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【摘要】 目的 建立克银丸中没食子酸含量的测定方法。方法 采用反相高效液相色谱法,用Damonsil-C18(250mm×4.6mm,5μ)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸(8:92)为流动相,流速0.8ml/min,测定波长274nm,柱温35℃。结果 在该条件下,没食子酸在0.1140~0.5700μg范围内呈良好线性关系(r=1.0000),平均加样回收率为99.76%,RSD为0.5%(n=5)。结论 本方法操作简便,重现性好,可作为该制剂的含量测定方法。
【关键词】 反相高效液相色谱法;克银丸;没食子酸
克银丸是由土茯苓、白鲜皮、北豆根、拳参四味中药材组成的复方制剂,有清热解毒、祛风止痒的功能。拳参是本方中主药之一,具有清热解毒、消肿止痛的功效。原质量标准[1]没有含量测定方法,为了更有效地控制该药的内在质量,选用高效液相色谱法[2]测定本处方拳参药材中没食子酸的含量,方法操作简便、重现性好,可作为控制该药品内在质量的定量指标。
1 仪器与试药
岛津LC-10AT高效液相色谱仪,SPD-10AVP检测器;sartorius电子天平;KQ-100型超声波清洗器;甲醇为色谱纯试剂,其他试剂为分析纯;没食子酸对照品(批号为11083-200302,供含量测定用,购自中国药品生物制品检定所);克银丸(白山市某药业生产)。
2 方法
2.1 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品适量,加甲醇制成每1ml含28.5μg的溶液。
2.2 供试品溶液的制备 取本品50粒,研细,取1g,精密称定,置100ml具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30min,冷却,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,滤过,滤液作为供试品溶液。
2.3 色谱条件
2.3.1 测定波长的选择 取没食子酸对照品溶液,在200~400nm波长处进行扫描,结果在274nm波长处具有最大吸收,故选择274nm作为检测波长。
2.3.2 系统适应性试验 色谱柱:Diamansil C18(250mm×4.6mm,5μl);流动相:乙腈-0.1%磷酸(8:92);柱温35℃;流速:0.8ml/min;测定波长:274nm。根据上述色谱条件,取供试品与对照品溶液,进样量10μl,理论塔板数,按没食子酸峰计算应不得低于3000(N=6435,计算机给出)。
2.4 方法学考察
2.4.1 标准曲线制备 精密吸取对照品溶液4、8、12、16、20μl,分别注入液相色谱仪。以峰面积为纵坐标,进样量为横坐标绘制标准曲线。测得回归方程为Y=7244.5+1860542.982X(r=1.0000)。表明没食子酸进样量在0.1140~0.5700μg内,呈良好的线性关系。
2.4.2 阴性对照试验 按供试品溶液的制备方法制成不含拳参药材的阴性对照溶液,吸取该溶液10μl,注入液相色谱仪中,在与没食子酸相应保留时间处,无干扰峰出现。
2.4.3 稳定性试验 取对照品溶液在0、5、10、15、20h,分别进样10μl,按没食子酸峰面积计,峰面积平均值为528217,RSD为0.3%,结果未发生明显变化。
2.4.4 精密度试验 取对照品溶液10μl,重复进样5次,没食子酸峰面积的平均值为525360,RSD为0.4%。测定结果表明该方法的精密度良好。
2.4.5 重现性实验 取同批号(批号:040401)的样品按供试品溶液的制备方法平行制备5份,样品和对照品溶液各进样10μl,依法测定,样品中没食子酸含量的平均值为1.46mg/g,RS为0.7%,表明本方法重现性良好。
2.4.6 回收率试验 精密称取经同法测定,已知含量的同批号(批号:040401)样品5份,每份0.5g,再分别加入精密称取的没食子酸对照品适量,按供试品溶液的制备方法处理,样品和对照品溶液各进样10μl,依法测定,计算回收率,没食子酸的平均回收率为99.76%,RSD为0.5%。表明本方法准确可信。
2.4.7 样品测定 取5批克银丸样品,按供试品溶液的制备方法制备,样品和对照品溶液各进样10μl,依法测定,每批测定2次。没食子酸的平均含量见表1。表1 样品测定结果
【参考文献】
1 卫生部药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂,第6册.北京:人民卫生出版社,1989,69.
2 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)附录.北京:化学工业出版社,1995,38-40.
作者单位: 134300 吉林白山,白山市药品检验所
(编辑:魏 冉)