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为了了解我院引起儿童肺炎的嗜血杆菌对抗生素的耐药情况，我们对在2002年10月～2003年7月间因呼吸道感染被我院收治入院的儿童的咽拭子标本进行培养，得到122株嗜血杆菌并对其耐药性进行了分析。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株来源 2002年10月～2003年7月间因患肺炎入我院治疗的年龄4个月～3岁的儿童920例，进行咽拭子培养分离得到嗜血杆菌122株。其中流感嗜血杆菌41株，副流感嗜血杆菌81株。
1.1.2 嗜血杆菌选择性培养基的制备 以哥伦比亚培养基为基础培养基，经高压蒸气灭菌后，冷却到55℃左右，加入5%的脱脂羊血混匀，置80℃水浴加热，直至完全变成巧克力色之后，再加热3min，边加热边摇动，之后，再次冷却到55℃，加入万古霉素，使其浓度达到30mg/L，倾注平板，置冰箱备用。
1.1.3 仪器与试剂 ATB半自动细菌鉴定药敏分析仪、APINH细菌鉴定条板、ATB HAEMO药敏试验条板、β-内酰胺酶纸片，均购自法国生物梅里埃公司。革兰染液，购自浙江省军区后勤部。V因子、X因子、V+X因子，购自英国OXOID公司。
1.2 方法
1.2.1 菌株的分离与鉴定 将临床收集到的咽拭子标本立即接种于血平板及嗜血杆菌选择性培养基中，后者置于5%～10%的CO 2 环境中，将二块平板放置于35℃孵箱培养18～24h，之后挑取血平板上不生长，巧克力平板上生长的无色、透明、边缘整齐、呈露滴状的菌落，进行革兰染色，为G - 性小杆菌，则作卫星试验及V因子、X因子、（V+X）因子利用试验进行粗略鉴定，再用APINH试剂条板进行系统鉴定。
1.2.2 β-内酰胺酶测试 将β-内酰胺酶纸片放置于玻片上，加一滴蒸馏水于纸片上，挑取分离好的单个菌落均匀涂于NITROCEFIN纸片上，5min内纸片由黄色变为红者为阳性。
1.2.3 药敏试验 挑取分离好的菌落，按ATB HAEMO说明书严格进行，经35℃、18～24h培养之后，经ATB药敏系统读取结果。
1.2.4 统计方法 为了便于统计，我们未把I值归入R值当中。
2 试验结果
在920份咽拭子标本中，检出嗜血杆菌122株，检出率为13.3%（122/920），其中流感嗜血杆菌为41株，检出率为4.4%（41/920），副流感嗜血杆菌为81株，检出率为8.8%（81/920）。在122株嗜血杆菌中，检出产β-内酰胺酶的菌株为17株，检出率为13.9%（17/122）。耐药性分析显示，122株临床分离的嗜血杆菌对复方阿莫西林、头孢克洛、头孢呋辛、三代头孢都呈现高度活性，其耐药率分别为3.3%（4/122）、1.6%（2/122）、0.8%（1/122）、0.8%（1/122），故这些药仍是临床治疗的首选药。对氨苄西林、氯霉素的耐药性分别为14.8%（18/122）、7.4%（9/122），其中产β-内酰胺酶的17株菌株对氨苄西林全部耐药，并且有8株对氨苄西林、氯霉素、四环素和复方SMZ都耐药，这说明嗜血杆菌可以同时产生β-内酰胺酶和氯霉素乙酰转移酶，从而使嗜血杆菌对氨苄西林和氯霉素同时耐药，其对四环素和复方SMZ的耐药均由质粒介导，它们的耐药基因可能整合到同一质粒上而致联合耐药。对氧氟沙星、四环素及复方SMZ的耐药性分别为9.8%（12/122）、19.7%（24/122）和40.2%（49/122）。其中嗜血杆菌对复方SMZ呈高度耐药，己不能用于临床经验用药，建议在药敏指导下用药。
3 讨论
嗜血杆菌是引起儿童呼吸道炎症的常见致病菌，由于其营养要求高，需要V因子和X因子，故一般临床检出率较低。但使用进口哥伦比亚琼脂作基础培养基，同时加入万古霉素抑制G + 性菌生长，使得嗜血杆菌的分离率明显提高，已达到13.3%，和有关文献报道相一致 ［1，2］ ，但仍低于一些相应报道 ［3］ ，这可能与标本的采集和患者的选择有关。嗜血杆菌的耐药性分析也显示出，其对青霉素加酶抑制剂类、头孢类呈现高度活性，在17株产β-内酰胺酶的菌株中，还没有发现对头孢类抗生素全部耐药株，故临床治疗并不困难。但值得注意的是，17株产β-内酰胺酶的菌株中，有8株对氨苄西林和氯霉素全部耐药，这可能是大部分耐氨苄西林的嗜血杆菌产生的β-内酶胺酶是产TEM型所致 ［1］ ，故其对头孢类抗生素敏感，又因为嗜血杆菌对氯霉素耐药大多是由于产生氯霉素乙酰转移酶所致 ［4］ ，二者同时出现耐药则说明β-内酰胺酶和乙酰转移酶同时产生，诱导耐药。同时本试验有1株不产β-内酰胺酶但对氨苄西林却耐药的菌株，其对氯霉素无耐药，这可能是青霉素结合蛋白（pBbs）构象及结构的改变导致药物对其亲和力的降低所致 ［5］ 。另外也有文献报道存在某些嗜血杆菌的固有耐药株。它们对青霉素及其加酶抑制剂类、头孢类呈低度敏感 ［1］ 。虽然本试验并未发现此类菌株，但对临床分离的嗜血杆菌一定要坚持做好药敏，同时对每一位感染嗜血杆菌者一定要作β-内酰胺酶试验，以便更好的指导临床用药。
参考文献
1 赵云.马血巧克力平板分离流感嗜血杆菌及其耐药性分析.上海医学检验杂志，2003，18:53-54.
2 郭玉芬.嗜血杆菌在儿童的检出特点及药敏研究.中华医院感染学杂志，2001，11（6）:475-477.
3 李雪芬.嗜血杆菌在呼吸道感染中的临床意义及耐药性分析.上海医学检验杂志，1999，14（5）:272-273.
4 杨小娟.嗜血杆菌耐药性研究.医学检验进修杂志，1999，19:1-3.
5 贺清冬.流感嗜血杆菌及其对抗生素耐药性研究进展.中华微 生物及免疫学杂志，2001，21:138-141.
（收稿日期:2004-02-06）
（编辑李 木）
作者单位:314000浙江省嘉兴市妇保院检验科（ △ 护理部）