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近年来，随着人们生活水平的不断提高，人们对膳食组成中胆固醇的含量越来越引起重视。胆固醇可在胆道中沉积形成胆石，在血管中的沉积是动脉粥样硬化的重要原因之一。鉴于胆固醇对人体的影响，人们不断地采取各种各样的措施来减少食物中的胆固醇含量，这就要求分析工作者建立一种快速、简便而又重现性好的测定胆固醇的方法。鸡蛋是自然界中营养最为丰富的食品之一，但是蛋黄中的高胆固醇也引起人们的高度关注。目前胆固醇的测定一般都要求萃取总脂质、移去溶剂、在碱性介质中热皂化、萃取出非皂化物质、洗涤及浓缩等 ［1，2］ ，这些步骤费时、费力又费材料，并因其繁琐的操作预处理，大大增加了实验结果的可变性，本文采用2.0mol/L的KOH-乙醇溶液直接皂化，石油醚萃取，以乙腈-甲醇-异丙醇（10∶80∶10）作流动相、C 18 反相色谱柱分离，UV208nm检测，高效液相色谱法测定，简化了操作步骤，降低了操作强度，减少了试剂使用，并且大大节约了分析时间，整个分析过程仅需1.5h。本方法用于实际样品的测定，结果满意。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂 Agilent1100高效液相色谱仪，紫外检测器G1314A，Agilent1100化学工作站，甲醇、乙腈、异丙醇（均为HPLC级），胆固醇（进口分装），石油醚（重蒸馏，30℃～60℃），无水乙醇、氢氧化钾、氯化钠（均为AR）。胆固醇标准溶液（1.0mg/ml）:准确称取胆固醇100mg于100ml容量瓶中，用少量甲醇溶解后，用甲醇稀至刻度。
1.2 色谱条件 分析柱为μBondapak C 18TM （30cm×3.9mm），流动相为乙腈-甲醇-异丙醇（10∶80∶10），流速为1.0ml/min，柱温为30℃，紫外检测波长208nm。
1.3 样品处理及测定 准确称取充分混匀的鸡蛋约0.20g于50ml具塞比色管中，加入2.0mol/L的KOH-乙醇液5.0ml，振荡混匀，置65℃水浴中皂化30min（每隔5min振摇1次）后取出，经流水冷却，加入饱和氯化钠溶液2.0ml后再加入石油醚20.0ml，旋涡混匀后离心分离，吸取上清液10.0ml于10ml刻度比色管中，通氮气吹干，再用1.0ml甲醇溶解残渣，过0.45μm滤膜后，吸取10.0μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，外标法定量。
1.4 标准曲线绘制 用胆固醇标准贮备液配成0.050、0.010、0.200、0.400、0.600mg/ml的胆固醇标准使用液，分别取10.0μl进行色谱测定，以峰面积（A）为纵坐标，胆固醇浓度为横坐标（C，mg/ml）绘制标准曲线，得线性方程为A=556.13C+8.003，r=0.9993。
2 结果与讨论
2.1 皂化条件试验与萃取条件的选择 见马建明等报道 ［3］ 。
2.2 分析波长的选择 选择较高灵敏度的检测波长可以提高分析数据的精密度，同时也可以降低检出限。笔者对以流动相为溶剂的胆固醇标准液进行了扫描，结果发现胆固醇在205nm处具有最大吸收峰，考虑到紫外区的影响，本方法选用208nm为检测波长。
2.3 流动相的选择 本文试验了甲醇-水（95∶5） ［4］ 、乙腈-异丙醇（4∶1） ［5］ 及乙腈-甲醇-异丙醇（10∶80∶10，V/V） ［6］ 进行分离，结果发现使用甲醇-水（95∶5，V/V）进行分离，鸡蛋中有些杂质依然干扰测定，如果使用乙腈-异丙醇（4∶1）进行分离，胆固醇的保留时间过长，采用乙腈-甲醇-异丙醇（10∶80∶10，V/V）进行分离，干扰少，分离速度快，重复性、精密度好，色谱图见图1。本文选用乙腈-甲醇-异丙醇（10∶8.0∶10，V/V）为流动相。时间为7.806min 图1 样品色谱图
2.4 线性范围及方法的最低检出限 按分析步骤配制一系列胆固醇的标准溶液，在本实验条件下，胆固醇浓度从0～1.0mg/ml范围，标准曲线呈良好的线性关系。最低检出限为0.005mg/ml，若取样1.0g，鸡蛋中胆固醇的最低检出浓度为0.5mg/100g。
2.5 准确度与精密度试验 在0.20g鸡蛋样品中分别加入0.15、0.30、0.45mg的胆固醇标准，与样品处理方法相同操作，测得的回收率见表1。由表1可知，本方法的测定结果是可靠的，其平均回收率为92.1%，不同浓度的测定结果的相对标准偏差均小于5%。
表1 准确度试验 （略）
2.6 鸡蛋测定 对从市场上采购的10份不同产地的鸡蛋样品用本法进行了测定，结果胆固醇含量分别在（180～545）mg/100g之间。
参考文献
1 Al-Hasani SM，Hlavac J，Carpenter MW.Rapid determination of cholesterol in single and multicomponent prepared foods.AOAC Int，1993，76（4）:902.
2 GB/T15206-1994.食品中胆固醇的测定方法.BG/T5009.128-2003.北京:中国标准出版社，2004，2:137-138.
3 马建明，龚文杰，邬晨阳，等.直接皂化-硫酸铁铵比色法快速测定鸡蛋中胆固醇.中国卫生检验杂志，2001，11（3）:378.
4 黄岛平，陈建红.HPLC紫外检测器测定出口月饼中的胆固醇.光谱实验室，2001，18（4）:499-501.
5 张蓉真，李珑.测定鸡蛋胆固醇的高效液相色谱新方法.色谱，1998，16（2）:91-94.
6 孙赛龙，赵志萍，谢建龙，等.高效液相色谱法测定蛋黄卵磷脂中胆固醇的含量.精细化工中间体，2003，33（4）:52-53.
（编辑建 伟）
作者单位:315300浙江省慈溪市疾病预防控制中心