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［摘要］ 目的 研究大孔树脂富集肝达康颗粒中芍药苷的工艺条件。方法 采用HPLC法测定的芍药苷含量为指标,考察了不同种大孔树脂对芍药苷的富集效果。结果 X-5型树脂对芍药苷的保留率在75%以上。结论 部分大孔树脂可用于富集肝达康颗粒中芍药苷成分。
［关键词］ 肝达康颗粒;芍药苷;大孔吸附树脂
Enrichment process of paeoniflorin from Gandakang granules with macroporous adsorption resin
QIAN Xiao-xia.Traditional Chinese Medicine Hospital,Yongzhou 425000,China
［Abstract］ Objective To study the condition for the enrichment process of paeoniflorin in Gandakang granules with macroporous adsorption resin.Methods Comparing the application of several kinds of macroporous adsorption resin in enrichment of paeoriflorin determined by HPLC as markers.Results The retention rate of X-5 is up to 75%.Conclusion Some of resins can be used to enrichment of paeoriflorin.
［Key words］ Gandakang granules;paeoriflorin;macroporous adsorption resin
肝达康颗粒由白芍、柴胡、当归等15味中药制成，白芍为君药，其主要成分为芍药苷。为达到剂量小、服量小的现代中药要求，有必要对提取物进行精制纯化。目前，大孔树脂在中草药成分的精制、分离、纯化、富集等方面的应用越来越广泛。为此，本实验以芍药苷含量为指标，考察了几种大孔树脂对肝达康颗粒中芍药苷的富集效果。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Agilent 1100 series高效液相色谱仪、DAD检测器、PhenomenexC18-ODS柱（4.6 mm×250 mm,5 μm），Rev.A.06.01软件版本；SK3300H超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；800B台式离心机。
1.2 试药 白芍、柴胡、当归等15味等中药经鉴定符合中国药典（2005年一版）有关规定；树脂型号X-5，AB－8均来自南开大学化工厂；D101大孔树脂（上海汇脂树脂厂）；芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所）；甲醇、乙醇、无水乙醇及其他试剂均为分析纯。
2 方法及结果
2.1 芍药苷含量测定方法的建立
2.1.1 色谱条件 色谱柱：C18-ODS柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）；流动相：乙腈－0.1％磷酸溶液（14∶86）；柱温：25 ℃；检测器：DAD；检测波长：230 nm；流量：1.0 ml/min。理论塔板数按芍药苷计算不少于5000，分离度大于2。
2.1.2 线性关系的考察 精密称取芍药苷对照品6.6 mg，置于50 ml容量瓶。加入无水乙醇并稀释至刻度，摇匀即得（每1 ml溶液中含芍药苷132 μg）。精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、12 μl注入高效液相色谱仪，照上述色谱条件测定峰面积。以芍药苷浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程Y=1068.39 X-5.77,r=0.9999。表明芍药苷进样量在0.264~1.584 μg范围内线性关系良好。见图1。
2.1.3 精密度考察 精密吸取芍药苷对照品8 μl，连续进样5次，芍药苷平均峰面积为1135.6142，RSD为0.21％（n=5）。见图2。
2.1.4 稳定性考察 分别于0、4、8、12 h精密吸取供试品溶液8 μl，按上述色谱条件测定峰面积积分值，结果RSD为0.34％，表明芍药苷在12 h内稳定。见图3。
2.1.5 重现性考察 取同一批白芍药材2 g，共5份。按上述条件，测定其芍药苷面积积分值，RSD为1.02％（n＝5），说明结果重现性良好。
2.1.6 回收率考察 精密称取相当于2 g白芍饮片的干膏，共5份，分别加入芍药苷对照品溶液（132 μg/ml），按照供试品溶液的制备方法进行制备，测定芍药苷的含量，平均回收率为（99.27±1.00）％，RSD为1.33％（n=5）。
2.2 过柱处理
2.2.1 药液的制备 白芍投料量为6 g。柴胡、当归等6味首提挥发油，药渣及余液与白芍等7味加水共煎2次，每次2 h，合并煎液，滤过；鳖甲加水煎煮3次，每次2 h，合并煎液，滤过；湘曲浸提3次，合并浸提液，滤过；以上药液合并滤过浓缩至300 ml，即得。
2.2.2 树脂的预处理［1］ （1）先用乙醇在柱上流动清洗，不时检查流出的乙醇液，至乙醇液与水混合（1∶5）不呈白色浑浊，然后以大量蒸馏水洗去乙醇至无醇味；（2）用5％HCl洗脱，再用蒸馏水洗至中性；（3）用2％NaOH洗脱，再用蒸馏水洗至中性。
2.2.3 过柱 精密吸取25 ml药液［2］，分别通过大孔吸附树脂（柱长16 cm，内径1.5 cm，装高12 cm，床体积为21.1 cm），流速为每分钟约1~2 cm，然后用50％的乙醇150 ml洗脱，收集洗脱液。适当浓缩后，放冷转至25 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得过柱液。
2.3 测定
2.3.1 总固形物的测定 取已处理好的大孔树脂，吸取肝达康提取液25 ml上柱，按上述条件洗脱，收集洗脱液，置已称定重量的洁净干燥烧杯内，置水浴中蒸干，取出，放在105 ℃烘箱中烘1 h，取出，放干燥箱内冷却30 min，称定重量，计算总固形物含量。结果见表1。表1 过大孔吸附树脂前后总固形物的测定 从表1可知，通过大孔树脂吸附柱后，每克生药的总固形物较未过柱大幅度下降，尤其是X-5和D101型号树脂的精制纯化效果更为明显，可以达到减少服用剂量的目的。
2.3.2 芍药苷含量的测定 供试品溶液的制备:分别精密吸取各种树脂过柱液1 ml，转至10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心10 min，取出，取上清液作为供试品溶液。测定:取对照品溶液和供试品溶液20 ml，注入高效液相色谱仪，测定积分值。结果见表2。表2 过大孔吸附树脂前后芍药苷含量的测定 从表2结果可知：X-5、AB-8两种树脂对芍药苷的吸附较好，其中X-5吸附率超过75％；D101较差。前两种符合精制要求。综合考察总固形物的保留率和芍药苷的收得率，选择X-5用于精制纯化肝达康颗粒。
3 讨论
本试验比较了3种大孔吸附树脂对肝达康颗粒提取液中芍药苷成分的富集效果，最后选用X-5型大孔树脂精制纯化。采用此工艺能较大程度的富集芍药苷有效成分，其含量可以达到质量标准的要求，可以考虑进行工业化大生产。
大孔树脂用于中药精制纯化的工艺参数包括上样量的选择，洗脱剂浓度的筛选，洗脱剂用量的确定等方面。为更加全面地掌握X-5型大孔树脂用于肝达康颗粒的精制工艺，有必要在下阶段进一步研究。
［参考文献］
1 陈延清.用七种不同大孔吸附树脂精制乐脉胶囊的研究.中成药，2001，23（8）：553-555.
2 汤建成，王溶溶，冯瑛.大孔树脂富集坤怡宁颗粒中芍药苷的工艺研究.中成药，2005，27（6）：640-642.
作者单位： 425000 湖南永州，永州市中医院 （编辑：于秋山）