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【摘要】 目的 观察肿瘤患者放、化疗后外周血淋巴细胞损伤及免疫功能损伤，并观察双灵固本散（中华灵芝宝）的保护作用。方法 60例肿瘤患者分成四组，分别为放疗对照组、服用双灵固本散放疗组（双灵放疗组）、化疗对照组和服用双灵固本散化疗组（双灵化疗组）。用CB法测定外周血双核淋巴细胞微核率，比较四组肿瘤患者在放、化疗前、后外周血双核淋巴细胞微核率（MNR）、T淋巴细胞转化率（TLTR）及免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）的变化。结果 放疗对照组和化疗对照组放、化疗后MNR（‰）显著性升高，而TLTR（%）和Ig（
IgG、IgA、IgM）均显著性降低;双灵放疗组和双灵化疗组在放、化疗后，MNR（‰）、TLTR（%）和免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）均无显著性变化。四组肿瘤患者放、化疗后外周血双核淋巴细胞微核率（‰）与T淋巴细胞转化率（%）呈负相关关系。结论 双灵固本散对肿瘤患者放、化疗后外周血淋巴细胞损伤和免疫功能损伤有明显保护作用。
关键词 肿瘤患者 放、化疗 双灵固本散双核淋巴细胞微核率 T淋巴细胞转化率 免疫球蛋白
Study on the GCP protecting the patients with tumor from the
injury of peripheral blood lymphocytes after radiotherapy or chemotherapy
Huang Shichao，Mao Minghua，Chen Jinsheng，et al.
Shanghai Fudan Lvyuan Department of Out-Patient with Tumor，Shanghai200032.
【Abstract】 Objective To explore the Ganoderma Complex Power（GCP）protecting the patients with tumor from the injury of perepheral blood lymphocytes and immunity after radiotherapy or chemotherapy.Methods The60patients with tumor were divided into four groups，namely the radiotherapy control group、the taking GCP radiotherapy group（GCP radiotherapy group）、the chemotherapy control group and the taking GCP chemotherapy group（CGP chemotherapy group）.A comparison was made in the four groups by measuring their cytokinesis-blocked micronucleˉus rates in peripheral blood lymphocytes（MNR）、T lymphocyte transformation rates（TLTR）and immunoglobulin（Ig，-IgG、IgA、IgM）.The MNR was measured by the CB method.Results Compared with those before therpay，the MNR in the two control groups after radiotherapy or chemotherapy was significantly increased，but the TLTR and the Ig（IgG、IgA、IgM）significantly decreased.The MNR、the TLTR and the Ig（IgG、IgA、IgM）in the two GCP groups after radiotherapy or chemotherapywere no significantly differentwith those before the therapy.There existed a negative corˉrelation between the MNR and the TLTR in the four groups.Condusion The Ganoderma complex Power（GCP）could protect obviously the patients with tumor from the injury of perepheral blood lymphocytes and immunity after raˉdiotherapy and chemotherapy.
Key words patients with tumor radiotherapy or chemotherapy Ganoderma Complex Power（GCP） micronuˉcleus rates in lymphocytes（MNR） T lymphocyte transformation rates（TLTR） immunoglobulin（Ig，-IgG、IgA、IgM）
细胞微核是细胞在有丝分裂时，因各种有害因素损伤，使细胞核成份残留在核外的微小核染色质（DNA）块。细胞微核率可作为评价药物、放射线对人、动物及体外细胞DNA损伤的直观、可靠的方法 ［1］ 。
人外周血淋巴细胞微核率的检测已用于监测化学药物和放射线所致DNA损伤效应 ［1，2］ 。用细胞松弛素B阻断胞质分裂，观察双核淋巴细胞中微核率的方法（简称CB法），使观察的双核细胞均经一次分裂，因此CB法使淋巴细胞微核检测更为敏感、完善、合理 ［3，4］ 。本研究通过CB法测定外周血双核淋巴细胞微核率并用常规方法测定T淋巴细胞转化率、免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）。以观察肿瘤患者放、化疗后外周血淋巴细胞损伤和免疫功能改变及双灵固本散的保护作用。
1 对象与方法
1.1 研究对象 恶性肿瘤患者共60例，平均年龄51.1±6.9（37～83）岁，男40例，女20例，其中消化道癌20例，乳腺癌20例，肺癌20例，60例中进行放射治疗的患者20例，进行化疗的患者40例。
1.1.1 恶性肿瘤放疗组 共20例，按是否服用双灵固本散（中华灵芝宝）分为二组，二组患者一般情况见表1。
表1 二组放疗患者一般情况比较略
1.1.1.1 服用双灵固本散放疗组（简称双灵放疗组） 共10例，男6例，女4例，平均年龄（51.7±7.4）岁，其中消化道癌3例，乳腺癌4例，肺癌3例，在放疗前5天起服用双灵固本散（中华灵芝宝），每日2次，每次2g，体重超过60kg者，每日3次，每次2g，连续服用，在放疗前2～3天及放疗10次（累计放疗剂量1800±173cgy）后第1～2天，测定外周血双核淋巴细胞微核率（‰）及T淋巴细胞转化率（%）、免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）。
1.1.1.2 放疗对照组 共10例，男7例，女3例，平均年龄 （52.6±6.4）岁，其中消化道癌3例，乳腺癌3例，肺癌4例，在放疗前2～3天及放疗10次（累计放疗剂量1780±166cgy）后第1～2天，测定外周血双核淋巴细胞微核率（‰）及T淋巴细胞转化率（%）免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）。
由表1可见，二组患者的平均年龄、性别比、各癌症病种人数构成及10次放疗累计剂量差异均无显著性。
1.1.2 恶性肿瘤化疗组 共40例，按是否服用双灵固本散（中华灵芝宝）分为二组，每组20例，二组患者一般情况见表2。
表2 二组化疗患者一般情况比较 略
1.1.2.1 服用双灵固本散化疗组（简称双灵化疗组） 共20例，男14例，女6例，平均年龄（50.2±15.2）岁，其中消化道癌7例，乳腺癌6例，肺癌7例，在化疗前5天起服用双灵固本散（中华灵芝宝），每日2次，每次2g，体重超过60kg者每日3次，每次2g，连续服用。在化疗前2～3天及化疗1个疗程后第2～3天，测定外周血双核淋巴细胞微核率（‰）及T淋巴细胞转化率（%）、免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）。
1.1.2.2 化疗对照组 共20例，男13例，女7例，平均年龄（50.8±11.2）岁，其中消化道癌7例，乳腺癌7例，肺癌6例，在化疗前2～3天及化疗1个疗程后第2～3天测定外周血双核淋巴细胞微核率（‰）及T淋巴细胞转化率（%）、免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）。
由表2可见，二组患者的平均年龄、性别比、各癌症病种人数构成及各化疗药物使用人数差异均无显著性。
1.2 方法
1.2.1 外周血双核淋巴细胞微核率检测方法 用CB法 ［3，4］ 。取患者静脉血1ml肝素抗凝，用RPMI1640培养液4ml加小牛血清1ml、植物血凝素（PHA）0.2ml和受试血液0.5ml，在37℃下全血培养48h后加细胞松弛素B，其终浓度为5μg/ml，继续在37℃下培养24h后，按常规方法收获细胞，0.075mol/L KCl低渗处理10min，加甲醇冰醋酸固定液予固定5min后离心，制片一天后，Giemsa染色，在油镜下随机续片，对每个标本统计500个双核淋巴细胞中的微核细胞数，微核率以‰表示。
1.2.2 外周血T淋巴细胞转化率检测方法 用T淋巴细胞转化试验测定 ［5］ 。取肝素抗凝血0.1ml（无菌），加入1.8ml RPMI1640培养液中，同时加入PHA0.1ml，于37℃水浴温育3天，每天摇动1次，培养结束后取出吸去大部分上清液，加入8.3g/L NH 4 Cl4ml混匀，置37℃水浴10min，取出2500r离心10min，弃去上清液，沉淀加5ml固定液（甲醇冰醋酸），室温作用10min，离心去上清液，留0.2ml沉淀，用气干法制片，Giemsa染色10～20min，在油镜下随机续片计数200个淋巴细胞中转化细胞数，转化率以%表示。
1.2.3 血清免疫球蛋白 用终点散射比浊法 ［5］ 测定血清 免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的浓度，以g/L表示。
2 结果
2.1 恶性肿瘤二组放疗患者放疗前后双核淋巴细胞微核率及免疫功能指标测定结果 见表3。
表3 二组放疗患者放疗前后外周血双核淋巴细胞微核率和免疫功能指标测定结果 略
由表3可见，双灵固本散放疗组放疗后双核淋巴细胞微核率（‰）、T淋巴细胞转化率（%）、免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）（g/L）浓度均无显著性改变，但放疗对照组放疗后双核淋巴细胞微核率显著性高于放疗前，而T淋巴细胞转化率（%）及免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）浓度均显著性低于放疗前。在放疗前，二组的双核淋巴细胞微核率、T淋巴细胞转 化率、免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）的浓度差异均无显著性;但放疗后双灵固本散放疗组的双核淋巴细胞微核率显著低于放疗对照组，而T淋巴细胞转化率及免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）浓度显著性高于放疗对照组。
2.2 恶性肿瘤二组化疗患者化疗前后双核淋巴细胞微核率及免疫功能指标测定结果 见表4。
表4 二组化疗患者化疗前后外周血双核淋巴细胞微核率和免疫功能指标测定结果 略
由表4可见，双灵固本散化疗组化疗后双核淋巴细胞微核率（‰）、T淋巴细胞转化率（%）及血清免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）浓度（g/L）均差异无显著性，但化疗对照组化疗后双核淋巴细胞微核率显著性高于化疗前，而T淋巴细胞转化率（%）及免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）浓度（g/L）均显著性低于化疗前。在化疗前，二组向双核淋巴细胞微核率（‰）、T淋巴细胞转化率（%）及免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）浓度（g/L）差异均无显著性;但化疗后，双灵固本散化疗组的双核淋巴细胞微核率（‰）显著性低于化疗对照组，而T淋巴细胞转化率（%）及免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）浓度（g/L）显著性高于化疗对照组。
2.3 四组肿瘤患者放、化疗后外周血双核淋巴细胞微核率（‰）与T淋巴细胞转化率（%）呈负相关关系 见图1。双核淋巴细胞微核率（‰）
图1 略
3 讨论
本文放疗对照组与双灵固本散放疗组的平均年龄、性别比、各癌症病种人数构成及放疗累计剂量差异均无显著性，化疗对照组与双灵固本散化疗组的平均年龄、性别比、各癌症病种人数构成及各化疗药物使用人数差异均无显著性，提示本文所选对照组与观察组有可比性。
人外周血双核淋巴细胞微核率可敏感反映化疗药物和放射线所致淋巴细胞DNA损伤效应 ［1，2］ 。本文研究结果显 示放疗对照组和化疗对照组在放、化疗后外周血双核淋巴细胞微核率均显著性升高，而双灵固本散放疗组和双灵固本散化疗组在放、化疗后外周血双核淋巴细胞微核率与放、化疗前相比差异无显著性，且均显著性低于相应对照组，提示肿瘤患者放、化疗可致外周血淋巴细胞核DNA损伤，而双灵固本散可明显减轻肿瘤患者放、化疗所致外周血淋巴细胞DNA损伤，这与上海预防医学研究院所作大鼠骨髓细胞微核和Ames试验结果所示中华灵芝宝（双灵固本散）抗突变效应相一致 ［6］ 。
淋巴细胞在体外培养中经植物血凝素（PHA）刺激可转化为体积较大的母细胞，计数转化的母细胞（淋巴细胞转化率）可反映机体细胞免疫功能，血清免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）浓度可反映机体体液免疫功能 ［5］ 。本文研究结果显示放疗对照组和化疗对照组在放、化疗后淋巴细胞转化率和血清免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）均显著性降低，而双灵固本散放疗组和双灵固本散化疗组在放、化疗后淋巴细胞转化率和血清免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）均无显著性改变，并显著性高于相应对照组。提示肿瘤患者放、化疗后免疫功能（细胞免疫和体液免疫）均受到损伤，而双灵固本散可明显减轻肿瘤患者放、化疗所致免疫功能损伤。
恶性肿瘤四组放、化疗后外周血双核淋巴细胞微核率（‰）与T淋巴细胞转化率（%）呈负相关关系。淋巴细胞微核率敏感反映放、化疗后淋巴细胞核DNA损伤，提示T淋巴细胞转化率与淋巴细胞核DNA损伤密切负相关，双灵固本散明显减轻肿瘤患者放、化疗后淋巴细胞核DNA损伤，使T淋巴细胞转化率仍保持正常水平，从而明显减轻放、化疗所致免疫功能损伤。
参考文献
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6 陈金生，任武生.双灵固本散抗肿瘤研究与临床应用.中华医药杂志，2003，（3）8:689，2003.
作者单位:1 200032上海复旦绿源门诊肿瘤科
2 200233上海第六人民医院
3 200336上海市疾病预防控制中心
（收稿日期:2004-03-03） （编辑海 涛）