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【摘要】 目的 评价幽门螺杆菌粪便抗原（HpSA）法在儿童幽门螺杆菌（Hp）感染的诊断价值。方法 分别应用HpSA法和细菌培养检测了78例因反复上腹痛、脐周痛等消化道症状的来医院就诊的儿童标本，并与细菌培养结果对比以判断其幽门螺杆菌感染情况。结果 与细菌培养结果相比，以HpSA法检测的78例患者中Hp 感染的阳性率为48.7%，其敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为94.6%、92.7%、92.1%、95.0%，二者结果差异无显著性（P>0.05），准确性为93.6%。结论 HpSA法检测幽门螺杆菌感染是一种非侵入性的方法，方法简单方便，有高敏感性和特异性，具有良好的临床应用价值。
【关键词】 幽门螺杆菌；粪便；抗原；诊断
Helicobacter pylori antigen in stool in diagnosis of children infection
WANG An-fang.
Kang’ai Hospital,Nanjing 210029,China
【Abstract】 Objective To evaluate the value of Helicobacter pylori antigen in stool (HpSA) in diagnosis of children Helicobacter pylor (Hp) infection.Methods 78 patients with symptoms of repeatedly upper abdominal or perinave pain were detected in stool specimens by HpSA and bacteria culture,the results compared with bacteria culture to evaluate the Hp status of children Hp infection.Results Positive ratio of Hp infection was 48.7% by detecting antigen in 78 subjects stool specimens.The test showed a sensitivity,specificity,positive predictive value and negative predictive value of HpSA test for the 78 patients were 94.6%,92.7%,92.1%,95.0% respectively,and the accuracy was 93.6%.Conclusion Stool antigen method showed a good sensitivity,specificity and accuracy for diagnosing Hp infection in children.This novel method may be useful in clinical practice as a basic test because it is rapid,reliable easy to perform and a high sensitivity,specificity,accurate,noninvasion test.
【Key words】 Helicobacter pylori;stool;antigen;diagnosis
自从1983年澳大利亚学者Warren和Marshall首先发现幽门螺杆菌（Hp）以来［1］，已有许多方法可检测Hp感染，但各有其优缺点［2］。儿童由于语言表达能力及耐受差，许多诊断Hp感染的方法并不适合用于儿童Hp感染诊断。本文对78例患儿的粪便进行检测并与细菌培养的结果进行比较分析，以评价幽门螺杆菌粪便抗原（HpSA）法诊断幽门螺杆菌（Hp）感染的可靠性，为寻求一种可靠而又适合判断儿童Hp感染的方法提供新的选择，现总结报告如下。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 研究资料 选自2004年6月~2005年3月因上消化道症状进行胃镜检查患儿78例，其中男44例，女34例，平均年龄8.6岁。所有患儿均排除4周内服用任何抗生素、H2受体拮抗剂、铋剂以及质子泵抑制剂治疗。胃镜检查时在胃窦部活检一块胃黏膜组织做细菌培养，同时留取患儿当天粪便以备检测。
1.1.2 主要试剂 HpSA法试剂盒购自北京协和药业有限公司，哥伦比亚琼脂选择培养基购自美国Difco公司，三甲氧苄氨嘧啶、多黏菌素、万古霉素等抗生素购自Sigma公司，微需氧袋购自上海医科大学物理化学教研室。
1.2 研究方法
1.2.1 HpSA法 用木棒挑取粪便100mg，用稀释液1∶4稀释样品并振荡混匀。吸取2滴稀释样品加入微孔底部，然后加入酶标抗体，混匀，置25℃ 1h。弃去液体轻轻拍干，用洗涤液冲3~4次。每孔加入2滴底物溶液，轻摇15s，室温孵育10min，待阳性孔和部分孔呈蓝色，加2滴终止液，轻摇15s，用阴性对照调零，于15min内在酶联免疫读数仪450nm处读取吸光度数值。阳性：OD值≥0.15，阴性＜0.15。
1.2.2 细菌培养 采用哥伦比亚琼脂选择培养基（美国Difco公司）加5%去纤维兔血，三甲氧苄氨嘧啶5mg/L，多黏菌素2500u/L，万古霉素100mg/L，划线接种，微需氧袋（上海医科大学物理化学教研室）37℃孵育3~5天后，挑取光亮、半透明、针尖样菌落，经革兰染色呈阴性杆菌，在显微镜下观察其形状为弧形、S型或螺旋状，并做尿素酶、氧化酶、触酶试验呈阳性可判定细菌培养为阳性。
1.2.3 阳性结果判断 细菌培养结果作为金标准［3］，如细菌培养为阳性，即可以判断儿童Hp感染阳性。
1.3 统计学方法 采用χ2检验进行统计学分析。
2 结果
78例标本用HpSA法检测结果与细菌培养结果的比较：以HpSA法检测的78例儿童患者中Hp感染的阳性率为48.7%，其敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为94.6%、92.7%、92.1%、95.0%，准确性为93.6%，二者结果差异无显著性（P>0.05），见表1。表1 细菌培养和HpSA法诊断儿童Hp感染的结果比较 （略）
3 讨论
Hp是一种定植于胃内的弯曲菌，可以在黏膜表面黏附、定植和繁殖生长，进而破坏胃黏膜，产生致病作用，并可引发慢性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关性淋巴组织恶性淋巴瘤、胃癌等相关疾病，目前WHO已将其纳入第一类致癌因子［4］。流行病学调查显示，我国无症状人群中幽门螺杆菌感染率约为50%~70%，3~12岁儿童中可高达40%~50%。儿童感染后症状主要表现为腹泻、发热、恶心、呕吐、反复上腹痛、脐周痛等［５］。幽门螺杆菌主要通过口-口、粪-口及医源性途径传播。有报道家长感染Hp其子女感染危险增加2倍多［6］。而且汉城国立大学医学院临床研究所研究人员利用 ELISA方法进行了753名儿童的Hp血清筛选，并对36名Hp血清学检测结果阳性的儿童和72名对照用放射免疫学方法测定铁蛋白水平，结果显示，Hp血清学检测结果阳性的儿童缺铁患病率显著高于对照（13.9%对2.8%），因此及时检测并根除Hp对儿童的健康至关重要。
目前检测诊断Hp感染有许多方法，如快速尿素酶试验、细菌培养、组织学检查、血清学、呼气试验、体外基因扩增等方法，其中前三项需要做胃镜，部分人难以接受，特别不适合儿童。而血清学方法检查有较多假阴性和假阳性，不能诊断现症感染，并且由于在根除Hp后血抗体滴度下降缓慢，因此也不能判断Hp是否根除，目前多用于流行病学调查［7］。13C、14C-尿素呼气试验虽然可准确诊断Hp感染，但14C-尿素呼气试验有一定的放射性危害，从而影响了在临床上的使用，尤其禁止用于儿童和孕妇。13C-尿素呼气试验无放射性，对人体和环境都没有危害［8］，但该方法需要特殊的大型仪器，而且试剂需进口，价格较高，患者经济上无法承受，因而该方法使用受到限制，不利于在临床上广泛推广。而且对于婴幼儿以及有精神障碍的患者，由于他们不能很好的配合，13C-尿素呼气试验对他们也是不适合的。因此，临床上需要一种特别适合检测儿童Hp的方法，并且该方法要求操作简单、安全可靠、价格便宜的非侵入性Hp检测方法。
近年来有刚开始用于临床的粪便抗原免疫法，这是一种较有前途的诊断Hp的非侵入性方法［9，10］。由于Hp定居在胃黏膜上皮表面，可随着胃黏膜上皮更新脱落，Hp也随之脱落，并通过胃肠道从粪便排出，因此可采用酶联免疫双抗体夹心法进行检测。目前细菌培养是诊断Hp感染的金标准。我们应用HpSA法检测了78例儿童的粪便标本，并与细菌培养结果相比较，结果表明78例儿童患者中Hp感染的阳性率为48.7%，其敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为94.6%、92.7%、92.1%、95.0%，准确性为93.6%。HpSA法检测结果与细菌培养结果比较敏感性、特异性、准确性，两者差异无显著性（P>0.05）。有研究人员采用HpSA方法检测了儿童的粪便标本，其结果与本结果相近，其他文献也都得到了类似的结果。
我们的研究表明，HpSA法是一种可靠的检测Hp感染的非侵入性方法。该方法与其他方法相比，具有快速、无痛、无创伤，特异性及敏感性较高，结果可靠，且不需要昂贵的仪器和特殊的技术，操作简单易行，价格低廉，安全准确，并且标本极易获得，不受任何年龄、性别和疾病的限制，特别适合不宜胃镜检查的儿童患者。而且该方法没有窗口期，可反映患儿现症感染情况，能及时为临床治疗提供准确的数据，以清除Hp感染阳性儿童体内的细菌。并可用于患儿Hp感染治疗后复查，判断疗效，还可以大规模进行流行病学调查。
综上所述，HpSA方法是一种很有前途的诊断儿童Hp感染的非侵入性方法，它具有高度的敏感性、特异性，将来可广泛用于临床。但对其他人群的临床应用还有待于更多病例的证明。
【参考文献】
1 Warren JR,Marshll B,Normrre L,et al.Unidentified curved bacili on gastric epithelium in active chronic gastritis.Lancet,1983,2:1273.
2 刘厚钰.幽门螺杆菌感染检测的选择.中华消化杂志，1998，18：259.
3 胡伏莲，周殿元.幽门螺杆菌感染的基础与临床（修订版），第2版.北京：中国科学技术出版社，2001，240.
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5 项立，朱松杰,唐沂.健康学龄儿童幽门螺杆菌感染状况初探.中国儿童保健杂志，2001，9（1）：23-27.
6 Rothenbacher D,Winkler M,Gonser T,et al.Role of infected parents in transmission of helicobacter pylori to their children.Pediatr Infect Dis J,2002,21:674.
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8 立英，董声焕，张艳玲，等.C呼吸试验对儿童幽门螺杆菌感染的诊断价值.中华儿科杂志，2001，39（12）：743-746.
9 Agha-Amiri K,Peitz U,Mainz D,et al.A novel immunoassay based on monoclonal antibodies for the detection of Helicobacter pylori antigens in human stool.Gastroenterol,2001,39:555-560.
10 Aksoy DY,Aybar M,Ozaslan E,et al.Evaluation of the Helicobacter pylori stool antigens test (HpSA) for the detection of Helicobacter pylori infection and comparison with other methods.Hepatogastroenterology,2003,50:1047-1049.
作者单位： 210029 江苏南京，南京康爱医院
(编辑：乔 晓)