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【摘要】 目的 探讨一种依靠组织芯片制作技术进行免疫组织化学染色方法。方法将所研究的样本制作成组织芯片，将组织芯片制作成切片，在切片上进行免疫组织化学染色，观察染色后组织芯片点阵的完整性以及免疫组织化学染色结果。结果 按本方法在组织芯片上进行免疫组织化学染色可以较好保证组织芯片样本的完整性，免疫组织化学染色结果良好。结论 在组织芯片上进行免疫组织化学染色可以节约实验原材、免疫组化试剂，是一种较好的研究方法。
组织芯片是从组织块中挑选典型部位的组织以获得数百个圆柱状的样本，并按次序排列在一个新的石蜡块上，制作成HE切片，然后按研究的需要进行免疫组化染色等研究 ［1］ 。组织芯片技术的特点是:一次可以同时对多个组织块检测研究。利用组织芯片仪可以进行组织切片的精确定位和多种类型的分子生物学分析 ［2，3］ 。在组织芯片上进行免疫组化染色，增加实验研究的可信度和说服力，具备良好的染色效果，保证芯片点阵的完整性对于实验研究来说十分重要。本文介绍在组织芯片上进行CD31免疫组织化学染色方法。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂 组织芯片仪一台，直径为1mm的粗针和直径为0.6mm细针若干。自行制备的石蜡模块。常规梯度脱蜡、脱水试剂，微波炉一台。免疫组化试剂鼠抗人CD31抗体，PV6002。载玻片为购自美国的涂有多聚赖氨酸的硅化载玻片。
1.2 组织芯片上CD31免疫组化染色方法 选择72例滑膜肉瘤，每例肿瘤上样2个点，一张芯片上共上样144个点，使用硅化玻片，65℃的烤箱中烤片4h。免疫组化染色程序:二甲苯溶液脱蜡15min×2次，无水乙醇5min×2次，3%H 2 O 2 灭活内源性过氧化物酶活性30min，95%乙醇5min，80%乙醇5min，水洗5min，专用微波炉进行抗原热修复95℃10min，水洗5min，PBS平衡5min。（1）滴加正常血清20min，甩去血清后滴加CD31（即用型）冰箱过夜，（2）PBS洗5min×2次，（3）滴加PV60021h，PBS洗5min×2次，DAB显色10min，显微镜下观察，蒸馏水终止显色。Mayer苏木复染核，水洗、脱水、透明、封片。
2 结果
使用硅化玻片作为组织芯片载玻片后进行的免疫组化染色结果显示:在144个点阵的组织芯片上进行免疫组织化学染色，几乎未见点阵的脱落和缺失，点阵形状保持完整，没有点阵的移位（图1）。CD31免疫组化染色结果表明所有毛细血管和小血管的内皮细胞均染成棕黄色（图2）。
3 讨论
组织芯片作为实验研究和科学研究的一项重要技术手段以其明显的优点越来越受到科研人员的关注，在组织芯片上进行免疫组化染色拓宽了组织芯片技术的使用范围。同时及时、正确的病理诊断对于疾病的治疗、病人顺利康复、减少不必要的误诊来说意义十分重大。在病理科日常的工作中，时常会遇到一些难以确切诊断的病例，此时免疫组化染色结果可以很好提示我们病变组织的来源，以及同鉴别诊断病例的区别;但有时仍可能因染色质量控制原因造成误差。在实验研究中，利用免疫组化染色技术可以帮助我们对典型病变定位，能正确及时地对疾病作出诊断。随着免疫组织化学方法的普及，通过在实践中摸索，形成了一套比较完整的组织芯片免疫组化染色方法。
参考文献
1 Hoos A，Urist MJ，Stojadinovic A，et al.Validation of tissue micrfoarrays for immunohistochemical profiling of ancer.Am J Pathol，2001，158:1245-1251.
2 Horvath L，Henshall S.The application of tissue microarrays to cancer research.Pathology，2001，33:125-129.
3 孙保存，张诗武，赵秀兰，等.组织芯片制备过程中的体会与注意事项.临床与实验病理学杂志，2002，18（6）:658-659.
（收稿日期:2004-07-09） 作者单位:300070天津医科大学病理教研室 （编辑守 中）