HPLC法测定冠心舒通胶囊中丹参酮Ⅱ A 的含量

    【摘要】 目的  建立高效液相色谱法测定冠心舒通胶囊中丹参酮Ⅱ A 的含量。 方法  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇—水（80∶20）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长270nm。 结果  丹参酮Ⅱ A 在0.0252～0.126μg线性关系良好，r=0.9999，平均回收率99.89%（n=5），RSD=1.54%。 结论  本法操作简便，结果准确，可用于测定冠心舒通胶囊中丹参酮Ⅱ A 含量。

    关键词  冠心舒通胶囊 丹参酮Ⅱ A  高效液相色谱法 含量测定

    Content determination of TanshinoneⅡ A in Guanxin Shutong Capsules by HPLC

    Huang Haiyan

    The Affiliated Hospital of Guangzhou University of TCM，Guangzhou510120.

    【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for determination of TanshinoneⅡ A in Guanxin Shutong Capsules.Methods The assay was conducted on a ODS Hypersil column（5μm，250mm×4.6mm）with methonal-water（80∶20）as mobile phase.Flow rate was1.0ml/min.The detection wavelength was270nm.Results The cali-bration curve was linear over the range of0.0252～0.126μg（r=0.9999）for TanshinoneⅡ A .The average rate of re-covery was99.89%with RSD=1.54%（n=5）.Conclusion This method is convenient and accurate which may be used for determination of TanshinoneⅡ A in Guanxin-Shutong Capsules.

    Key words Guanxin Shutong Capsules TanshinoneⅡ A  HPLC determination of content

    冠心舒通胶囊由丹参、红花、赤芍、降香等多味药组成，具有活血化瘀之功效，用于冠心病的治疗，临床疗效显著。为了控制该制剂的质量，确保临床疗效，本文对成品中君药丹参有效成分丹参酮Ⅱ A 含量测定方法进行了探讨，采用HPLC法测定丹参酮Ⅱ A 含量，方法学考察结果令人满意，为控制该制剂的质量提供了依据。

    1 仪器与试药

    高效液相色谱仪:戴安Summit P680A泵，Summit PDA-100二级管阵列检测器;ASI-100自动进样器;Chromeleon色谱工作站;Shimadzu Libror AEL40SM（十万分之一）天平（日本岛津）;CX-250型超声波清洗器（北京医疗设备二厂）;甲醇（色谱纯），水（超纯水）;冠心舒通胶囊（自制，批号:031103;031112;031121）;对照品丹参酮Ⅱ A （中国药品生 物制品检定所，批号0766-9906）。

    2 方法与结果

    2.1 色谱条件及系统适应性实验 色谱柱:ODS Hypersil柱（4.6mm×250mm，5μm）;流动相:甲醇—水（80∶20）;柱温:室温;检测波长:270nm;流量:1.0ml/min;进样量5μl。分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各5μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件记录色谱图，理论塔板数按丹参酮Ⅱ A 峰面积计算≥3000，丹参酮Ⅱ A 峰与之相邻峰的分离度不低于2.0，拖尾因子在0.95～1.05之间。均符合要求。丹参酮Ⅱ A 的保留时间约为10min，阴性对照液图谱在丹参酮Ⅱ A 峰位置处无干扰，丹参酮Ⅱ A 与其他组分可完全分离。见图1。
 a丹参酮ⅡA 对照品溶液;b样品溶液;c阴性对照溶液

    图1 丹参酮Ⅱ A HPLC图

    2.2 对照品溶液的制备 精密称取丹参酮Ⅱ A 对照品3.15mg，加甲醇制成0.126mg/ml的对照品溶液。

    2.3 供试品溶液的制备 取本品内容物1.0g，研细，精密称定，加甲醇25ml，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，0.45μm微孔膜过滤，去弃初滤液，取续滤液，即得供试品溶液。

    2.4 线性关系考察 精密吸取上述丹参酮Ⅱ A 对照品溶液的浓溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置25ml量瓶中，各加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液。各取5μl依次注入液相色谱仪。以对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，进行回归处理，得丹参酮Ⅱ A 回归方程:Y=1623.4563X-0.6251，r=0.9999，在0.0252～0.126μg的浓度范围内线性关系良好。

    2.5 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液5μl，重复进样5次，按上述色谱条件测定丹参酮Ⅱ A 峰面积积分值，RSD为1.12%。

    2.6 稳定性试验 取样品（批号:031103）按上法制备供试品溶液，分别于2、4、6、8、12h进样，按上述色谱条件测定，丹参酮Ⅱ A 平均含量为0.113mg/粒，RSD为1.21%。

    2.7 重复性试验 精密称取同一批号样品（批号:031103）5份，按上法制备供试品溶液，分别进样测定，丹参酮Ⅱ A 平均含量为0.115mg/粒，RSD=1.85%。

    2.8 回收率试验 采用加样回收法，取已知丹参酮Ⅱ A 含量样品约0.5g（批号:031103）5份，另取丹参酮Ⅱ A 对照品适量，加甲醇溶解并配制成0.135mg/ml的溶液，各取1ml加入上述样品中，按本文2.3所述方法制备供试品溶液，分别进样测定，结果见表1。

    表1 回收率测定结果(略)
   
    2.9 样品测定 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入高效液相色谱中测定，结果见表2。

    表2 样品测定结果 （略）

    3 讨论
   
    丹参酮Ⅱ A 检测波长的确定 根据PDA二极管阵列检测器，在200～800nm的波长范围内，对照品溶液和样品溶液丹参酮Ⅱ A 对应峰的紫外吸收图谱，丹参酮Ⅱ A 均在（270±1）nm的波长处有最大吸收，故选定270nm为测定波长。丹参酮Ⅱ A 很不稳定，受热易降解损失 ［1］ ，如按药典法加热回流提取1h ［2］ 的丹参酮Ⅱ A 在本制剂中的含量仅为0.094mg/粒，比用超声提取30min提取的要低。因此，在制备供试品溶液时，应采用超声振荡提取法。

    参考文献

    1 郑虎占，董泽宏，佘靖.中药现代研究与应用·第2卷.北京:学苑出版社，1997，1093.

    2 国家药典委员会.中华人民共和国药典·一部.北京:化学工业出版社，2000，57-58.

    （编辑含 秋）

    作者单位:510120广州广东省中医院