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【摘要】 目的 探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者血清中的抗核抗体（ANA）各种荧光核型及其与抗双链DNA（dsDNA）抗体指标的关系。方法 采用间接免疫荧光法检测56例SLE患者血清中ANA，ELISA方法检测抗dsDNA抗体。结果 检测56例SLE患者，其中45例ANA为均质型，11例为颗粒型，前者占患者的80%。但两型统计学上差异无显著性。其中45例均质型患者抗dsDNA抗体浓度均>30IU/ml，与颗粒型患者抗dsDNA抗体浓度间统计学Ridit分析差异有显著性（P<0.05），且抗dsDNA抗体含量与均质型的荧光强度呈正比。结论 检测ANA的核型表达，同时测定抗dsDNA抗体，可以动态地观察抗体滴度变化情况，为监测治疗提供有效的依据。
关键词 系统性红斑狼疮 抗核抗体 抗双链DNA抗体 酶免疫荧光 荧光核型 酶免疫吸附
The relationship between ANA fluorescence
patterns and anti-dsDNA in SLE
Cai Yiting，Xie Songye，Ding Lili
Shanghai First People’s Hospital，shanghai Jiao Tong University，Shanghai200080.
【Abstract】 Objective To explore the ANA fluorescence patterns in serum of patients suffered systemic lupus erythermatosus（SLE）and investigate the relationship with anti-dsDNA concentration.Methods ANA was detected by indirect immunofluorescence assay（ⅡFA），anti-dsDNA was detected by ELISA in56SLE patients.Results There are45cases of homogeneous cases，which comprise80%of the56total casesand11granular cases.But there is no significant difference between the two patterns.The anti-dsDNA concentrations of the45patients with homogeˉneous pattern are higher than30IU/ml，which is significantly different with the anti-dsDNA concentrations of patients with granular pattern and the anti-dsDNA concentration increases in proportion to the florescent intensity of homogeˉneous pattern.Conclusion Detecting ANA patterns，combined with the determination of anti-dsDNA concentrations can observe the alteration of the antibody titer dynamically，which is useful for monitoring the effectiveness of treatment in SLE patients.
Key words SLE ANA anti-dsDNA enzyme immunofluorescence fluorescence pattern ELISA
系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）属于自身免疫性疾病，女性发病率较高，过去采用狼疮细胞涂片检查和自身抗体检测等方法，结果特异性和敏感性均不满意。近年来出现许多新的检测方法，本文采用欧蒙公司提供的酶联免疫荧光化学试剂检测SLE患者血清中抗核抗体（ANA），通过观察其阳性的核型定位和形态，同时用酶联免疫吸附测定（ELISA）方法定量检测dsDNA抗体，从中探讨荧光核型与抗dsDNA抗体之间的关系。
1资料与方法
1.1 标本来源 本院住院或门诊确诊SLE患者共56例，其中女54例，男2例。年龄11～81岁，平均40岁。
1.2 操作方法
1.2.1 抗核抗体（ANA）的检测 采用欧蒙公司提供的试剂盒（批号:T30607H），间接免疫荧光法:将患者血清以1:100、1:250、1:500、1:1000稀释后滴加于包被有HEp-2细胞的膜条上，血清中的特异性抗体与固相上细胞中的抗原结合，再滴加荧光素标记的抗人抗体，与已经结合的抗体反应，若血清中有特异性的抗体，呈现特异性的荧光，荧光显微镜下观察，荧光强度与抗体滴度相关。
1.2.2 抗dsDNA抗体的检测 采用BINDAZYME提供的试剂盒（批号:075122C），ELISA法:将患者血清稀释后滴加于包被有dsDNA抗原的微孔内，抗原与血清中的特异性抗体结合，再滴加纯化的过氧化物酶标记的兔抗IgG抗体，与已被俘获的自身抗体结合，显色的深浅与自身抗体的含量呈一定比例关系。
1.2.3 统计学方法 采用按等级分组Ridit法（参照单位分析）。
2 结果
2.1 结果判断 ANA反应性:阴性，1:100无荧光反应。阳性，滴度1:100或更高，可见到清晰的荧光核型。荧光核型可分为均质型、颗粒型、混合型。其中混合型又分为三种即均质型和颗粒型混合，均质型和核膜型混合，均质型和抗着丝点型混合。抗dsDNA抗体:<30IU/ml，阴性;30～75IU/ml，临界值;>75IU/ml，阳性。
2.2 结果 所有SLE病例ANA滴度均>1:100为阳性，其中抗体滴度≥1:1000的病例有48例，1:500的病例有6例，1:250的病例有2例。在Hep-2细胞上显示细胞核的荧光核型均质型14例，颗粒型11例，混合型31例。在混合型中，均质型/颗粒型的有27例，均质型/核膜型的有3例，均质型/抗着丝点型1例。具体结果见表1。
从表中可以看出，所有的56例ANA阳性的结果中，有45例ANA核型中存在均质型，占全部结果的80%。但以均 质型作为标准组做比较，95%平均Ridit可信区间均有重叠，说明ANA滴度与各型ANA之间差异无显著性。
在所有的56例标本中，有50例抗dsDNA抗体结果>30IU/ml，占89%，>75IU/ml的有40例，
占71%。与核型的关系见表2。
表1 各型ANA所得ANA滴度参照单位分析略
表2 各型ANA所得抗dsDNA抗体参照单位分析略
从表中可看出，50例抗dsDNA抗体>30IU/ml的结果中，共有45例ANA核型中存在均质型，占89%。其中42例抗dsDNA抗体大于75IU/ml的ANA核型全部存在均质型，且ANA滴度均大于1:1000，在10例抗dsDNA抗体的结果为30～75IU/ml中有5例ANA核型中存在均质型，另5例的核型为颗粒型，余下的6例dsDNA抗体结果小于30IU/ml的核型均为颗粒型。提示抗dsDNA抗体的含量与均质型的荧光强度呈正比。从统计学结果也显示含有均质型核型的高滴度的ANA检出的高抗dsDNA抗体结果人数确实比1:250滴度ANA及颗粒型人数多，差异有显著性（P<0.05）。
3 讨论
SLE作为女性中多发的自身免疫性疾病，可侵犯身体多脏器，影响累及脏器的功能，因而临床表现缺乏特异性，临床上常引起误诊和漏诊。准确特异的实验室诊断有助于明确
诊断。
SLE免疫学的显著特点为出现抗核抗体。其中抗dsDˉNA抗体最为特异，几乎仅在SLE病人中发现抗dsDNA抗体，因使用的实验方法和疾病活动度不同，其发生率为 60%～90%，在Hep-2细胞上显示为细胞核的均质型荧光 ［1］ 。从本实验可看出，在所有的56例SLE病人中有45例ANA核型中存在均质型，占全部结果的80%。统计学结果显示，95%平均Ridit可信区间均有重叠，说明差异无显著性。通过ELISA方法检测全部的45例抗dsDNA抗体结果均大于30IU/ml。依统计学的结果，95%平均Ridit可信区间非重叠说明有差别（P<0.05），显示核型中含有均质型的高滴度的ANA检出的抗dsDNA抗体高，结果确实比核型中含均质型的1:250滴度ANA及颗粒型差异有显著性。抗dsDNA抗体的含量与均质型的荧光强度呈正比。
值得注意的是，均质型的荧光核型不仅仅为抗dsDNA抗体所特有，另一种自身抗体-抗组蛋白抗体所表现出来的荧光核型也为均质型 ［1］ 。在实验中，我们也检测到临床诊断并非SLE的患者血清中出现高滴度的ANA均质型的荧光，但是用ELISA方法检测抗dsDNA抗体结果均小于30IU/ml。因此，ANA、抗dsDNA抗体联合检测，可用于鉴别诊断SLE与其它疾病。
SLE的实验室诊断原先多采用形态学检查，特异性和阳性率较低，现已基本弃用。免疫电泳等方法虽然阳性率有所提高，但操作较复杂，结果重复性也偏低。近年来采用免疫化学的方法检测血液中的抗体，其结果的敏感性和准确性明显提高，侯丽燕等 ［2］ 采用胶体金快速斑点渗滤技术（DIGFA）检测dsDNA抗体，并和马疫锥虫间接荧光抗体染色比较，二者之间的阳性符合率为94.44%，而阴性符合率达100%。董巍等 ［3］ 采用ELISA的方法测定血液中dsDNA的水平，结果表明ELISA方法不仅可以定量检测血清中dsˉDNA抗体，同时和其他方法比较具有较好的一致性，可以替代其他方法作为临床检测试验。我们所采用的免疫荧光方法检测ANA由欧蒙公司提供，通过观察其阳性结果的核型表达，结合ELISA方法定量测定抗dsDNA抗体，可以动态地观察抗体滴度的变化情况，由于抗体滴度与疾病活动度存 在相关性，因此抗体滴度的测定为监测治疗提供了有效依据，提高了检测的敏感性和特异性，具有结果直接易见，操作方便等优点。
参考文献
1 马东来，张少静，（德）文夫瑞德·斯特克.自身抗体及其免疫荧光模式.北京:北京科学技术出版社，2000，7-8，39-41.
2 侯丽燕，陈燕，何晓琥，等.抗dsDNA抗体两种检测方法的比较.风湿病学杂志，1997，2（4）:30-32.
3 董巍