(CIN )和宫颈癌病人的年轻化越来越明显,在宫颈癌变的进程中,宫颈上皮内瘤样病变是浸润性宫颈癌的癌前病变, 其生物学行为难以预测。CIN总体上大约15%可发展为宫颈癌,CINⅠ,CINⅡ,CINⅢ发展为癌的危险分别为15%,30%,45%, 25%～30% 的病例将维持不变, 而30%～ 35% 将逆转消退[1]。因此，选择适当的时机采取适当的方法来检查治疗宫颈病变是临床医生面临的很有意义的课题，目前尚无效办法准确预测该病变的转归, 治疗和随诊都基于阴道镜检查、细胞学和组织学情况,因而有可能对某些病例治疗过度或治疗不当, 随着分子生物技术在临床上的应用，探讨一些可以用来预测CIN转归的生物指标很有实际意义，本文通过检测PCNA在不同阶段宫颈组织中的蛋白表达水平的差异比较,发现PCNA 的蛋白表达水平在宫颈癌病的过程中具有显著差异，有值得更深入探讨的价值。
3.1PCNA的生物学意义增殖细胞核抗原(PCNA)是一种分子量为36KD的蛋白质，在细胞核内合成，并存在于细胞核内，为DNA聚合酶δ的辅助蛋白。在细胞核内存在可溶性与不溶性两种PCNA，可溶性PCNA在细胞周期各期中均有表达，其量在DNA合成过程中不发生明显变化，易被去污剂提取、甲醇破坏;不溶性PCNA较稳定，不易被去污剂洗脱、甲醇破坏，这种PCNA在G0～G1期细胞中无明显表达，G1晚期，其表达大幅度增加，S期达到高峰，G2～M期明显下降，其量的变化与DNA合成一致，即分裂增殖状态的细胞,在细胞增殖和转化中,其变化程度反映了细胞生物活性,可用于良、恶性肿瘤的鉴别及预后评估。检测其在细胞、组织中的表达，可作为评价细胞增殖状态的一个指标,因此近年来掀起了对PCNA在肿瘤方面研究的热潮 [2,3]。Goel等人研究发现在CIN组织中有PCNA阳性表达高达81.6%，并随着CIN到癌的分级呈现增高的趋势[4]。
3.2CIN 和宫颈癌组织本研究结果显示，PCNA 的表达阳性率显著高于宫颈正常组织,且随着组织分级增高,其表达增强,表明CIN组织中细胞分裂,增殖状态活跃，与 Goel等人研究结果相似。可以认为,对CIN 进行PCNA检测,有助于量化其恶变潜能,为早期遏制其恶变治疗提供指导，对指导CIN人群选择有效的治疗方案有着重要的意义。在对CIN的治疗实践中，常存在着治疗不断和治疗过度、治疗后复发的情况出现[5，6]，如果进一步探索PCNA对CIN的转归预测，亦认为颇有价值。近年也有报道采用HPV -DNA 检测来预测或监测有CIN 复发及转癌的可能[7], 协助确定是否需要进一步处理。从目前的文献资料分析, 认为应根据病人具体情况, 如CIN 的程度、PCNA 表达水平, HPV 检测的结果、年龄、生育要求、心理素质、随诊条件等因素综合考虑, 合理选择其再处理的方式。总之, PCNA 的相对高表达与宫颈癌的发生密切相关，该基因的相对高表达可能是宫颈癌发生的一个标志,PCNA 是否作为诊断、判断预后和转归的指标,还有待于更大样本的临床资料来证实。(本文图片见封三)
【参考文献】
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