氟化氨银局部应用防龋抑制口腔内变形链球菌效果观察

【摘要】  　　目的 探索氟化氨银局部应用对儿童口腔内变形链球菌的抑制效果，为开展儿童口腔保健、预防疾病提供依据。方法 将40名高龋儿童随机分成氟化氨银干预组、窝沟封闭组、联合干预组以及对照组，取其基线和干预后1周、4 周、8周的唾液样本，稀释后接种于培养变形链球菌的轻唾-杆菌肽琼脂(mitis salivarius bacitricin agar,MSBA)选择培养基，观察变形链球菌检出情况并记录每毫升菌落数。结果 氟化氨银组与窝沟封闭组和对照组、联合干预组与窝沟封闭组及对照组比较差异均有统计学意义(P值均＜0.05)，窝沟封闭组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，氟化氨银组与联合干预组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 氟化氨银有在短期内抑制口腔内变形链球菌生长的作用。

【关键词】  龋齿 氟化物 外用 链球菌 口腔 投药 局部 儿童

　　Impact of Topical Use of Silver Diamine Fluoride on Streptococcus Mutans Inhibition/

　　LIU Xuejun, ZHANG Jing, XUE Jing, et al.

　　School of Stomatology, Zhengzhou University, Zhengzhou(450052), China
   
　　【Abstract】  Objective  To study the inhibition effects of silver diamine fluoride on oral streptococcus mutans in children's saliva, and to provide bases for children's oral health. Methods  Forty children with high level of dmf were divided into four groups randomly, the treatments were as following: topical use of silver diamine fluoride(group A), pit and fissure sealants(group B), topical use of silver diamine fluoride+ pit and fissure sealants (group C) and control group. The salivary sample of all the subjects were collected for four times: before treatment(baseline), a week after treatment, four weeks after treatment, eight weeks after treatment. The samples were diluted and inoculated in the selective Mitis Salivarius Bacitricin Agar, the colony CFU/mL was recorded. Results  There was significant difference between group A and group B or control group, group C and group B and control group(P<0.05). There was no significant difference between group B and the control group(P＞0.05). Conclusion   Silver diamine fluoride is effective in reducing the growth of streptococcus mutans in children's saliva.
   
　　【Key words】  Dental caries; Fluorides, topical; Streptococcus oralis; Administration, topical; Child

　　针对高患龋风险儿童，应采取综合措施防止新生龋。尤其对于5～6岁替牙期儿童，由于新生恒牙正在萌出，而乳牙龋已经存在，更要采取预防措施，以抑制致龋菌在口腔内的生长［1-2］。氟化氨银(Ag(NH3)2F，SDF)应用于儿童防龋效果得到广泛肯定，不断有实验报道其有促进再矿化及防龋效果；但对于氟化氨银的防龋机制理论还需要进一步探讨。唾液中致龋菌水平与龋失补牙数呈正相关，而通过对致龋菌的检测，可预测患龋风险、评估防龋效果。本实验在探讨氟化氨银预防治疗乳牙龋效果的同时，研究其对口腔中变形链球菌的影响。

　　1  对象与方法

　　1.1  对象  2007年3月17日-9月17日，由郑州大学口腔医院组织的针对郑州市区儿童口腔卫生检查中，随机抽取年龄6岁、龋失补指数dmft>4［3］的儿童40名(男童22名，女童18名)。要求患者无严重系统性疾病，无牙髓炎及根尖周炎，第一恒磨牙已完全萌出且未做过窝沟封闭。经郑州大学伦理委员会同意和家长在知情书签字后作为研究对象。

　　1.2  方法

　　1.2.1  实验分组  将40名儿童随机分成4组：10人为实验组A，对全部乳牙龋表面涂布38%SDF干预；10人为实验组B，对第一恒磨牙窝沟涂布窝沟封闭剂干预；10人为实验组C，使用窝沟封闭剂和SDF联合干预对全部乳牙龋表面抹布38%SDF，同时对第一恒磨牙涂布窝沟封闭剂；10人作为对照组不进行任何干预。

　　1.2.2  取样时间与方法  采用1997年WHO制定的口腔健康调查基本方法，使用一次性检查器械，检查由同一名口腔医生担任。于每天9：00-10：00取样，用无菌口杯取口腔内非刺激性全唾液标本，用移液器取0.1 mL唾液置于装有0.9 mL林格氏液的无菌1.5 mL离心管中，带回实验室进行培养。
   
　　将无菌离心管中的唾液样本于0.5 h内经充分震荡60 s后，用林格氏液连续倍比稀释，获得从10-1～10-5的唾液细菌稀释液。变形链球菌接种液稀释浓度为10-4，取0.05 mL接种于直径为7.5 cm的含轻唾培养基的平皿。接种液滴于平板中央，用灭菌L型玻璃棒均匀涂布后装入厌氧发生罐，置于培养箱培养3 d。
   
　　通过菌落形态学特点和直接菌落涂片后革兰染色，显微镜下观察，初步判断在上述初步鉴定的基础上通过生化反应，鉴定变形链球菌。对培养基平皿上已经确定的菌落进行计数，计算每毫升菌落数(CFU/mL)，将细菌计数采用对数转换为Log10CFU。第1次(基线)取样后，对各组儿童分别采用相应的干预治疗措施(见实验分组)，干预后1周，第2次取样；干预后4周，第3次取样；干预后8周，第4次取样。

　　1.3  统计学分析  细菌计数资料实验数据用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析，采用重复测量的方差分析。

　　2  结果
   
　　实验组A经涂布38%SDF 1周、4周、8周后，口腔内变形链球菌数量与基线之间差异有统计学意义(P＜0.05)；实验组B经涂布窝沟封闭剂1周、4周、8周后，口腔内变形链球菌数量与基线差异无统计学意义(P＞0.05)；实验组C经涂布38%SDF和窝沟封闭剂1周、4周、8周后，口腔内变形链球菌数量与基线差异有统计学意义(P＜0.01)。
   
　　4种不同方法处理后变形链球菌计数差异有统计学意义(P＜0.05)。两两比较显示，氟化氨银组与对照组间差异有统计学意义(P＜0.05)，联合干预组与对照间差异有统计学意义(P＜0.05)，窝沟封闭组与对照组间差异无统计学意义(P＞0.05)，窝沟封闭组、氟化氨银组和联合干预组之间差异均有统计学意义(P值均＜0.05)，氟化氨银组与联合干预组间差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

　　表1  不同实验组干预前与干预后不同时间变形链球菌菌落计数比较（略）

　　3  讨论
   
　　氟化氨银是由日本学者山贺礼一等最先研究并介绍的抑龋药物，局部应用SDF的临床实验结果显示其具有较强的防龋抑龋作用，可有效预防儿童龋病和抑制根面龋的发展，同时具有促进再矿化的作用［4-6］。国内近年也有部分研究证实氟化氨银的抑龋效果，并对其作用机制进行了有益的探讨［7-8］。综合国内外的研究，主要在于其防龋效果的观察，及对其作用于牙本质表面再矿化特性的研究［9］。本研究探索了局部应用38%Ag(NH3)2F对替牙期高龋儿童龋病的控制，同时通过与窝沟封闭对照，观察口腔内变形链球菌的改变情况。
   
　　本研究结果显示，实验组A单独使用38%Ag(NH3)2F涂布乳牙表面1周后、4周后、8周后，儿童口腔内变形链球菌与治疗前差异有统计学意义，即对于高患龋儿童涂布38%Ag(NH3)2F后，可以抑制口腔内变形链球菌的生长。在涂布38%Ag(NH3)2F 1周后与4周后、1周后与8周后、4周后与8周后，口腔内变形链球菌之间差异均无统计学意义，说明38%Ag(NH3)2F可以在8周内持续发挥其抑菌作用，抑菌效果没有明显下降。这些与国外对氟化氨银抑菌性的体外研究结果［10-11］相符，证明38%Ag(NH3)2F对于变形链球菌短期具有抑制作用，但是否涂布38%Ag(NH3)2F后具有6个月以上的长期抑菌效果、对于其他口腔致病菌是否也有抑制作用，以及是否会产生耐氟菌株等，还需要做进一步研究。
   
　　本研究结果还显示，实验组B单独对已萌出的第一恒磨牙窝沟封闭，治疗前口腔内变形链球菌和治疗1周、4周、8周后差异均无统计学意义，说明单独使用窝沟封闭剂不能抑制变形链球菌生长，与Carlsson等［12-13］的研究结果相符。提示针对替牙期儿童仅采用窝沟封闭并不能减少口腔内其他牙齿的患龋风险，必须采用针对整个口腔的预防保健措施。
   
　　实验组C在对乳牙表面涂布38%Ag(NH3)2F的同时对已萌出的第一恒磨牙进行窝沟封闭，1周、4周、8周后儿童口腔内变形链球菌与治疗前差异有统计学意义，即对于高龋儿童采取窝沟封闭剂与38%Ag(NH3)2F联合应用，可以抑制口腔内变形链球菌的生长。提示38%Ag(NH3)2F和窝沟封闭剂同时使用可以降低儿童的患龋风险。在替牙期，针对混合牙剂分别对乳牙涂布氟化氨银、对新生恒磨牙进行窝沟封闭是行之有效的。
   
　　龋病与细菌、宿主、食物等诸多因素有关，因此应当采取综合的预防措施预防龋病。在替牙期，一方面针对细菌通过氟化氨银抑制口腔唾液内变形链球菌的生长；另一方面针对宿主和食物因素积极采取口腔健康教育和窝沟封闭相结合等综合措施，能有效地降低新生恒牙的患龋率。氟化氨银的防龋效果，除抑制变形链球菌以外，对其他致龋菌的抑制作用也有文献提及，另外其促进矿化与再矿化的作用也是其防龋的主要机制。

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　　［12］CARLSSON A, JONSSON Y. Pit and fissure sealing and mutans streptococci levels in saliva. Am J Dent, 1992,5(5):280-282.

　　［13］MATALON S, SLUTZKY H. Surface antibacterial properties of fissure sealants. Pediatr Dent, 2003,25(1):43-48.

作者单位：郑州大学口腔医学院，河南 450052