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【摘要】 目的 评价ELISA方法对无偿献血者梅毒抗体的筛检价值。方法 以卫生部临床检验中心梅毒抗体临床科研血清盘血清40份及随机抽取100份西安市无偿献血者阴性血清为评价标本，采用厦门英科新创梅毒抗体ELISA诊断试剂盒（ELISA1）和北京金豪梅毒抗体ELISA诊断试剂盒（ELISA2）对评价标本作盲法筛检，以卫生部临床检验中心血清盘作为金标准，用四格表法计算评价真实性与可靠性指标，并对Cut-off值的合理性进行评价。结果 ELISA1及ELISA2的灵敏度分别为95.5%，100.0%，特异度分别为94.4%，94.4%，约登指数分别为0.90，0.94，两种试剂的重复符合率均为100.0%，两种试剂的Cut-off值是合理的。结论 两种试剂联合筛检可保证输血的安全性，如果能进一步提高试剂的灵敏度与特异度，将会具有更大的临床应用价值。
关键词 梅毒抗体 ELISA 献血者
Evaluation of ELISA method on screening blood donors treponema pallidum antibody
Zhang Xianqing，Sun Wenli，Mu Shijie，et al.
Department of Blood Transfusion，Xijing Hospital，the Fourth Military Medical University，Xi′an710032.
【Abstract】 Objective To evaluate ELISA method on screening blood donors′treponema pallidum（TP）antiˉbody.Methods Samples for evaluation included40TP serum plates for clinical scientific reseach from clinical testing center of the Ministry of Health and100sets of TP antibody negative serum from blood donors in Xi′an city.The samˉples underwent blind screeing with TP antibody ELISA diagnostic kits of Xiamen Intec（ELISA1）and TP antibody ELISA diagnostic kit of Beijing Kinghawk（ELISA2）.With the serum plates from clinical testing center of the Ministry of Health as the golden criteria，the nthenticity and reliability indexes were tested with four-fold table and the cut-off value of two ELISA kits was reasonably evaluated.Results The sensitivities of ELISA1and ELISA2were95.5%and100.0%respectively;their specificity was94.4%，their repetition coincidence rates were100.0%.The due cut-off values of two ELISA kit were reasonable.Conclusion Combined screening of two ELISA kits can ensure safety of blood transfusion.If the specificities and sensitivities of two ELISA kit are ncreased，they will have more valuable clinical applications.
Key words treponema pallidum antibody ELISA blood donor
梅毒螺旋体抗体检测作为输血安全的必测指标，其试验方法与试剂的选择尤为重要，ELISA法筛检梅毒抗体是目前普遍采用的方法，有关梅毒抗体ELISA检测试剂盒的评价报道较多，但多为灵敏度或特异度等少数评价指标 ［1，2］ 为了全面客观地评价ELISA筛检试剂盒的真实性，笔者对我们常用的两种筛检试剂盒的检测真实性、可靠性及Cut-off值的合理性进行评价，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料 梅毒抗体血清盘血清40份（购自卫生部临床检验中心，批号:200103，其中阳性22份，阴性18份），另外随机抽取西安市有代表性的无偿献血者梅毒抗体阴性血清100人份。梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒分别由厦门英科新创科技有限公司（以下称ELISA1）和北京金豪制药有限公司（以下称ELISA2）提供。
1.2 方法
1.2.1 抽样方法 将2003年1～5月西安市某血液中心无偿献血者梅毒抗体阴性血清标本按顺序、年龄、职业、文化程度分层，再按随机表中随机数字抽样，分层特征比例按该血液中心前3年无偿献血者以上分层特征构成比例进行，抽满100例为止。
1.2.2 盲法筛检 由评价监督者对考核血清盘重新编密码，由2名操作熟练的专业检验人员对编码血清盘用上述2种试剂盒进行盲法检测，操作严格按试剂盒说明书进行，筛检结果由全自动酶标仪自动打印OD值及阴、阳性结果。为考核试剂盒的可靠性，由2名以上专业检验人员在条件完全相同的情况下，对考核血清盘40份血清进行第二次盲法筛检，第二次筛检前重新编密码，结果判读后再打开密码，核对结果。
1.2.3 金标准的确定 以卫生部临床检验中心梅毒抗体血清盘已知阳性与阴性为金标准。
1.2.4 其实性评价 将40份血清盘标本分为梅毒抗体阳性与阴性组，再将筛检试剂盒的筛检结果分为梅毒抗体阳性与阴性组，分组数据汇入筛检与诊断试验评价专用四格表，用专用分式 ［3］ 分别计算出真实性评价的8个指标，即灵敏度、特异度、假阳性率、假阴性率、阳性预告值、阴性预告值、准确度及约登指数。
1.2.5 可靠性评价 将40份血清盘样本第一次与第二次筛检结果，分别汇入专用四格表，分别计算出各试剂盒重复试验的符合率与卡帕值，卡帕值的判定标准按Fleiss提出的3级划分标准评价，即0.75～1.00为符合很好，0.4～0.74为一般符合，0.01～0.39为缺乏符合 ［3］ 。
1.2.6 Cut-off值评价方法 为了评价两种试剂盒截断点或临界值的合理性，将考核血清盘中18份阴性血清及随机抽取的西安市无偿献血者梅毒抗体阴性血清100人份测量出的OD值编制频数分布表，按筛检试验正常值范围确定方法 ［4］ ，分别用统计学界限的正态分布法及百分位数法计算出每种试剂盒的Cut-off值，并与按试剂盒说明书规定计算出的Cut-off值比较，结合阴性、阳性OD值频数分布特点，分析评价其合理性。
2 结果
2.1 对考核血清筛检结果 在已知22份阳性中，ELISA1筛检出21份，ELISA2筛检出22份，在已知18份阴性标本中，ELISA1与ELISA2均检出17份，见表1。
表1 2种试剂盒对考核血清盘筛检结果 （略）
2.2 真实性评价 利用两种试剂盒的筛检结果，计算出评价真实性的8个指标，见表2。
表2 2种试剂盒真实性指标比较 （略）
2.3 可靠性评价 ELISA1与ELISA2两次重复检出的阳性份数相同，重复试验的符合率均为100%，卡帕值均为1.00。
2.4 Cut-off值的评价 依据ELISA1与ELISA2试剂盒对考核血清盘18份阴性血清及100份西安市无偿献血者梅 毒抗体阴性血清测量的OD值，用统计学界限的正态分布法与百分位数法分别计算其Cut-off值，按两种试剂盒说明书规定方法分别计算出最低Cut-off值，并将3种Cut-off值进行比较，见表3。结果发现，按规范的正态分布法与百分位数法计算出的Cut-off值均远低于试剂盒说明书规定的Cut-off最小值，但结合140份无偿献血者阳性与阴性OD值实际频率分布特点分析，试剂盒规定的截断点是合理的，如果按统计界限计算的Cut-off值判读，并不能提高试剂盒的灵敏度，反而会使假阳性率升高。
表3 不同方法确定的Cut-off值比较
3 讨论
评价某项筛检试验需要有一个公认的客观性强的金标准，卫生部临床检验中心的梅毒抗体考核血清盘样本来自献血人群，阴、阳性界限清楚，含有梅毒抗体多种效价的血清，客观性强，是公认的金标准。对于筛检试验的评价不仅要评价灵敏度、特异度，还需评价约登指数等多项综合性指标及可靠性指标，而且还需要对试剂盒阴性与阳性的截断点（Cut-off值）的合理性进行评价。
在既往文献中仅有个别报道用多项评价真实性指标进行评价 ［5］ 。本研究使用ELISA方法对梅毒抗体进行筛检，并对该试验的两种试剂盒的多项真实性指标进行了客观评价，而且对可靠性指标及Cut-off值的合理性进行了分析、比较与评价，结果发现，ELISA2的灵敏度与应用价值更大。根据考核血清盘中阴性血清及无偿献血者梅毒抗体阴性血清共118份筛检结果的OD值，分别用正态分布法及百分位数法计算出Cut-off值，发现计算值远低于试剂盒规定的最小Cut-off值，但结合118份阴性与22份阳性标本实际分布特点分析，试剂盒规定的Cut-off值是合理的，因为如果按理论计算值作为截断点，会使筛检试验的假阳性率提高，造成血液资源浪费，从而降低其在献血员筛检中的应用价值。
参考文献
1 阮乐幸.TP-ELISA用于血清梅毒筛查的可行性评价.中国输血杂志，2002，15（6）:413.
2 孔庆东，唐世清，刘正敏.ELISA方法用于梅毒抗体检测的体会.中国输血杂志，2002，15（1）:11.
3 孙长生.临床医学研究原理与方法.西安:陕西科学技术出版社，1995，93-112，179-195.
4 李远贵.临床科研方法与实例评价.第二版.西安:陕西科学技术出版社，1995，93-112.
5 国忠，薛国章，林丽容，等.梅毒血清学试验的方法学比较及对国产第一代ELISA试剂的初步评价.中国输血杂志，2001，14（1）:19-20.
（收稿日期:2004-06-21） 作者单位:710032陕西西安第四军医大学西京医院输血科（编辑守 中）