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【摘要】 目的 制订阿归养血颗粒质量标准。 方法 对黄芪药材进行了薄层鉴别，用高效液相色谱法测定了芍药苷含量，色谱柱:Alltech C 18 （4.6mm×250mm），流动相:乙腈—水（15:85），检测波长230nm。结果 回收率平均97.1%（RSD=1.6%，n=5），线性关系r=0.9998，重复性RSD=2.8%（n=6），精密度RSD=1.1%（n=6）。 结论 方法稳定、可靠，可作为该制剂的质量控制方法。
关键词 阿归养血颗粒 芍药苷 含量测定 薄层鉴别
【Abstract】 Objective To formulate the quality standard of Egui Yangxue Keli.Methods The Radix Astra-gali was identified by TLC.The content of Paeoniflorin in Egui Yangxue Keli was determined by HPLC.The separation was performed on Alltech—ODS column with acetonitrile-Watrt（15:85）as mobile phase.The UV detector was set at230nm.Results The mean recovery was97.1%（RSD=1.6%，n=5），with good linear relationship（r=0.9998）and repetition RSD=2.8%（n=6）and precision RSD=1.1%（n=6）.Conclusion The method is accurate，reli-able，can be one of method for quality control of the preparation.
Key words Egui Yangxue Keli Paeoniflorin content determining chromatogram differentiating
阿归养血颗粒由当归、党参、白芍、甘草、茯苓、黄芪、熟地黄、川芎、阿胶组成，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》第12册，功能补养气血，用于气血亏虚、面色萎黄、眩晕乏力、形体消瘦、经闭、赤白带下。由于疗效确切，深受患者欢迎。但原质量标准水平低，仅有当归薄层鉴别，为了更有效地控制其质量，笔者采用高效液相色谱法测定了其中的芍药苷的含量;用薄层色谱法对黄芪药材中黄芪甲苷进行了薄层鉴别，为该制剂质量控制提供了新的指标和方法。
1 仪器与药品
HP-1100高效液相色谱仪（美国，包括1322A在线脱气机、G1311A四元梯度泵、G1315A二极管阵列检测器、HP化学工作站），Simplicity TM 个人型超纯水系统（Millipore公司），CQ-250超声波清洗仪（上海船舶电子设备研究所），SPU-Ⅰ自动喷雾显色器（日本），薄层自动铺板器（重庆南岸新力实验电器厂），定量毛细管（美国Drummond公司），芍药苷对照品（含量测定用，批号:0736-200116，中国药品生物制品检定所），黄芪甲苷对照品（批号:0781-9706，供含量测定用，中国药品生物制品检定所），硅胶G（薄层层析用:青岛海洋化工有限公司），阿归养血颗粒（市售）。
2 方法与结果
2.1 薄层鉴别 取本品2袋，倾出内容物，研细，加甲醇50ml超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml使溶解，以水饱和正丁醇萃取3次，每次20ml，合并正丁醇，以1%氨水洗涤2次，弃去氨水，正丁醇蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液;按处方取各药材（不含黄芪药材），照本品工艺及上述方法制成阴性对照;另取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2000年版一部附录ⅥB）试验，吸取供试品溶液15μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿—甲醇—水（13:6:2）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液。在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰，结果见图1。
1.阴性对照2.芍药苷3.4.5阿归养血颗粒
图1 阿归养血颗粒TLC （略）
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件 Alltech C 18 （4.6mm×250mm），流动相:乙腈-水（15∶85），检测波长230nm，流速0.9ml/min，柱温:室温。在此条件下对照品、芍药苷对照品及阿归养血颗粒在约13min相同时间有一色峰，见图2;理论板数按芍药苷计算应不低于2000。
A阿归养血颗粒阴性对照（略）
B芍药苷（略）
C阿归养血颗粒供试品（略）
图2 阿归养血颗粒HPLC图（略）
2.2.2 样品预处理 芍药苷水溶性强，一般以50%甲醇提取，再以大孔吸附树脂或氧化铝吸附预处理除杂质，经预试，氧化铝吸附回收低，因此，采用大孔吸附树脂，有关考察条件如下。（1）样品提取溶剂量的考察。精密称取本品细粉5g，共3份，分别精密加入50%甲醇30ml、50ml、60ml，称定重量，超声处理30min，放冷，加50%甲醇补足减少的重量。滤过，分别精密吸取续滤液15ml、20ml、20ml，置水浴上蒸干。加水20ml使溶解，余照“含量测定”项下实验，测得每袋含量分别为2.468mg、2.742mg、2.698mg。用50%甲醇50ml、60ml无明显差异，故用乙醇50ml提取。（2）样品提取时间的考察。精密称取本品细粉5g，共3份，分别精密加入50%甲醇50ml，称定重量，分别超声处理20min、30min、45min，放冷，加50%甲醇补足减少的重量。滤过，分别精密吸取续滤液20ml，置水浴上蒸干。加水20ml使溶解，余照“含量测定”项下实验，测得每袋含量分别为2.025mg、2.714mg、2.696mg。提取30min、45min无明显差异，故选择提取30min。（3）洗脱溶剂用量的考察。按“含量测定”方法，考察了以水预洗后、不同量50%甲醇，结果见表1。
表1 各洗脱部分测定结果（略）
经实验，加入样品上柱后，以水100ml预洗，去部分杂质，再以50%甲醇100ml可以完全洗脱芍药苷。
2.2.3 空白试验 按处方取各药材（不含黄芪药材），制备成空白样品液，取空白溶液10μl，注入液相色谱仪测定，结果在芍药苷色谱峰出峰位置上，无其他色谱峰出现，阴性对样品测定无干扰，见图2。
2.2.4 线性关系的考察 精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36h的芍药苷对照品9.64mg，置25ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得（每1ml含芍药苷0.3856mg）。精密吸取1、2、4、6、8ml至10ml量瓶中，加50%甲醇稀释成以下浓度:0.03856mg/ml、0.07712mg/ml、0.15424mg/ml、0.23136mg/ml、0.30848mg/ml。分别吸取10μl，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定对照品峰面积，将样品浓度与峰面积进行回归处理，回归方程为:Y=9000.96X+16.96，r=0.9998（n=5），芍药苷对照品在0.03856～0.30848mg/ml范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系。
2.2.5 精密度试验 精密吸取供试品溶液10μl，按上述色谱条件，重复进样5次，测定供试品溶液中芍药苷峰面积值，计算，峰面积值的相对标准差为1.10%。
2.2.6 加样回收率试验 精密称取本品细粉适量，共5份，置100ml锥形瓶中，各精密加入芍药苷对照品适量，混合均匀，余照“含量测定”项下实验，吸取10μl注入液相色谱仪中进行含量测定，计算回收率，结果见表2。
表2 回收率测定结果 （略）
注:平均回收率97.1%，RSD=1.6%
2.2.7 重复性试验 精密称取本品细粉5g，共5份，照“含量测定”项下实验方法制成供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，测定结果经数据处理，RSD为2.8%。
2.2.8 样品测定 取本品研细，精密称取5g，置100ml具塞三角瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，加50%甲醇补足减少的重量，滤过，精密吸取续滤液25ml，置水浴上蒸干，加水20ml使溶解，全部转移至已处理好的D101大孔吸附树脂柱（20～60目，内径15mm，高12cm）上，先用水100ml洗脱，再用50%甲醇100ml洗脱，收集50%甲醇部分，置水浴上蒸干。残渣加50%甲醇使溶解，置10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。见表3。
表3 阿归养血颗粒中芍药苷含量 （略）
3 小结
由于制剂中仅当归用量为386g，其他药材均为24g或12g，用量特别少，对党参、熟地黄也进行了薄层鉴别，但均没有找到特征斑点，而当归、川芎的薄层鉴别特征斑点又相互干扰，其鉴别方法有待于进一步研究。
含量测定结果显示，该方法具有简便、重现性好、精密度高的优点，多批次样品含量测定结果显示，各批次含量较为稳定，为阿归养血颗粒的质量控制提供了有效的方法。
（编辑周 雷）
作者单位:337000江西萍乡铁路医院