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【摘要】 目的 分析热休克蛋白70（HSP70）在垂体腺瘤中的表达，探讨HSP70与垂体腺瘤侵袭性之间的关系，研究以HSP70的表达水平作为判断垂体腺瘤侵袭性和预后指标的可能性。 方法 取经手术切除且病理诊断为垂体腺瘤、具有完整内分泌资料的患者50例，根据Hardy-Wilson及Knosp分级、分期标准，结合病理活检判断其肿瘤侵袭性，用免疫组化方法分别检测每例肿瘤HSP70的表达水平。 结果 50例患者中HSP70蛋白表达的阳性率为86.0%（43/50），PRL腺瘤和无功能腺瘤HSP70蛋白表达阳性率在统计学上差异无显著性（P>0.05）;HSP70蛋白表达水平与垂体腺瘤侵袭性之间的关系在统计学上存在正相关关系（r s =0.303，P<0.05）。 结论 HSP70的表达水平与垂体腺瘤侵袭性有关，其表达水平有可能作为判断垂体腺瘤侵袭性和预后的指标。
关键词 热休克蛋白70 侵袭性 垂体腺瘤
The correlation between HSP70and invasiveness of pituitary adenoma
Hu Bin，Huang Qin，Huang Shizhang，et al.
Department of Neurosurgery，The Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical College，Guangzhou510260.
【Abstract】 Objective To analyse the expression of HSP70in pituitary adenoma，study their correlation with the invasiveness of the tumors and discuss the possibility of taking them as the markers to indicate invasiveness and prognosis.Methods 50patients were collected after surgery from patients after full endocrine preoperative evalua-tion.All tumors were graded and staged according to Hardy-Wilson and Knosp classification，using magnetic reso-nance scanning.Immunohistochemical staining was used to semi-quantify the expression of HSP70.Results HSP70was detected positively in86.0%（43/50）pituitary adenoma patients.There was no significantly difference between the expression of HSP70in prolactinoma（77.8%）and that in null cell adenoma（94.4%）（P>0.05）.There was a positive correlation between the expression of HSP70and the invasiveness of pituitary adenoma from Spearman rank correlation test（P<0.05）.Conclusion The positive correlation between expression of HSP70and the invasiveness of pituitary adenoma was significant.The expression of HSP70may be taken as the markers to indicate invasiveness and prognosis.
Key words heat shock protein70 invasiveness pituitary adenoma
侵袭性垂体腺瘤与非侵袭性腺瘤在细胞形态学上无法区别，但前者可局部侵袭性生长，侵犯鞍膈、硬脑膜、颅骨、邻近血管及脑组织等结构。既往的研究报道，在许多肿瘤中，如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、白血病、神经母细胞瘤等，热休克蛋白70（heat shock protein70，HSP70）都有高表达，且表达的量与肿瘤恶性程度相关。本试验的目的是探讨HSP70在垂体腺瘤中的表达，并研究HSP70表达水平与垂体腺瘤侵袭性之间的关系，分析HSP70作为垂体腺瘤预后评估指标的可能性。
1 资料与方法
1.1 一般资料 本研究收集了我院2001年4月～2002年11月的垂体腺瘤患者50例，均经手术治疗，术后病理诊断明确，有完整的内分泌和影像学检查资料。男26例，女24例，年龄18～72岁，平均43.3岁。根据内分泌检查及临床资料，肿瘤分为泌乳素（PRL）腺瘤27例，促肾上腺皮质激素（ACTH）腺瘤3例，生长激素（GH）腺瘤2例，无功能腺瘤18例。
1.2 试验方法 HSP70的表达使用免疫组化的方法对手术后保存的石蜡标本进行检测，采用Ultra Sensitive S-P免疫组化染色试剂盒（福州迈新生物技术公司生产），此试剂盒是用生物素标记的第二抗体与链霉菌抗生物素蛋白连接的过氧化物酶及底物色素混合液来测定细胞和组织中的抗原。
1.3 结果判定 HSP70免疫组化染色后胞核或胞浆出现棕黄色颗粒，则为阳性细胞，按阳性细胞所占细胞的百分比，将其分为4个等级:（-）无阳性细胞;（+）阳性细胞<25%;（++）阳性细胞占25%～50%;（+++）阳性细胞>50%。肿瘤侵袭性的判定根据患者的影像学资料，按照Hardy-Wilson分级、分期标准 ［1］ 和Knosp分类 ［2］ ，结合硬膜病理检查结果来进行判断，Hardy-Wilson标准Ⅲ级及Ⅲ级以上和/或C～E期的垂体腺瘤以及Knosp分类3级以上的垂体腺瘤考虑为侵袭性垂体腺瘤。
1.4 统计学方法 应用SPSS11.0for Windows软件包进行统计学分析。检验两个率之间差异的显著性采用χ2检验;等级资料相关性的统计方法采用两两之间Spearman等级相关分析。
2 结果
2.1 HSP70与垂体腺瘤不同分型的关系 50例患者中HSP70蛋白表达的阳性率为86.0%（43/50），其中PRL腺瘤的阳性率为77.8%（21/27），无功能腺瘤为94.4%（17/18），ACTH腺瘤及GH腺瘤均为100%（3/3及2/2）。PRL腺瘤和无功能腺瘤之间的HSP70蛋白表达阳性率经χ 2 检验P>0.05，两者在统计学上差异无显著性，而ACTH腺瘤和GH腺瘤因病例数较少，未做统计学分析。见表1。
表1 肿瘤分型与HSP70阳性表达情况（略）
注:经χ 2 检验，P>0.05，两者差异无显著性
2.2 HSP70与垂体腺瘤侵袭性的关系 50例患者中非侵袭性垂体腺瘤18例，侵袭性垂体腺瘤32例，HSP70蛋白表达阴性7例，（+）17例，（++）18例，（+++）8例，在HSP70蛋白表达水平与垂体腺瘤侵袭性之间关系的研究中，因为数据均为等级资料，将结果转化为秩和等级，经Spearman等级相关检验，r s =0.303，P<0.05，在统计学上存在正相关关系。
3 讨论
HSP70家族在细胞内含量最多，是由位于细胞内不同部位数量很多的成员组成。真核生物的HSP70具有高度的保守性。多年研究发现，HSP70家族具有许多共同性质:（1）所有的HSP70与ATP的结合具有亲和力，并具有ATP酶的活性;（2）识别不同的靶多肽并调节其构象;（3）在行使功能时需要其他的HSP或细胞因子辅助;（4）在细胞内异常蛋白的积累可以诱导HSP70家族成员合成;（5）参与c-myc，c-fsw和p53等原癌基因和抑癌基因及其蛋白产物的相互作用而调节细胞的增殖。
在肿瘤发生、发展的复杂过程中，癌基因和抑癌基因之间的协同或拮抗作用在细胞增殖及转化中发挥着重要作用。HSP70能与多种癌基因产物结合形成异源蛋白复合体，介导癌蛋白构象成熟及转运，从而参与细胞转化过程。肿瘤细胞不断增殖、合成代谢增强，需要大量的HSP70来调节和稳定这一异常增殖过程。正常细胞中，HSP70的表达受细胞周期调控，而肿瘤细胞中突变或异常蛋白质的存在刺激HSP70的合成，使其呈现持续的高诱导表达。在病毒转化和化学诱导的肿瘤细胞中，HSP70的表达比正常细胞高几倍。在许多恶性肿瘤（如乳腺癌、肠腺癌、肺癌等）中，HSP70的高表达与肿瘤的恶性程度及患者的无瘤生存期相关。亦有文献报道，其高表达可作为膀胱癌及卵巢癌预后的指标之一 ［3］ 。对此可能的解释:HSP70的高表达一方面介导癌基因及抑癌基因产物的构象成熟、跨膜转运;另一方面介导错配蛋白的降解，协调肿瘤细胞的蛋白质快速代谢平衡，使肿瘤细胞得以无限增殖。
HSPs与脑肿瘤的关系中，研究最多的是胶质瘤。Assi-makopoulou等 ［4］ 的研究显示，HSP27在胶质母细胞瘤中阳性率为82%（42/51），间变性星形细胞瘤中为40%（8/20），星形细胞瘤中为8%（2/24）。HSPs在垂体腺瘤中的表达国外仅有个别报道，国内仍未见有研究，Kontogeorgos ［5］ 等的研究发现HSP72在垂体腺瘤中的阳性率为90%（25/28）。本组研究中，HSP70蛋白表达的阳性率为86.0%（43/50），其中PRL腺瘤的阳性率为77.8%（21/27），无功能腺瘤为94.4%（17/18），ACTH腺瘤及GH腺瘤均为100%（3/3及2/2）。PRL腺瘤和无功能腺瘤中HSP70蛋白表达的阳性率经χ 2 检验P>0.05，两者在统计学上差异无显著性，而ACTH腺瘤和GH腺瘤因病例数较少，未能做进一步统计学分析。本组实验说明，HSP70蛋白在垂体腺瘤中的表达水平较高，与文献报道相似，而且PRL腺瘤和无功能腺瘤中HSP70蛋白的表达无明显差异。
HSP70在乳腺癌、膀胱癌等多种肿瘤中与肿瘤的恶性程度和预后有关，随着肿瘤恶性程度增加，HSP70表达的水平也增高，预后较差。HSP70可作为肿瘤预后评估的有效指标。而HSP70与垂体腺瘤侵袭性之间的关系既往未见有报道。本研究将HSP70蛋白表达水平与垂体腺瘤侵袭性两者的等级资料转换成秩和后进行统计分析，经Spearman等级相关检验，r s =0.303，P<0.05，在统计学上有意义。说明HSP70蛋白的表达水平与垂体腺瘤侵袭性之间存在正相关关系，随着垂体腺瘤侵袭性的增加，HSP70蛋白的表达也增加，同时肿瘤的预后也相应较差，这一结论与既往在其他肿瘤中的研究结果相类似。因此，HSP70有可能成为判断垂体腺瘤侵袭性和预后的指标之一。
参考文献
1 Hardy J，Vezina JL.Transsphenoidal neurosurgery of intracranial neo-plasm.Adv Neurol，1976，15:261-273.
2 Knosp E，Steiner E，Kitz K，et al.Pituitary adenomas with invasion of the cavernous sinus space:a magnetic resonance imaging classification com-pared with surgical findings.Neurosurgery，1993，33（4）:610-618.
3 Jobsen JJ，Schutter EM，Meerwaldt JH，et al.Treatment results in women with clinical stage and pathologic stage endomertial carcinoma.Int J Gy-necol Cancer，2001，11（1）:49-53.
4 Assimakopoulou M，Sotiropoulou-Bonikou G，Maraziotis T，et al.Prog-nostic significance of Hsp-27in astrocytic brain tumors:an immunohis-tochemical study.Anticancer Res，1997，17（4A）:2677-2682.
5 Kontogeorgos G，Stefaneanu L，Kovacs K.Stress-response proteins in human pituitary adenomas.Expression of heat-shock protein72（HSP-72）.Endocrine，1997，6（1）:25-29.
（编辑乔 晓）
作者单位:510260广东广州医学院第二附属医院神经外科（△ 病理科）