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【摘要】 目的 研究上皮型钙粘素（E-cad）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）在子宫内膜癌中的表达，探讨其表达与子宫内膜癌发生的相关性。 方法 应用免疫组化SP染色检测30例子宫内膜癌、16例对照组子宫内膜E-cad、MMP-2的表达。 结果 E-cad在子宫内膜癌组中的表达显著低于对照组（P<0.01）;MMP-2在子宫内膜癌组中的表达显著高于对照组（P<0.01）。 结论 E-cad、MMP-2的异常表达可能与子宫内膜癌的发生有关。
关键词 子宫内膜癌 上皮型钙粘素 基质金属蛋白酶-2 免疫组化
Expression of E-cad and MMP-2in human endometrial carcinoma and correlation between them
Xu Lin，Han Xuesong，Zhao Xiaoxia，et al.
Department of Gynecology，The First Affiliated Hospital of Kunming Medical College，Kunming650032.
【Abstract】 Objective To study the expression of E-cad and MMP-2in endometrial carcinoma and to ex-plore the correlation between them.Methods Immunohistochemical S-P method was employed to detect the expres-sion of E-cad and MMP-2in30specimens of endometrial carcinoma and16specimens of normal endometrium.Re-sults The expression of E-cad in endometrial carcinoma were significantly lower than those of normal endometrium（P<0.01）.The expression of MMP-2in endometrial carcinoma were significantly higher than those of normal en-dometrium（P<0.01）.Conclusion The abnormal expression of E-cad and MMP-2might be correlated with the pathogenesis of human endometrial carcinoma.
Key words endometrial carcinoma E-cad MMP-2 immunohistochemistry
子宫内膜癌（endometrial carcinoma）为女性生殖道常见三大恶性肿瘤之一，约占女性癌症总数的7% ［1］ ，其病因学至今不明。本研究检测上皮型钙粘素（E-cadherin，E-cad）和基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）在子宫腺肌病、子宫内膜癌中的表达情况，分析它们的表达与子宫内膜癌发生的相关性，为认识子宫内膜癌提供依据和积累资料。
1 材料与方法
1.1 材料及分组 收集昆明医学院第一附属医院病理科存档蜡块（1998～2003年），分为两组。Ⅰ组:子宫内膜癌组30例，子宫切除术后经病理确认为子宫内膜样腺癌，且浸润肌层，术前未行放疗、化疗及性激素类药物治疗，无内分泌、免疫和代谢性疾病。年龄26～73岁，中位年龄56.40岁。其中浸润浅肌层17例，深肌层13例。Ⅱ组:对照组16例，子宫切除术后经病理确诊为子宫肥大症的子宫内膜，其中内膜为增殖期9例、分泌期7例。术前月经周期正常，无性激素类药物应用史，无内分泌、免疫和代谢性疾病。年龄25～46岁，中位年龄40.63岁。各组均为住院病例，临床资料完整，病理诊断明确，所有标本均经病理学诊断复核。
1.2 标本取材 标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，切成4μm厚的切片。
1.3 实验方法 采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶染色（S-P免疫组化法）。即用型Ultra Sensitive-SP试剂盒、鼠抗人E-cad单克隆抗体、鼠抗人MMP-2单克隆抗体均购自福州迈新生物技术有限公司。染色步骤参照说明书进行。用已知的E-cad、MMP-2阳性片（购自福州迈新生物技术有限公司）作阳性对照，PBS代替一抗做阴性对照。
1.4 结果判断
1.4.1 E-cad E-cad为细胞膜表达蛋白，在正常组织中均匀一致地表达于上皮细胞膜，呈线性棕黄色着色，染色良好。按照Schipper ［2］ 介绍的方法，以正常组织作阳性对照进行定性分类:（1）阳性:组织细胞E-cad染色均匀一致类似于正常组织;（2）异质性:细胞染色强度不一致，阳性和阴性反应细胞混杂存在或细胞浆着色;（3）阴性:细胞均呈阴性反应。其中阳性为正常表达，异质性及阴性为异常表达。
1.4.2 MMP-2 MMP-2为细胞质表达蛋白，阳性细胞质为棕黄色。
1.4.3 免疫组化染色结果的评分 免疫组化染色强度参照Formwitz评分方法 ［3］ ，根据阳性细胞的百分率（每片随机观察5个40×10倍视野，对其中的阳性细胞计数）及显色情况分级，见表1。根据二者的乘积，将染色情况分为四级:0分为阴性（-）;1～4分为弱阳性（+）;5～8分为阳性（++）;9～12分为强阳性（+++）。
表1 免疫组化染色结果的评分（略）
1.5 统计学方法 两独立样本等级资料的分析应用Mann-Whitney UTest，在SPSS10.0统计软件上进行。
2 结果
E-cad阳性表达于Ⅰ组子宫内膜癌细胞的胞膜和Ⅱ组子宫内膜腺上皮细胞的胞膜，Ⅰ组中还可见异质性表达和阴性表达，Ⅰ组中E-cad的表达显著低于Ⅱ组（P<0.01），见表2。
MMP-2阳性表达于Ⅰ组子宫内膜癌细胞、间质细胞的细胞质和Ⅱ组子宫内膜腺上皮细胞、间质细胞的细胞质，两组中均可见MMP-2的阴性表达。Ⅰ组MMP-2的表达高于Ⅱ组，差异有显著性（P<0.01），见表3。
E-cad、MMP-2在子宫内膜癌不同肌层浸润程度的表达情况见表4。MMP-2和E-cad的表达随子宫内膜癌浸润肌层深度的增加而增加（P<0.05）。
表2 E-cad在各组的表达情况 （略）
注:Ⅰ组与Ⅱ组比较， * P<0.01（U=77.000，P=0.000）
表3 MMP-2在各组的表达情况 （略）
注:Ⅰ组与Ⅱ组比较， * P<0.01（U=125.000，P=0.005）
表4 E-cad、MMP-2在子宫内膜癌不同肌层浸润程度的表达情况 （略）
3 讨论
3.1 E-cad的表达与子宫内膜癌的相关性 钙粘素是一类钙离子依赖的黏附分子家族（Ca 2+ depend at adhesion molecule family），是参与细胞间黏附作用的重要黏附分子之一，有E、P、N等多个亚型，最具代表性的是E-cad。E-cad基因位于染色体16号染色体长臂21.1区带，由16个外显子及15个内含子组成，于1995年由Berx首先克隆 ［4］ 。E-cad广泛分布于各种类型的细胞表面，为细胞间连接的主要成分，并以此构成组织的细胞骨架，对维持组织结构形态起重要作用。本研究发现子宫内膜癌中E-cad的表达显著低于对照组。E-cad是介导同种细胞间相互黏附的上皮细胞分布性黏附分子，其结构和功能的变化通过影响细胞的脱落与再附着而直接关系到细胞的生物学行为的改变。当E-cad由于某种机制，如E-cad的表达下降或基因突变等使E-cad黏附系统紊乱，导致E-cad功能降低，可降低细胞间的黏附作用 ［5］ 。本研究发现子宫内膜癌组织中存在E-cad表达降低的现象，E-cad作为参与细胞间黏附作用的重要黏附分子，其表达下降与子宫内膜癌细胞间的黏附力下降密切相关，导致子宫内膜癌细胞易于脱落，符合肿瘤浸润转移的三步学说中最基本的条件，从而使子宫内膜癌细胞具有向肌层浸润性生长的条件。Vleminckx ［6］ 曾报道，小鼠乳腺细胞在用E-cad转染后浸润能力丧失，经E-cad反义RNA下降E-cad的表达后，重新具有了浸润能力，这进一步说明E-cad的表达与肿瘤细胞的浸润能力密切相关。本研究还发现E-cad的表达下降的程度与子宫内膜癌肌层浸润程度呈正相关，由此提示E-cad在子宫内膜癌组织中的表达下降可能在子宫内膜癌向肌层浸润性生长的过程中发挥重要作用。
3.2 MMP-2的表达与子宫内膜癌的相关性 细胞外基质（extracellar matrix，ECM），尤其是其中的基膜也是肿瘤侵袭、转移过程中必须克服的生理屏障。ECM是由胶原、蛋白多糖及糖蛋白等成分构成的细胞外骨架结构，其降解主要依靠蛋白水解酶。基质金属蛋白酶（MMPs）是一高度保守的锌离子依赖的中性内肽酶家族，是调控细胞外基质降解和重建的一类重要的蛋白水解酶。MMP-2是MMPs家族中的一种，其主要作用是降解Ⅳ型胶原和明胶。本实验发现MMP-2在子宫内膜癌组中存在过度表达，与MMP-2在对照组中的表达差异有显著性，且MMP-2的过度表达与子宫内膜癌肌层浸润深度呈正相关，提示子宫内膜癌组织蛋白水解能力的增强在子宫内膜癌组织向肌层浸润性生长过程中也发挥了重要作用。
参考文献
1 乐杰.妇产科学，第6版.北京:人民卫生出版社，2004，298.
2 Schipper JH，Frixen UH，Behrens J，et al.E-cadherin expression in squamous cell carcinomas of head and neck:inverse correlation with tu-mor dedifferentiation and lymph node metastasis.Cancer Res，1994，51（23）:6328-6337.
3 Sillem M，Hahn U，Coddington CC，et al.Ectopic growth of endometrium depends on its structural integrity and proteolytic activity in the cynomolgus monkey（Macaca fascicularis）model of endometriosis.Fertil Steril，1998，66（3）:468-473.
4 Berx G，Sters K，Van Hengel J，et al.Cloning and charcteriation of hu-man invasions suppressor gene E-cadherin（CDH1）.Genomics，1995，26（2）:281-289.
5 Shiozaki H，Oka H，Inoue M，et al.E-cadherin mediated adhesion sys-tem in cancer cells.Cancer，1996，77（suppl）:1605-1613.
6 Vleminckx K，Vakaet IJ，Mareel M，et al.Genetic manipulation of E-cadherin expression by epithelial tumor cells reveals an invasive suppres-sor role.Cell，1991，66（1）:107-119.
（编辑川 夏）
作者单位:650032云南昆明医学院第一附属医院妇科（△ 病理科）