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【摘要】 目的 观察骨髓单个核细胞Coombs分型试验对全血细胞减少症的临床意义。方法 对51例全血细胞减少症患者进行骨髓单个核细胞Coombs分型试验检测，骨髓单个核细胞Coombs分型试验阳性患者给予泼尼松或加用环孢素A治疗。结果 51例血细胞减少患者，骨髓单个核细胞Coombs分型试验阳性40例，阴性11例。阳性患者中，单纯IgG阳性16例，单纯C3阳性4例，IgG＋C3阳性4例，单纯IgM阳性4例，IgG＋IgA阳性4例，抗IgG＋IgM阳性8例。泼尼松或加用环孢素A治疗有效率87.5%。结论 骨髓单个核细胞Coombs分型试验对血细胞减少症患者的鉴别诊断和指导治疗有重要的作用。
【关键词】 血细胞减少症；骨髓单个核细胞；抗人球蛋白试验；免疫治疗
Clinical significance of Coombs test of bone marrow mononuclear cells in pancytopenia
YUAN Li-ya,RONG Ji-ping,CHEN Guo-an,et al.
Department of Hematology,Jiangxi Institute of Medical Science,Nanchang 330006，China
【Abstract】 Objective To investigate the clinical significance of direct antiglobin reaction(Coombs test) of bone marrow mononuclear cells(BMMNC) in pancytopenia.Methods 51 patients with pancytopenia were analyzed by using BMMNC-Coombs test.Prednisone/prednisone and cyclosporin were administered for positive patients of BMMNC-Coombs test.Results 40 patients with 51 uncertain diagnostic pancytopenia showed a positive BMMNC-Coombs test.In 40 positive cases,IgG autoantibody accounted for 16，C3 4，IgG＋C3 4，IgM 4，IgG＋IgA 4 and IgG＋IgM 8 cases respectively.The effective rate of prednisone/prednisone and cyclosporin is 87.5%.Conclusion Coombs test of bone marrow mononuclear cells plays a important role in differentiated diagnosis and guided treatment for pancytopenia.
【Key words】 pancytopenia;bone marrow mononuclear cells;Coombs test; immunotherapy
应用抗人球蛋白试验(Coombs试验)的原理和方法,以骨髓单个核细胞悬液取代外周血红细胞悬液做Coombs分型试验,结果发现,一部分外周血经典Coombs分型试验阴性的血细胞减少症患者骨髓单个核细胞Coombs分型试验阳性［1］。笔者用同样的方法,对51例诊断为Coombs试验阴性的血细胞减少症患者进行骨髓单个核细胞Coombs分型试验检测,现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 2003年1月～2005年9月入院时诊断不明的血细胞减少症51例，所有患者外周血红细胞悬液Coombs试验阴性，男17例，女34例；年龄13～68岁，中位年龄37.2岁。
1.2 骨髓单个核细胞Coombs分型试验方法
1.2.1 试剂 抗人球蛋白试剂和淋巴细胞分离液均购自中国医学科学院血液病研究所，特异性羊抗人IgG血清、抗人C3血清、抗IgM血清、抗IgA血清用生理盐水稀释成适合浓度的工作液。
1.2.2 骨髓单个核细胞悬液制备 取肝素抗凝骨髓4ml，用3倍生理盐水稀释混匀，按淋巴细胞分离液与稀释细胞悬液1∶1加入分离试管中，置于低温低速离心机离心（2000r/min，30min）分离单个核细胞，然后加入生理盐水5ml洗涤，离心（1500r/min,10min），弃上清液，重复洗涤3次，用生理盐水配置成5×106/ml的细胞悬液待用。
1.2.3 结果判定 在玻璃板上加工作液各10μl，对照组加生理盐水10μl，然后各加入10μl配制好的细胞悬液,混匀后将玻璃板放入饱和湿度盒中,将盒置37℃恒温水浴箱中温育30min后,在光学显微镜下观察结果。阳性结果判断按经典Coombs试验常规［2，3］进行。
1.3 药物治疗 骨髓单个核细胞Coombs分型试验阳性患者均接受泼尼松0.5mg/(kg·d）治疗，部分加用环孢素A 2mg/(kg·d）治疗。治疗过程中如血红蛋白恢复正常,可将泼尼松或环孢素A逐渐减量。
1.4 疗效判断标准 （1）完全缓解:临床症状消失,红细胞数、血红蛋白量、网织红细胞百分率均在正常范围,血清胆红素测定在正常范围,骨髓单个核细胞Coombs分型试验转为阴性。（2）部分缓解:临床症状缓解,血红蛋白量比治疗前有所升高，骨髓单个核细胞Coombs分型试验阴性或仍为阳性,效价较治疗前降低。（3）无明显疗效:治疗后仍有不同程度的贫血和溶血症状,实验室检查结果未能达到部分缓解标准者。
2 结果
2.1 骨髓单个核细胞Coombs分型试验结果 51例血细胞减少患者，骨髓单个核细胞Coombs分型试验阳性40例，阴性11例。阳性患者中，单纯IgG阳性16例，单纯C3阳性4例，IgG＋C3阳性4例，单纯IgM阳性4例，IgG＋IgA阳性4例，IgG＋IgM阳性8例。
2.2 治疗效果 40例阳性患者治疗后,1周左右血红蛋白开始上升,完全缓解25例，其中15例患者治疗1个月血红蛋白恢复至正常，10例伴白细胞减少者1个月后白细胞数达正常范围。部分缓解10例，无明显疗效5例，总有效率87.5%。
3 讨论
在临床工作中能观察到一组表现为血细胞减少（或一系、二系细胞减少）患者，常规检查不能确诊为哪一类贫血，临床医师对此类患者诊断十分困难。自从和虹、邵宗鸿等提出免疫相关性全血细胞减少症（immunorelated pancytopenia,IRP）以来，采用骨髓单个核细胞Coombs分型试验是确诊IRP的重要依据［4］。本组51例入院时诊断不明的血细胞减少患者，骨髓单个核细胞Coombs分型试验阳性达40例，阳性者采用肾上腺皮质激素及环孢素A治疗取得了明显的治疗效果，进一步证明此类患者是由于自身抗体作用于骨髓内未成熟的造血细胞而导致无效造血。因此临床上对不易诊断的血细胞减少患者，应考虑进行骨髓单个核细胞Coombs分型试验，有利于明确诊断和针对性治疗。此外，骨髓单个核细胞Coombs分型试验方法简单易行，适合于基层医院开展。
值得注意的是本组骨髓单个核细胞Coombs分型试验阳性病例中，10例患者采用免疫抑制剂治疗只是取得了部分缓解。随访这些患者发现其中5例是因为在使用免疫抑制剂过程中时用时停，或者取得部分疗效后自行停药。因此，对于骨髓单个核细胞Coombs分型试验阳性的血细胞减少患者，坚持正规、长期的治疗十分重要，否则达不到治疗效果或病情易于复发。另外5例患者随访5～10个月后出现明显的骨髓增生异常综合征（MDS）的特征。MDS伴溶血性贫血已有报道［5］,但此5例患者入院时外周血红细胞Coombs试验为阴性，骨髓病态造血不明显，而骨髓单个核细胞Coombs分型试验阳性。其原因可能是MDS患者早期造血细胞病变的存在已导致自身免疫功能紊乱，也可能是机体对早期病变的造血细胞视为异己予以排斥的一种保护性反应，其详细机制有待于今后进一步研究。
【参考文献】
1 和虹,邵宗鸿,曹增，等.骨髓单个核细胞抗人球蛋白分型试验.中华血液学杂志,2000，21(10):550-551.
2 李家增,王鸿利,韩忠朝.血液实验学.上海:上海科学技术出版社,1997，227-228.
3 王永才.血液病确诊化验诊断.大连:大连出版社,1997，155-160.
4 和虹，邵宗鸿，刘鸿，等.与异常免疫相关的全血细胞减少症.中华血液学杂志，2001,22(2):79-82.
5 Pendry K, Harrison C, Geary CG. Myelodysplasia presenting as autoimmune haemolytic anaemia. Br J Haematol,1991,79(1):133-134.
（编辑：乔 晓）
*基金项目：江西省卫生厅资助项目（编号：2003165）
作者单位： 330006 江西南昌，江西省医学科学研究所血液学研究室
江西南昌，南昌大学第一附属医院血液科