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首页合作平台在线期刊中华现代临床医学杂志2004年第2卷第5A期

津力达口服液治疗糖尿病实验研究

来源:中华现代临床医学杂志
摘要:津力达口服液系人参、黄精、苍术等中药组成复方,依据中医健脾运津、益气养阴的功能,主治消渴病(糖尿病)口渴多饮、消谷运津、尿多而甜、形体消瘦、体倦懒言等症。本研究皆在证实津力达口服液对实验性高血糖动物的治疗作用,以及对正常动物的影响。1药物津力达口服液,提取浸膏1。1对高血糖大鼠模型的影响大鼠经尾......

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津力达口服液系人参、黄精、苍术等中药组成复方,依据中医健脾运津、益气养阴的功能,主治消渴病(糖尿病)口渴多饮、消谷运津、尿多而甜、形体消瘦、体倦懒言等症。本研究皆在证实津力达口服液对实验性高血糖动物的治疗作用,以及对正常动物的影响。

1 实验材料

1.1 药物 津力达口服液,提取浸膏1.59g生药/ml,石家庄高新技术开发区医学研究所提供;盐酸苯乙双胍片(降糖灵),25mg/片,批号:9304213,北京制药厂出品;优降糖片,2.5mg/片,批号:9502208,北京制药厂出品;0.1%盐酸肾上腺素注射液,批号:94100514,北京永康制药厂出品;四氧嘧啶(Alloxan),Sigma公司;胰岛素药盒,北京北方免疫试剂研究所出品;黄嘌呤出口分装;黄嘌呤氧化酶Sigma公司出品;鲁米诺,德国Biegriger Mannheim公司出品。牛胰岛素(27.3U/mg),Sigma I5500产品。牛血清γ-球蛋白,Sigma产品。 125 Ⅰ-胰岛素(比放射性135μCi/μg),北京福瑞生物工程公司出品;Bio-Rad Protein Assay,美国产品;聚乙二醇(PEG),进口分装,批号:930828,天津天泰精细化学品有限公司;氢氧化钾,二级,批号:790420,北京化工厂;三氯醋酸,化学纯,批号:900220,上海化学试剂三厂;冰醋酸,分析纯,批号:951204,北京化工厂;蒽酮,化学纯,批号:980818,北京金龙化学试剂有限公司;硫酸,分析纯,批号:950905,北京顺义县李遂化工厂;葡萄糖,分析纯,批号:971220,北京国华化学试剂厂。

1.2 动物 Wistar种大白鼠,雄性,体重(180±20)g,中国医学科学院实验动物中心提供,合格证号:9209R018。昆明种小白鼠,雄性,体重(25±2)g,中国中医研究院实验动物中心提供,合格证号:京动字01-3064。

1.3 仪器 FT-630G全自动r计数仪(北京);55P-72超速离心机(日本);UV-365双重单色自动记录分光光度计(日本);XHF-1高速分散器(上海)。

2 实验方法

2.1 对高血糖大鼠模型的影响 大鼠经尾静脉注射2%四氧嘧啶溶液75mg/kg造成大鼠高血糖模型 [1,2] ,72h后选择血糖值为350~400mg/dl的动物用于试验,分为5组,每组10只。(1)空白对照组;(2)模型组;(3)津力达口服液5g/kg组;(4)津力达口服液1g/kg组;(5)降糖灵0.08g/kg组。灌胃给药每日1次,连续2周,分别于药后7、14天断尾取血,用血糖仪测定血糖值,并在第14天经腹主动脉取血按放射免疫法使用FT-630G全自动r计数仪测定胰岛素,用S.500P型半自动生化分析仪测定胆固醇、甘油三酯,用SH-1型生物化学发光仪测定血清超氧化物歧化酶等指标。试验分为空白对照组,模型组,津力达口服液5g/kg组,津力达口服液1g/kg组。灌胃给药每日1次,连续10天,对照组及模型组给予等体积蒸馏水。第10天,经腹主动脉取血,按NBT法测定糖化血清蛋白(果糖胺)mmol/L。

2.2 对高血糖大鼠肝细胞膜受体的影响 试验分(1)空白对照组;(2)模型组;(3)津力达口服液5g/kg组,灌胃给药每日1次连续2周。

按严孝强等方法 [3] 进行肝细胞膜制备。大鼠断头处死,立即取肝在冰浴中去除结缔组织,匀浆20min,用5层纱布过滤,12000rpm离心40min,取其沉淀于冰浴中手动匀浆,收集样品液3.5ml,滴加70%蔗糖(W/W)使其浓度达48%。将样品液装入离心管底,在上层铺上蔗糖(W/W)45%、41%、37%各9ml、8ml、7ml,水平转头25000rpm离心3h,收集37%/41%界面的膜成分用1mMNaHCO 3 (pH值7.5)稀释后离心40min,收集其沉淀于冰浴手动匀浆,分装,置-40℃存放。按Coomassie blue法 [4] 测定膜蛋白浓度。

在冰浴中分别加入试管0、0.1、0.3、1、3、10、30、100、300、1000ng/ml不同浓度的牛胰岛素,随即加入 125 Ⅰ-胰岛素100pg的无钙3%BSA-KRB50μl( 125 Ⅰ-胰岛素比放射性135μCi/μg),解冻的膜蛋白100μl,加入0.1%BSA-KRB至最终浓度体积250μl,混匀4℃放置24h。

反应终止时,加15.8%聚乙二醇0.8ml,0.3%牛血清γ-球蛋白0.1ml,混匀4℃放置20min,2000rpm离心15min,取沉淀进行计数。

实验数据按Scatchard分析获得高低亲和常数k 1 、k 2 (mol/L)和受体数R 1 、R 2 (mol/mg膜蛋白)。

2.3 对高血糖小鼠肝糖原合成的影响 经尾静脉注射1% 四氧嘧啶溶液90mg/kg造成小鼠高血糖模型,72h后选择血糖值为350~400mg/dl的动物用于实验,分为5组,每组9只,(1)空白对照组;(2)模型组;(3)津力达口服液7g/kg组;(4)津力达口服液1.4g/kg组;(5)降糖灵0.2g/kg组。灌胃给药,每日1次,连续7日,空白对照组、模型组给予等容积的蒸馏水。动物禁食,给药1h后腹腔注射葡萄糖2.0g/kg,注射后1h处死动物,取适量肝脏,加入5%三氯醋酸制成5mg/ml的肝匀浆,离心取上清液1ml,置于10ml刻度试管中,加入10mol/L氢氧化钾1ml,煮沸1h。冷却后加0.5ml冰醋酸中和过量碱,并用蒸馏水补足至10ml。取此液1ml,加入2ml蒽酮试剂,迅速将试管浸入冰水浴中冷却。随后再煮沸10min。取出冷却后进行比色,测定光密度值(λ=650nm),根据标准曲线计算肝糖原含量(mg/g肝)。实验数据进行统计学处理t检验

2.4 降血糖作用时效实验 [1] 四氧嘧啶高血糖大鼠20只分为对照组和津力达口服液5g/kg组,测定药前空腹血糖作为药前值,灌胃给药7天,对照组给予等量蒸馏水。禁食3h后给药,测定0、2、4、6h血糖值与药前比较,其变化百分率进行组间比较,进行统计学处理t检验,并绘制作用时效曲线。

2.5 对正常大鼠糖耐量的影响 将大鼠40只随机分为4组,每组10只,(1)空白对照组;(2)津力达口服液5g/kg组;(3)津力达口服液1g/kg组;(4)优降糖0.1g/kg组。试验前动物禁食12h,各给药组灌胃给药,对照组给予等体积蒸馏水。1h后腹腔注射葡萄糖2g/kg,分别测定0、0.5、1、2h的血糖值,绘制葡萄糖耐量曲线,计算曲线下面积 [5]

2.6 对正常大鼠血糖、血清胰岛素的影响 将大鼠随机分为5组,每组10只,(1)空白对照组;(2)津力达口服液5g/kg 组;(3)津力达口服液2.5g/kg组;(4)津力达口服液1g/kg组。分别测定药前空腹血糖值(mg/dl),灌胃给药7天后再次测定空腹血糖值(mg/dl),经腹主动脉取血,按放射免疫法测定血清胰岛素含量(μIU/ml)。

3 实验结果

3.1 对四氧嘧啶型高血糖大鼠血糖的影响 注射四氧嘧啶72h后大鼠血糖升高呈现持续高血糖状态,与对照组比较差异有非常显著性(P<0.01)。津力达口服液5g/kg组 在药后第7天血糖值下降25.56%,第14天下降了29.2%,与模型组比较差异均有非常显著性(P<0.01);1g/kg组药后7天血糖值下降8.09%,14天下降8.36%,与模型组比较无统计学差异(P>0.05)。阳性对照药降糖灵在药后第7、14天血糖值明显下降,与药前比较血糖值分别下降28.84%、36.6%,与模型组比较差异均有非常显著性(P<0.01)。

3.2 对高血糖大鼠血糖胰岛素、胆固醇、甘油三酯及血清超氧化物歧化酶的影响 动物静脉注射四氧嘧啶后血中胰岛素、胆固醇、SOD含量与对照组比较明显下降(P<0.01),甘油三酯则高于对照组(P<0.01)。津力达口服液5g/kg、1g/kg剂量组均能明显提高血中SOD含量与模型组比较差异有显著性(P<0.01、P<0.05),但对胰岛素、胆固醇、甘油三酯无明显影响(P>0.05)。降糖灵可使血中胰岛素水平明显恢复(P<0.01)。见表2。

表1 对四氧嘧啶型高血糖大鼠血糖的影响 (略)

表2 对高血糖大鼠胰岛素、胆固醇、甘油三酯及SOD的影响 (略)

3.3 对高血糖大鼠糖化血清蛋白(果糖胺) 模型组糖化血清蛋白值明显升高,与对照组比较差异有显著性(P<0.01),津力达口服液5g/kg组糖化血清蛋白值明显低于模型组(P<0.05),1g/kg组呈下降趋势,但差异无显著性(P>0.05)。见表3。

3.4 对高血糖大鼠肝细胞膜胰岛素受体的影响 模型组肝细胞膜胰岛素受体数目明显高于对照组(P<0.01),与秦光彩等 [6] 文献报道相似,亲和常数与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。津力达口服液治疗性给药2周可明显增加胰岛素受体数目,与模型组比较差异有显著性(P< 0.01),而对高低亲和常数无明显影响。见表4。

表3 对高血糖大鼠糖化血清蛋白(果糖胺)的影响 (略)

表4 对大鼠肝细胞膜胰岛素受体的影响 (略)

3.5 对高血糖小鼠肝糖原合成的影响 模型组肝糖原含量明显低于空白对照组(P<0.01),表明高血糖小鼠糖代谢异常,肝糖原合成减少;津力达口服液5g/kg、1g/kg剂量组肝糖原含量均明显高于模型组(P<0.01),表明津力达口服液具有促进肝糖原合成的作用。见表5。

3.6 降血糖作用时效实验 见表6,图1。如图表所示,津力达口服液在药后2h血糖值开始下降,4h下降了28.58%,与对照组相比差异有显著性(P<0.01),6h后有所回升,但与对照组比较差异仍有显著性(P<0.05),表明津力

作者: 洪晓华于魏林李映欧李艳荣石体仁刘京华&n 2005-9-22
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