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首页合作平台在线期刊中华现代临床医学杂志2005年第3卷第18期

荧光PCR检测尿中结核分枝杆菌的意义

来源:中华现代临床医学杂志
摘要:在泌尿系结核中肾结核最为常见、最先发生,以后由肾脏蔓延至整个泌尿系统。因此,肾结核实际上具有代表着泌尿系结核的意义。目前,肾结核的诊断,尤其是早期的非典型性肾结核的诊断,在临床有一定困难[1]。在实验室检测中,结核病患者的细菌学检查,是确定结核病诊断和化疗方案的重要依据[2]。...

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  在泌尿系结核中肾结核最为常见、最先发生,以后由肾脏蔓延至整个泌尿系统。因此,肾结核实际上具有代表着泌尿系结核的意义。目前,肾结核的诊断,尤其是早期的非典型性肾结核的诊断,在临床有一定困难[1]。在实验室检测中,结核病患者的细菌学检查,是确定结核病诊断和化疗方案的重要依据[2]。但由于结核菌的遗传特性决定的生长周期长,致使常规细菌学检查方法存在着灵敏度低、操作复杂、需时间较长和影响因素较多、不易标准化等特点,使细菌学诊断发展缓慢,无法充分满足临床诊断的需要[3]。本文用荧光PCR技术检测患者尿中结核杆菌(TB-PCR)来辅助诊断肾结核,以期取得更重要的临床诊断价值。

  1  资料与方法

  11  标本来源  52例疑似肾结核患者均为我院2001~2004年泌尿外科门诊及住院患者。尿液收集方法,是留晨尿的中段尿于无菌试管中(此试管是我院细菌室尿培养所用试管,可盛尿液约10ml)。

  1.2  方法  收到无菌管标本后,3000rpm离心10min,弃上清液,留取沉渣约1ml,振荡混匀后移至一次性15ml的离心管中。采用PCR核酸扩增方法结合荧光探针检测技术,通过荧光自动PCR仪实现在全封闭反应体系中进行核酸扩增和检测。本试验方法按试剂说明书操作,试剂盒由深圳匹基公司提供,核酸扩增仪为ROCHE公司生产的LightCycler(全自动荧光定量分析系统),LightCycler专用软件计算结果。

  2  结果

  52例肾结核疑似患者尿TB-PCR检测结果,见表1。

  表1  患者尿中TB-PCR检测结果  (略)

    从表1可看出,52例肾结核疑似患者最后确诊为肾结核36例,其中25例尿中TB-PCR检出阳性,而非肾结核患者无一例检出尿TB-PCR阳性。这说明,TB-PCR的检出阳性率约700%,特异性100%。且其中有5例患者,尿中TB-PCR检出阳性,而其他检查均为阴性,抗结核治疗3个月后明显有效,这说明在早期诊断上本法优于其他检查。

  3  讨论

  一般以尿中检出结核杆菌对肾结核诊断有决定作用。但常用实验室病原学检查:(1)尿沉渣抗酸杆菌检查,具有非特异性[1,3],尿中包皮垢杆菌、草分枝杆菌也是经常在尿液中存在的抗酸杆菌,因此尿液中抗酸杆菌并不等于结核杆菌。(2)尿结核菌培养和尿结核菌的动物接种,都是诊断肾结核价值极高的检查,其阳性结果可作为肾结核诊断的依据,阳性率高达90%以上,但时间较长,常需1~2个月才有结果。最近发展的分枝杆菌快速培养检测技术[4]也要1周左右。而本文介绍的荧光PCR方法,检测初步离心浓缩后的尿标本中的结核杆菌,检测阳性率约700%,特异性100%,且及时、快速,克服了以往实验室检查的缺点。这与有关文献[1]报道尿PCR TB-DNA检测阳性率高达722%基本一致。连续3天尿标本的检测与一次尿标本检测,阳性率有所不同,前者更高。另外,尿标本简单易取,取样不会给患者带来痛苦和增加感染机会,且较X线检查诊断肾结核有早期诊断的优势。因此,不难看出荧光PCR技术检测尿中结核杆菌对临床肾结核以至泌尿系结核的诊断具有无可替代的重要作用。

  【参考文献】

  1  李彦锋,方玉华,靳风烁,等.临床肾结核32年回顾.中华泌尿外科杂志,1998,8:486-489.

  2  王钊,吴明江.全国结核病防治工作手册.北京:卫生部疾病控制司医政司,1999,1-140.

  3  王苏民.结核病及其实验技术的现状与展望.中华检验医学杂志,2001,24:71-72.

  4  Cambau E,Wichlacz C,Truffot-Pernot C,et al.Evaluation of the new MB redox system for detection of growth of mycobacteria.J Clin Microbiol,1999,37:2013-2015.

  作者单位: 224001 江苏盐城,东南大学医学院附属盐城医院检验科

  (编辑:邹  晔)

作者: 季红兵朱蓉 2005-9-23
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