HPLC法测定感冒退热胶囊中绿原酸的含量

【摘要】  目的建立HPLC法测定感冒退热胶囊中绿原酸的含量。方法采用Gemini -C18柱(200mm×4.60mm, 5μm)，流动相为乙腈-0.3%磷酸(17：83)，流速为1.00ml/min，检测波长327nm，柱温为30℃。结果绿原酸进样量在0.0712～0.8902μg范围内与峰面积线性关系良好，r=0.9993(n=5),平均回收率为99.5%，RSD=1.7%(n=6)。结论该方法简便、准确、可靠、重现性好,可用于该制剂的质量控制。

【关键词】  感冒退热胶囊;绿原酸;HPLC;含量测定

　　感冒退热胶囊由金银花、板蓝根、连翘等六味药组成，具有清热解毒等功效。用于感冒发热、上呼吸道感染等。绿原酸是金银花有效成分之一。本品现标准中尚无含量测定项目，为有效控制感冒退热胶囊内在质量，本文选用绿原酸作为含量测定指标并加以控制，建立感冒退热胶囊中绿原酸HPLC含量测定方法，结果表明该方法准确，可靠，重复性好，可用于本品的质量控制。

　　1仪器与试药

　　岛津LC-20AT系列高效液相色谱仪(日本岛津)， AUW220D电子天平。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号110753-200413);感冒退热胶囊(邵东中医医院提供，批号120423 120512 120419);乙腈为色谱纯，自制纯化水，其他试剂均为分析纯。

　　2方法与结果

　　2.1色谱条件色谱柱：Gemini- C18柱(200mm×4.60mm,5μm);流动相：乙腈-0.3%磷酸(17：83);流速：1.00ml/min;检测波长：327nm; 柱温：30℃;进样量：10.00μl。

　　2.2对照品溶液的制备称取绿原酸对照品11.87mg，置50ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，即得储备液(237.4μg/ml)。精密量取储备液15ml，置100ml棕色量瓶中加50%甲醇稀释至刻度，即得(每1ml含绿原酸35.61μg)。

　　2.3供试品溶液的制备精密称取本品0.5g，置50ml棕色量瓶中，加50%甲醇超声处理30min，放冷，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。

　　2.4阴性对照溶液的制备按处方配比(缺金银花药材)照工艺制备成模拟口服液，按“2.3”项下的方法制成阴性对照溶液。

　　2.5干扰试验 照上述色谱条件，取上述三种溶液各10μl，分别进样，色谱图见图1。供试品色谱图中，在与对照品色谱图相应的保留时间处，有相同的色谱峰，而阴性对照溶液无干扰峰。

　　2.6线性关系考察将上述绿原酸对照品溶液，分别进样2.0μl，5.0μl，10.0μl，15.0μl，25.0μl，以平均峰面积为纵坐标，以进样量为横坐标，进行线性回归，得方程：Y=2.63×106X+3295，r=0.9993，线性范围为0.0712～0.8902μg。

　　2.7精密度试验取对照品溶液连续进样6次，每次10μl，记录峰面积， RSD为0.6%，表明精密度良好。

　　2.8稳定性试验取供试品溶液(批号120423)，分别于0、4、8、12、24h进样10μl，测得样品中绿原酸峰面积的RSD为1.5%，表明供试品溶液在24h内稳定。

　　2.9重复性试验精密取同一批号样品(批号120423)6份，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，依法测定，结果绿原酸含量的RSD为1.2%，表明本法重复性较好。

　　图1HPLC色谱图2.10加样回收率试验量取已知绿原酸含量的样品6份(批号为120423)，每份0.25g，分别加入绿原酸对照品储备液(237.4μg/ml)350μl，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，计算回收率，结果见表1。表1加样回收率试验(n=6)

　　2.11样品含量测定取3批样品, 按“2.3”项下的方法制备供试品溶液,进样10μl,照外标法(峰面积)计算绿原酸的含量,测定结果分别为：批号120423，含量为0.3260mg/g批号120512，含量为0.3342mg/g批号120419，含量为0.3309mg/g。

　　3讨论

　　考察了乙腈-1%冰醋酸、乙腈-0.4%磷酸[1]等流动相,最终确定乙腈-0.3%磷酸(17：83)作为流动相，流速为1.0ml/min，分离效果良好，分析快速准确，重复性好，回收率高。

【参考文献】
  　　1国家药典编委会.中国药典，一部.北京：化学工业出版社，2010：205-206.