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【摘要】 目的 由于抗生素及消毒因子的作用，致使许多细菌细胞壁受到破坏转化为细菌L型，增加了医院感染的隐患。本文通过监测医院环境中L型菌污染情况，探讨医院环境中L型菌监测的必要性。 方法 对医院环境消毒前后细菌原型和L型进行监测和对医院“客观”环境进行模拟消毒试验，诱导大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的L型菌转变情况。 结果 对于医院环境消毒前后不同监测对象的细菌污染情况，除使用中的酒精外，增加监测细菌L型对细菌原型菌落总数合格率没有影响;而在消毒污物“较多”和吸水性较强的环境时，则较易形成细菌L型。 结论 就医院环境细菌L型监测而言，除使用中的酒精需额外进行细菌L型监测外，其他则必要性不大。
关键词 医院环境 细菌L型 消毒剂
The research of the bacteria L-form in the hospital
Mo Haolian，Zhang Shiying，Huang Cilin，et al.
The Futian Center for Disease Prevention and Control，Shenzhen518033.
【Abstract】 Objective As a result of the use of antibiotics and disinfection factor，many bacteria lost its cell wall and change into L-form.In the case，it increases the risk of nosocomial infections.By monitoring the L-form contamination status of hospital environment，we should know the necessity of monitoring to the L-form.Methods We monitored the antetype-bacteria and the L-form in the disinfected and no-disinfected enviroment，and had many simulative disinfection tests in the“impersonal”environment to discover the situation of the antetype-bacteria of Escherichia coli，Staph aureus and hay bacillus transfering into the L-form.Results We monitored the bacteria of the different objects in the disinfected and no-disinfected enviroment and found the additional L-form monitoring to the objects did not have the effect on the eligible rate of total number volume of antetype except of the using alcohol.L-form is easier induced when we disinfects the bibulous enviroments which have much infecants.Conclusion As for the L-form monitoring in the hospital，we should have a additional monitoring to L-form in the using alcohol but the others is not necessary.
Key words hospital enviroment L-form disinfectant
细菌L型广泛分布于自然界，过去一般认为有致病性的细菌变为L型菌后即不致病，目前大量资料证明L型菌的形成主要与长期大量应用抗生素有关，且仍具有致病性 ［1］ 。大量的文献显示:迄今为止，几乎所有的细菌、螺旋体和真菌中都发现L型的存在 ［2］ 。有人指出:在有条件的单位，应逐步开展细菌L型的检测以防病原菌的漏检 ［3］ ;亦有人指出过高估计了细菌L型在临床感染中所占病原菌的比例及其重要性 ［3］ ，因此为了解医院环境中L型菌的污染情况，增强对医院“客观”环境的消毒和某些消毒因子的进一步认识，提高消毒质量，为CDC指导下级医院消毒监测提供依据，我们对医院环境消毒前后细菌原型和L型进行监测并对医院“客观”环境进行模拟消毒实验，通过观察细菌L型的形成情况以了解L型菌与消毒因子的关系及存在情况。现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 标准菌株 大肠埃希菌（ATCC25922），金黄色葡萄球菌（ATCC25923），枯草杆菌（ATCC9372），由中国药品生物制品检定所提供。
1.2 培养基
1.2.1 普通营养琼脂 北京陆桥技术有限责任公司提供，并按其使用要求配制备用。
1.2.2 细菌L型分离培养基 由中国腹泻病控制上海试剂供应研究中心提供，并按其使用要求配制备用。
1.2.3 监测用的细菌原型无菌洗脱液和相应消毒液中和剂 按卫生部颁发的《消毒技术规范》 ［4］ 要求进行配制使用，监测用的细菌L型无菌洗脱液（仅限于物体表面和医护人员手监测）配制:按细菌L型培养渗透压的要求，在细菌原型洗脱液的基础上加入一定量的盐分。
1.2.4 细胞壁鞣酸染色液和细菌L型菌落染色液 ［5］ 按要求配制使用。
1.3 菌悬液的制备 把大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草杆菌增菌后，把新鲜增菌液分别稀释成含菌量为5×10 5 ～5×10 6 （按GB15981-1995消毒剂定量消毒试验要求操作） ［6］ 。
1.4 实验方法
1.4.1 细菌L型的培养及鉴定 把细菌L型培养平皿置于5%～10%CO 2 培养箱中，（36±1）℃培养3～7天 ［5］ ，然后用低倍镜观察菌落特征，并进行细胞壁染色和菌落染色确认。
1.4.2 对空气、物体表面、医护人员手进行消毒前后含菌情况监测，使用中消毒液（物品）残存菌监测 消毒前监测由我中心人员在没有通知医院（区级以上医院）的前提下进行突击抽检，消毒后监测则由我中心人员通知医院消毒完成的前提下进行抽检;采样时在“同一地方”采双份样品，一份置细菌原型无菌洗脱液，一份置细菌L型无菌洗脱液进行检测，细菌原型的检测操作则按《消毒技术规范》 ［4］ 进行;细菌L型的检测操作除用细菌L型分离培养基代替普通营养琼脂外，其他大部分操作同细菌原型，平板倾注后按1.4.1进行培养鉴定。
1.4.3 模拟“客观”环境进行消毒试验，观察细菌L型的形成情况 选择常用的物体表面消毒剂（次氯酸钠），根据消毒剂的最低使用浓度的要求把消毒剂稀释成一定浓度;在光滑瓷砖操作台及有一定灰尘的水泥操作台上喷洒一定量的菌悬液，然后进行喷洒和涂沫消毒。分别于不同时间进行采样，并检测细菌L型。
1.4.4 医院环境不同监测对象细菌培养合格率的判断 按GB15982-1995 ［6］ 。
2 结果
2.1 医院环境新配或未使用消毒液的细菌监测 未发现有任何细菌（原型和L型）生长。
2.2 医院环境（空气、医护人员手、物体表面）消毒前的监测 具体数据见表1。
表1 医院环境消毒前不同监测对象细菌污染情况（略）
注:（1）细菌B型与细菌L型的检出比例为反映真实数据，故未做简略;（2）空气的样品份数指每5个平皿监测1次为1份
由表1可见，空气、物体表面和医护人员手每100份样的细菌原型与L型检出比例分别为:765∶25、13787∶80、9240∶20。
2.3 医院环境（空气、医护人员手、物体表面）消毒后的监测和使用中的消毒液的监测 具体数据见表2。
表2 医院环境消毒后不同监测对象和使用中消毒液的细菌污染情况（略）
注:（1）细菌B型与细菌L型的检出比例为反映真实数据，故未做简略;（2）空气的样品份数指每5个平皿监测1次为1份
监测362份的物体表面中，其中有3份细菌L型培养不合格，这3份样品均为氧气面罩表面，它们在每个检测平皿上都超过100cfu细菌L型生长，此次共监测氧气面罩21份，其中细菌L型生长共732cfu。由于此类物体表面的数据呈极“偏态”分布，因此去除此类数据后，由表2可得出，空气、物体表面和医护人员手每100份样的细菌原型与L型检出比例分别为286∶41、3440∶18、450∶50;酒精每100份样的细菌原型与L型检出比例为17∶583。经过细菌L型培养后，空气、物体表面医护人员手和酒精细菌（原型和L型）菌落总数的检出率比细菌原型分别高14.3%、0.5%（去除氧气面罩表面细菌监测）、11.1%、3500%。
2.4 模拟“客观”环境进行定量消毒试验，观察细菌L型的形成情况 具体数据见表3。
表3 不同浓度的次氯酸钠在不同污染环境的消毒导致细菌L型形成情况（略）
注:“+”可检出细菌L型，“-”不能检出细菌L型
3 讨论
L型细菌广泛分布于自然界，细菌L型可以是自发的，也可以是诱发的，但人工诱导的频率远比自发为高 ［7］ ，一定浓度消毒液（75%酒精、碘伏等）和紫外线在一定的时间内皆可使一些细菌诱导为细菌L型 ［8］ 。本次实验显示:在医院环境内消毒前皆可检出一定数量的细菌L型，在消毒后，不同监测对象细菌原型的检出数目比消毒前数量低，这说明经过消毒后医院环境的污染菌的数目有所减少，但细菌L型的检出率则较消毒前高，这可能由于消毒不完全，由部分低浓度的消毒剂或紫外线诱导所致。
在消毒后物体表面的监测中，氧气面罩含有较多的细菌L型，这可能与其消毒方式或溶菌酶有关 ［9］ ，导致诱导较多的细菌L型。就医院使用中消毒液的细菌监测（包括L型监测）而言，除酒精外，其他消毒液的合格率没有任何改变。酒精的合格率有较大的改变，可能因其挥发，致使消毒效果降低，进一步诱发细菌L型［10］ 产生。根据医院环境消毒前后及使用中消毒液污染菌合格率差异性，笔者认为，进行医院环境细菌L型的监测，除使用中酒精需额外进行细菌L型监测外，其他则必要性不大。
从表3可看出:在吸水性强、污物较多的消毒环境中，易形成较多的细菌L型，因此吸水性强、污物较多的消毒环境应适当增加消毒液的浓度及用量，防止消毒液的“消耗”，以致消毒不完全。
参考文献
1 张群智，周惠平.L型菌的培养、药敏与其所致感染性疾病的研究进展.大理学院学报，2003，2（1）:82.
2 Dienes L.Isolation of Pleuropneumonia-like organis ms from H.In-fluenzae with the aid of penicillin proc.Soc Exp Bio Med，1947，64:166-168.
3 周责民.把细菌L型的检测水平提高一步.中华医学检验杂志，1994，17（5）:261.
4 中华人民共和国卫生部，卫法监发［2002］282号.消毒技术规范（2002年版），第三部分.
5 北京市卫生防疫站.卫生防疫微生物检验操作规程（上册）.北京:北京出版社，1991，4:360-363.
6 中国预防医学科学院标准处.传染病诊断国家标准汇编.北京:中国标准出版社，1998，356-373.
7 田碧文.细菌L型与医院感染.中国医院感染学杂志，1999，9（2）:126.
8 高东旗.消毒剂对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌诱导L型形成的实验观察.中国消毒学杂志，1998，15（3）:152-155.
9 袁著忻，叶明亮.细菌L型研究现状.前卫医药杂志，1998，15（3）:190.
10 邢浩莉.医院环境微生物的L型菌的研究.护理研究，2002，16（7）:397-398.
（编辑小 南）
作者单位:518033广东省深圳市福田区疾病预防控制中心