点击显示 收起
【摘要】 目的 研究弓形虫感染对卵巢功能的影响。方法 将雌性小鼠随机分为实验组和对照组，每组各30例，实验组在雌性小鼠感染弓形虫后第45、90天的发情间期采血，对照组也在相应的时期采血。采用放射免疫法测定血清中雌二醇（E2）含量，并于完成两次采血后取两组小鼠卵巢和脑组织送病理检查。结果 实验组45天时血清E2为（12.37±5.56）pg/ml，90天时为（7.98±4.59）pg/ml；对照组45天时血清E2为（10.99±8.71）pg/ml，90天为（10.85±5.06）pg/ml；实验组90天时E2水平下降，与45天时及对照组比较，差异均有显著性（P＜0.05）。实验组小鼠脑组织见慢性炎症改变及弓形虫包囊体；卵巢呈炎性改变；对照组小鼠脑组织和卵巢未见异常。结论 弓形虫感染可以导致小鼠卵巢功能下降。
【关键词】 弓形虫；卵巢疾病
Effects of toxoplasma infection on ovarian function in mice
ZHENG En-lan,LUO Ruo-yu.Department of Obstetrics and Gynecology,The 2nd People's Hospital,Xinzhou District,Wuhan 430415,China
【Abstract】 Objective To study the effects of toxoplasma infection on ovarian function in Kunming female mice.Methods The Kunming female mice were devided to two groups （each n=30）:experiment group were infected with AH strain of toxoplasma,and control group were not infected with AH strain of toxoplasma.After 45 days and 90 days,the blood were collected in the estrum interphase,and estrogen in serum were detected by radioimmunoassay.The histology of the brain and ovary were observed by microscope.Results The level of estrogen in serum of experiment group was （12.37±5.56）pg/ml at 45 days,and （7.98±4.59）pg/ml at 90 days;The level of estrogen in serum of not infected group was （10.99±8.71）pg/ml at 45 days,and （10.85±5.06）pg/ml at 90 days.The level of estrogen in serum of experiment group at 90 days was reduced significantly compared with the level at 45 days and control group（P＜0.05）.The histology of the brain was phlogistic change and found Toxoplasma cysts body,and histology of the ovary was phlogistic change in experiment group;the histology of the brain and ovary in control group was not found abnormal.Conclusion The infection of toxoplasma possibly reduced the ovarian function in KM female mice.
【Key words】 toxoplasma;ovary disease
弓形虫是一种机会性致病的寄生虫，对人类的危害日益受到重视。尤其是对孕妇、艾滋病患者、器官移植使用免疫抑制剂等部分人群。弓形虫可寄生于成熟的红细胞以外的所有有核细胞，引起多器官的损害，如脑、心、肺、脾、肾、肌肉等。本实验通过雌性昆明小鼠感染弓形虫AH株后检测其雌激素的水平，并对小鼠的卵巢、脑组织行病理检查，研究弓形虫对卵巢功能的影响。现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物与虫株来源 实验动物为SPF级雌性昆明种小鼠，体重30~37g，性成熟，共60只，均由湖北省疾病预防控制中心医学实验动物室提供。动物饲养温度为17℃~24℃，湿度为65%~80%。虫株为弓形虫AH株，由安徽医科大学引进。
1.2 实验分组 将雌性小鼠随机分为实验组和对照组，每组各30只。
1.3 实验方法
1.3.1 动物模型的建立 将感染了弓形虫AH株并已发病的昆明鼠用乙醚麻醉处死，75%酒精行小鼠头部消毒，取出脑组织置碾钵内用剪刀剪碎加生理盐水研磨成浆液，按青霉素500u/ml、链霉素500mg/ml浓度加入双抗，取样计数，以每只0.8ml（约含包囊48~50个）浆液注入实验组雌性小鼠腹腔内。
1.3.2 血标本的收集 实验组：所有小鼠分别于感染后45、90天行阴道涂片，检查脱落细胞，确认为发情间期后，行眼内眦采血。对照组：将生理盐水0.8ml腹腔注射入对照组雌性小鼠后，分笼喂养。分别于注射生理盐水后45、90天行阴道涂片，检查脱落细胞，确认为发情间期后，行眼内眦采血。完成2次采血（90天）后将两组小鼠即刻处死，取脑组织和卵巢送病检。
1.3.3 雌激素的测定 将采集的血标本置于无菌促凝管中，在4℃条件下以3000r/min离心15min，吸取上层血清于-20℃冰箱保存。采用放射免疫法成批测定血清中的E2含量，试剂盒为天津九鼎医学生物工程有限公司生产的雌二醇放射免疫分析药盒，严格按照试剂盒说明书进行操作。采用中国中佳光电仪器公司生产的GC-1200r放射免疫计数仪读数，相对标准偏差（CV%）为5%，测定时采用平行加样。
1.4 统计学方法 采用SPSS 10.0统计软件进行统计学处理，两组间进行比较，采用方差齐性检验及t检验。
2 结果
2.1 E2值测定 感染后第45天实验组雌性小鼠因弓形虫感染发病，于第9天开始死亡，到45天采血时共死亡3只，采血时操作不慎死亡1只；对照组雌性小鼠采血时操作不慎死亡3只。90天时实验组雌性小鼠因弓形虫感染，于感染后64天死亡1只，67天时死亡2只，采血时死亡1只。两组雌性小鼠血清中的E2值见表1。表1 两组雌性小鼠血清中E2浓度 其中，实验组90天时E2值较45天时降低，两者比较P=0.048，较对照组90天时也降低，两者比较P＝0.046均有统计学差异；而实验组45天、对照组45天及90天时E2值之间两两比较，均无统计学差异（P＞0.05）。
2.2 病理检查 实验组小鼠卵巢肿大、充血，镜下见卵巢组织表面有不同程度的纤维组织增生，表面上皮细胞下陷，卵泡生长受限，数目减少，很少见到成熟卵泡，卵巢内血管扩张、充血，其组织内见有不同程度的中性粒细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润（图1）；脑组织肉眼观察见脑膜无光泽，血管扩张充血，大脑、小脑和脑干均见有不同程度的水肿；光学显微镜下观察，在脑膜、大脑半球、小脑和脑干均有不同程度的血管扩张，淋巴细胞浸润和水肿，脑膜、脑白质内有较多的弓形虫包囊体，神经细胞变性，胶质细胞轻度增生（图2、3），丘脑细胞可见灶状炎性细胞浸润，主要为淋巴细胞和单核细胞，脑组织轻度水肿（图4）。对照组小鼠卵巢表面光滑，镜下组织结构清楚，可见较多成熟卵泡，无表面组织增厚和炎性细胞浸润；脑组织正常，有清楚的脑沟和脑回，脑膜较光滑，镜下细胞结构正常，未见炎性细胞浸润。
3 讨论
正常的生殖内分泌功能有赖于下丘脑、垂体、卵巢之间的平衡反馈和功能调节，并且这种反馈和调节受大脑皮质的影响。因此，大脑皮质、下丘脑的结构和功能改变，即下丘脑-垂体-卵巢轴功能异常，均会导致反馈和调节功能失调。而弓形虫是一种专性细胞内寄生虫，其引起组织损伤的机制有多种学说［1］：（1）弓形虫虫体繁殖引起宿主细胞的机械损伤；（2）弓形虫引起细胞介导免疫反应损伤；（3）虫体及其代谢产物所致的超敏反应；（4）弓形虫虫体毒素及溶解酶释放引起组织损伤，组织损伤后功能也发生相应的改变。本研究发现，小鼠在感染弓形虫AH株后90天时脑组织病理检查见有炎性改变、组织细胞坏死及弓形虫包囊。因此，弓形虫感染后可以引起大脑皮质、下丘脑的结构和功能改变，使其反馈和调节功能失调，从而导致卵巢功能的下降。
在实验中还发现，雌性小鼠弓形虫感染90天后卵巢呈炎性改变，致卵泡生长受限，数目减少，很少见到成熟卵泡，说明卵巢组织中分泌性激素的卵泡的发育和数目出现异常。并且，卵巢功能的内分泌检查也显示，小鼠在感染弓形虫AH株后45天，即急性感染期时体内雌激素水平与对照组无明显差异，但90天时即进入慢性期，雌激素水平下降。
总之，由于弓形虫感染使从中枢神经内分泌结构和功能失调，下丘脑-垂体-卵巢轴不能有效地促使卵巢发挥正常功能。同时，卵巢在弓形虫感染后由于自身炎性反应，卵巢细胞成熟受限，最终造成雌激素分泌减少，卵巢功能不足，导致感染小鼠的不孕或非正常妊娠［2］。
（本文图片见封三）
【参考文献】
1 胡建辉，王英，唐超.人弓形虫病临床研究的进展.医学综述，1996，2（6）：306-307.
2 鲁敏，杨连第，陈昌源,等.急性弓形虫感染所致昆明鼠不孕的实验研究.中国人兽共患病杂志，2004，20（10）：836-838.
作者单位： 1 430415 湖北武汉，武汉市新洲区第二人民医院妇产科
2 430060 湖北武汉，武汉大学人民医院妇产科
（编辑：田 雨）