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［摘 要］ 目的 比较四种黄酮类物质抗氧化能力和防止晚期糖化终末产物的形成能力。 方法 通过对黄连素，槲皮素，水飞蓟宾和水飞蓟素四种不同的黄酮类中药对肝匀浆中丙二醛（MDA）生成和晚期糖化终末产物（AGE）生成的抑制作用的研究，比较四种黄酮类物质预防糖尿病并发症的能力。 结果 水飞蓟素具有很好的抑制肝匀浆中丙二醛（MDA）生成和晚期糖化终末产物（AGE）生成作用，其IC50 分别为2×10-10 g.ml和5.6×10-4 g.ml。 结论 水飞蓟素可以用来预防糖尿病并发症。
［关键词］ 糖尿病并发症;黄连素;槲皮素;水飞蓟宾;水飞蓟素
Comparing inhibition effects of four drugs on ADM and advanced glycation endproducts in rats
GE Liang-peng，WEI Hong
The College of Life Science，Southwest Normal University，Chongqing400715，China
Abstract:Objective To compare the inhibition effects of four drugs on ADM and advanced glycation endproducts（AGE）.Methods The livers of Wistar rats were taken and weighed，and MDAwas measured withMDA kit before and after the liver homogenate was incubated with berber-ine，quercetin，silibinin，sematron at their concentrations of1×10-4 ，1×10-6 ，1×10-8 ，respectively.In control group，ddH2 O substituted for the four drugs.A total of4ml solution of HAS and0.01mol.L sodium phosphate and5mmol.L sodium azide were mixed with four drugs（1ml）re-spectively and incubated for35d and then stimulated under HITACHI850fluorospectrophotometer at350nm.The fluorescence intensity was mea-sured at420nm.The inhibition effects of four drugs on preventing diabetic complications were compared.Results Sematron has strong inhibition effects on ADM and AGE as compared with the other three drugs and its IC50 is2×10-10 g.ml and5.6×10-4 g.ml respectively.Conclusion Se-matron can be used in prevention of diabetic complications.
Keywords:diabetic complication;berberine;quercetin;silibinin;sematron
糖尿病是继心血管疾病和肿瘤之后危害人类健康的第三大疾病，全世界目前约有1.2亿糖尿病患者。糖尿病并发症是糖尿病患者致残致死的主要原因，而其发病机制十分复杂，多元醇代谢途径障碍，氧自由基含量升高，以及晚期糖化终末产物（AGE）的积聚都认为与糖尿病并发症的发生具有相关性［1］ 。最近的研究表明，黄酮类中药具有治疗糖尿病并发症的作用［2-3］ 。因此本文对四种不同的黄酮类中药（黄连素，槲皮素，水飞蓟宾和水飞蓟素）对糖尿病并发症发生的相关因素的抑制作用进行比较，通过体外实验寻找一种较好的抗糖尿病并发症药物进行更深入的研究。
1 材料与方法
1.1 试剂和药品
黄连素和槲皮素购自重庆中药研究所，水飞蓟宾和水飞蓟素购自辽宁盘锦格林恩生物有限公司。MDA试剂盒购自南京建成生物工程研究所，人血清白蛋白购自Sigma公司，其余试剂均为国产分析纯。
1.2 MDA抑制实验
Wistar大鼠处死，取肝脏，称重，用生理盐水制成30%的匀浆。加入不同浓度的H2 O2 ，用MDA试剂盒测定MDA生成量。用生理盐水将四种中药稀释成1×10-4 ，1×10-6 ，1×10-8 三个浓度。取肝匀浆0.5ml，加入H
2 O2 0.5ml和药物0.5ml，37℃，5%CO2 培养箱中温育2h，然后冰镇10min，测MDA生成量。对照组用双蒸水替代药物，其余条件完全一致。MDA的测定按试剂盒的说明进行。按下列公式计算抑制率:抑制率=（Cc-Cm）.Cc×100%，其中Cc为对照组MDA生成量，Cm为实验组MDA生成量。
1.3 晚期糖化终末产物（AGE）的抑制实验
将HAS溶解于含有5mmol.L的叠氮钠的0.01mol.L的磷酸纳缓冲液中（pH=7.4），终浓度为100mg.ml，0.22μm滤膜过滤除菌。取上述溶液4ml，加入1ml灭菌的20%葡萄糖溶液和1ml不同浓度的药物，37℃，暗处孵育35d，空白组加入1ml双蒸水替代不同浓度的药物，其余条件完全一致。然后用HITA-CHI850荧光分光光度计在350nm激发，420nm条件下测荧光强度［5］ 。抑制率公式同1.2。
2 实验结果
2.1 H2 O2 浓度对肝匀浆中自由基生成的影响
取30%肝匀浆，加入使H2 O2 使其终浓度为25mmol.L，50mmol.L，75mmol.L，100mmol.L，置37℃，5%CO2 培养箱中温育3h，按试剂盒方法测吸光度，结果见图1。
图1 H2 O2 对反应体系吸光度的影响 略
结果表明，体系吸光度随H2 O2 浓度的增大而增大，且肝匀浆中自由基的生成量与H2 O2 浓度一定的正相关。提示在肝匀浆中加入一定的H2 O2 后温育，可以模拟体内自由基增多的环境，借以考察药物对自由基的淬灭作用。
2.2 药物对肝匀浆MDA生成的影响
按1.2的方法，测得各种不同浓度的药物对MDA生成抑制情况见表1。
表1 不同药物对肝匀浆MDA生成的影响 不同浓度的抑制率（略）
结果表明，槲皮素和水飞蓟素对肝匀浆中MDA的生成有很强的抑制作用。
2.3 药物对晚期糖化终末产物生成的影响
按1.3的方法，测得各种不同浓度的药物对晚期糖化终末产物生成抑制情况见表2。结果表明，槲皮素和水飞蓟素对AGE的生成有很强的抑制作用，其中水飞蓟素最强。
3 讨论
糖尿病是一种慢性代谢性疾病，由于胰岛素相对或绝对的缺乏，形成体内持续高血糖环境，这种高血糖
表2 不同药物对晚期糖化终末产物生成的影响 不同浓度的抑制率（略）
环境可与体内的许多蛋白质发生非酶促糖基化反应，使这些蛋白质的功能发生改变，这是引起糖尿病并发症的一种重要机制。此外，糖尿病患者体内具有清除氧自由基作用的物质活性下降，脂质过氧化最终产物MDA含量升高。这种变化也是引起糖尿病并发症的一种主要原因。因此，要控制糖尿病并发症，必须严格控制血糖和提高机体抗氧化能力。最近的研究表明，黄酮类物质具有较强防止糖尿病并发症作用［5-6］ 。本文选择了四种黄酮类物质对其促抗氧化能力和防止晚期糖化终末产物的形成作用进行研究并比较，发现四种物质都有一定的作用。综合考虑，水飞蓟素的作用最强。这一结果提示我们，水飞蓟素可以通过抑制晚期糖化终末产物的形成和增强机体的抗氧化能力来预防糖尿病并发症，因而可以用于糖尿病并发症防治的药物进行详细的开发研究。
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［作者简介］ 葛良鹏（1982-），男，安徽省安庆市人，硕士，主要从事糖尿病方面的研究。电话:（023）68753882
1.西南师范大学生命科学学院，重庆400715;
2.第三军医大学实验动物中心，重庆400038
编辑:邱全光