点击显示 收起
【摘要】 目的 建立当飞利肝宁胶囊（当药、水飞蓟）中水飞蓟宾含量的方法。 方法 采用C 18 -BDS柱;流动相为甲醇-水-冰醋酸（50∶50∶0.5），检测波长为288nm，流速为1ml/min。 结果 水飞蓟宾对照品线性范围10.6～74.2μg，r=0.9994，平均回收率99.1%，RSD%=0.68%。 结论 本方法操作简便、准确、重复性好，可作为该制剂的定量分析方法。
关键词 当飞利肝宁胶囊 水飞蓟宾 高效液相
当飞利肝宁胶囊是部颁标准《中药成方制剂》第17册（WS3-B-3199-98）收载品种。由当药、水飞蓟两味药物组成，用于湿热郁蒸而致的黄疸、急性黄疸型肝炎、传染性肝炎、慢性肝炎而见湿热证候者。为了控制该制剂的质量，保证用药效果，我们对当飞利肝宁胶囊的质量标准进行研究。方中水飞蓟清利湿热、利胆退黄为君药，其主要成分为水飞蓟宾，测定水飞蓟宾含量能够反映和控制该制剂的内在质量。有关水飞蓟宾的含量测定方法有紫外分光光度法、薄层扫描法 ［1］ 、高效液相色谱法 ［2］ 。本文采用反相高效液相色谱法测定了水飞蓟宾的含量，为控制该制剂的质量标准提供了依据。
1 仪器及材料
1.1 仪器 Waters510高效液相色谱仪;Waters486紫外检测器;HS色谱数据分析系统;USC-302超声波清洗仪。湘仪-岛津电子分析天平型AEL-200。
1.2 对照品及试剂 水飞蓟宾（购自中国药品生物制品检定所，批号0856-200203）;当飞利肝宁胶囊（四川美大康药业生产，批号:030701）;甲醇为色谱纯;冰醋酸为分析纯，水为重蒸水。
2 当飞利肝宁胶囊中水飞蓟的含量测定
2.1 对照品溶液的制备 精密称取经60℃减压干燥3h的水飞蓟宾对照品5.3mg，置50ml量瓶中，加甲醇适量，水浴加热使溶解，冷却至室温。加甲醇稀释至刻度，摇匀即得。
2.2 供试品溶液及阴性对照品溶液的制备 精密称定本品内容物0.25g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，于65℃～75℃水浴回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，作为供试品溶液。按当飞利肝宁片制备工艺，制成缺水飞蓟的阴性对照样品。取阴性对照样品适量，按当飞利肝宁片样品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。
2.3 色谱条件 色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶填充的色谱柱，柱长250mm;流动相:甲醇-水-冰醋酸（50∶50∶0.5）;流速:1ml/min;检测波长:288nm;柱温:室温;进样量:20μl。
2.4 空白干扰试验 分别取阴性对照溶液、水飞蓟宾对照品溶液、当飞利肝宁胶囊样品溶液，以上述确定的色谱条件，依次进样。结果表明:样品色谱与水飞蓟宾对照品色谱有同样位置的吸收峰，而阴性对照样品在同样的位置无吸收，不影响样品含量测定。见图1、图2、图3。
图1 样品（略）
图2 水飞蓟宾对照品（略）
图3 阴性对照品（略）
2.5 水飞蓟宾线性范围考察 精密吸取对照品溶液1.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、7.0ml，置10ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，即得不同浓度的水飞蓟宾标准溶液。分别精密吸取上述各浓度的标准溶液20μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，水飞蓟宾进样量为横坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程为A=2262034.85+215235584.2c，r=0.9994。结果表明水飞蓟宾进样量在10.6～74.2μg之间两者线性关系良好。
2.6 精密度试验 精密量取同一批号样品溶液20μl连续进样5次，测定峰面积，计算精密度。RSD值为0.98%，结果表明精密度良好。
2.7 加样回收率试验 采用加样回收测定方法，精密称取5份已知含量的同批样品各1ml，置5个10ml容量瓶中，分别添加水飞蓟宾标准溶液（浓度0.0318mg/ml）1ml，2ml，3ml，4ml，5ml，加流动相至刻度。取加样回收供试品各20μl，依法测定，结果见表1。平均回收率为99.1%，结果表明回收率高，方法可行。
表1 加样回收率试验 （略）
注:RSD=0.68%
2.8 重现性试验 精密称取5份同一批次样品各0.25g，按供试品溶液制备方法，制备成重现性试验供试液，并依法测定其水飞蓟宾峰面积，计算样品中水飞蓟宾平均含量为7.50mg/片，其RSD为0.95%。
2.9 样品测定 按照含量测定方法共测定了3批样品，含量分别为7.34mg/片、7.52mg/片、8.01mg/片。
3 讨论
根据查阅水飞蓟质量标准及其他相关文献，水飞蓟宾在（288±1）nm处有最大吸收，不受其他成分影响。我们选用287nm、288nm作为测定波长，根据图谱，在波长为288nm处峰形最好，所以确定检测波长为288nm。
有文献报道水飞蓟宾的检测多以甲醇-水、甲醇-水-冰醋酸、甲醇-水-0.5mol/L磷酸二氢钾的混合溶液为流动相，根据具体品种不同，调节不同的混合比例。试验了几种配比，样品中水飞蓟宾的色谱峰与其他干扰组分色谱峰的分离效果不好，经过大量的预试和筛选，结果选用甲醇-水-冰醋酸（50∶50∶0.5）作为流动相时有较好的分离。
经过对该制剂含量测定以前未有报道，方法学研究结果表明，本文报道的测定方法简便、准确、重复性好，空白无干扰，可以作为当飞利肝宁胶囊的定量分析方法。
参考文献
1 杨锡.薄层扫描法测定益肝灵胶囊中水飞蓟素的含量.中成药，1999，21（4）:180-181.
2 定天明，田颂九，张正行，等.水飞蓟素制剂中有效成分HPLC分离测定.药物分析杂志，1999，19（5）:304-308.
（编辑朝 颜）
作者单位:221004江苏徐州颐海药业有限责任公司