C-MYC、突变型P53蛋白在小细胞肺癌中的表达及意义

      ［摘要］  目的  研究C-MYC、突变型P53蛋白在小细胞肺癌（SCLC）中的表达并分析其与SCLC临床病理学特征及预后之间的关系。方法  用免疫组化的方法检测30例原发灶及10例正常肺组织中C-MYC、突变型P53蛋白的表达水平，按阳性表达率进行χ2分析。结果  SCLC中C-MYC、突变型P53蛋白表达显著高于正常肺组织。两者阳性表达都与患者的生存期及SCLC分化程度呈负相关（P<0.05），与SCLC的淋巴结转移呈正相关（P<0.05），与患者的年龄、肿瘤大小无关（P>0.05）。C-MYC 蛋白表达与肿瘤p-TNM分期呈正相关（P<0.05），而突变型P53蛋白表达与肿瘤p-TNM分期无相关性（P>0.05）。结论  SCLC存在C-MYC、突变型P53蛋白过度表达，提示它们在SCLC发生、发展过程中可能起着重要作用。

    ［关键词］  C-MYC蛋白；P53蛋白；小细胞肺癌；免疫组织化学

       Expression of C-MYC and P53 protein in small cell lung cancer and significance

    CHEN Kai，ZHANG Wei,YANG Qing.Department of Colorectal and General Surgery,The People’s Hospital of Dongguan,Guangdong 523018,China

    ［Abstract］  Objective  This study observed the expression of C-MYC and mutated P53 protein in SCLC,in order to analyse the relationship between their expression and prognosis of the patients as well as clinicpathological characteristic.Methods  The immunohistochemical staining method,strepatavidin-peroxidase（S-P）method was used to detect the C-MYC and mutated P53 protein in 30 cases of SCLC.10 normal lung tissues were contrasted.The positive expression was analyzed with χ2 test.Results  The expression level of the C-MYC and mutated P53 in cancer tissues were significantly higher than that in the normal lung tissues.Their expression were negatively correlated with survival time and differentiation degree （P<0.05）,positive correlated with lymph nodes metastasis.They were not correlated with age and the size of tumor （P>0.05）.There was a positive correlation between C-MYC protein and p-TNM stages of the cancer （P<0.05）,but mutated P53 protein was not correlated with p-TNM （P>0.05）.Conclusion  There are the overexpression of C-MYC and mutated P53 protein in SCLC,which suggests that they may play an important role in the occurrence development of SCLC.

    ［Key words］     C-MYC protein;P53 protein;SCLC;immunohistochemistry

    目前人们对非小细胞中的P53基因研究较多，而对小细胞肺癌中P53基因、C-MYC基因的表达及两者之间关系的相关性研究，国内外文献仍较少。本研究应用免疫组化技术对30例小细胞肺癌组织突变型P53、C-MYC蛋白的表达水平进行分析，以探讨突变型P53及C-MYC蛋白表达水平与小细胞肺癌发生发展的关系，并用SPSS软件包进行检验两种蛋白的表达水平与小细胞肺癌临床病理学特征及预后之间的关系。

    1  资料与方法

    1.1  一般资料  收集我院1989～2005年手术切除的30例小细胞肺癌标本。男27例，女3例；年龄25～70岁，平均51.2岁；肿瘤直径＞3 cm的20例，肿瘤≤3 cm的10例；病理分期Ⅰ期10例，Ⅱ期17例，Ⅲ期3例；无淋巴结转移10例，有淋巴结转移20例；低分化19例，中高分化11例；所有患者术后均进行1～6次化疗。对照标本为非肿瘤手术时收集的正常肺组织。

    1.2  主要试剂  鼠抗人C-MYC；突变型P53单克隆抗体；生物素标记L的羊抗鼠第二抗体IgG；DAB显色剂均购自武汉博士德试剂公司。

    1.3  方法  10%中性甲醛固定，石蜡包埋，石蜡块连续5 μm切片，采用免疫组化SP法对C-MYC，突变型P53蛋白进行检测，严格按试剂盒推荐方法进行。

    1.4  结果判断  每张切片均在400倍的显微镜下观察5个视野，每个视野100个细胞，然后计算阳性细胞百分率，C-MYC主要表现为细胞核棕黄色显色，少数细胞浆显色；突变型P53阳性表现为细胞核棕黄色显色。阴性（-）：阳性细胞数<10%；阳性（+）：阳性细胞数≥10%［1］。数据采用χ2检验，P<0.05表示有相关或差异有显著性。

    2  结果

    2.1  小细胞肺癌和正常肺组织中C-MYC、P53蛋白的表达  见表1。 表1  小细胞肺癌和正常肺组织中C-MYC、P53蛋白的表达（略）

    2.2  C-MYC及P53蛋白表达与SCLC临床病理特征的关系  见表2。表2  C-MYC及P53蛋白表达与SCLC临床病理特征的关系（略）

    3  讨论

    近年来，肺癌的发病率呈不断上升的趋势，成为威胁人类健康最常见的恶性肿瘤之一。大量实验研究表明：P53基因的突变或缺失与肺癌的发生有密切关系［2］，人类SCLC中P53基因突变是最常见的基因突变之一，P53蛋白是突变型P53基因产物，它的聚集与许多恶性肿瘤发生关系密切。P53蛋白过度表达与临床肺癌病理学特征的相关性己有较多的报道，大多数的研究结果认为P53过度表达预示着肺癌患者的侵袭力强、预后差［3］。本实验研究对30例SCLC的石蜡标本切片进行P53基因突变免疫组化染色，结果显示20例阳性（20/30），突变型P53蛋白阳性率达66.67%，其与患者的年龄、肿瘤大小、p-TNM分期无明显相关性，而在有淋巴结转移及低分化程度的病例中表达较高，突变型P53蛋白的高表达可能预示着该肿瘤恶性度高、转移早、预后差。本组研究未观察到突变型P53与p-TNM分期的关系，可能与SCLC的病程关系不明显。

    近来研究表明C-MYC基因同时参与细胞凋亡的调节，在胸部肿瘤形成过程中处于重要地位［4］。几乎所有的SCLC患者存在C-MYC癌基因的过量表达，尤其是曾接受化疗的患者［5］。C-MYC基因的过度表达的SCLC患者复发率高、生存期短［6］。本实验研究了C-MYC蛋白在SCLC中的表达情况及其与临床病理学特征和预后的关系。结果显示：14例表达阳性（14/30），阳性率为46.67%，C-MYC蛋白过度表达在分化差的、有淋巴结转移及p-TNM晚期的病例中表现突出，且与患者的生存期呈负相关，提示C-MYC蛋白过度表达是SCLC较晚期分子事件，从而可望为评估预后提供分子水平依据。

    C-MYC癌基因的过量表达和P53突变是SCLC发展中的常见事件。本研究发现两种蛋白的表达具有一定的相关性，在同一组织中，突变型P53、C-MYC可同时有高表达。两种蛋白均被检出异常者不仅复发率高，而且多出现在恶性程度高的组织类型中，表明P53、C-MYC基因间可能具有协同作用。本实验患者因为均接受1～6次化疗，故尚不能排除是否化疗对突变型P53、C-MYC 蛋白表达有影响，是否经过化疗后未被杀死的瘤细胞发生了某种变异而获得了更加恶性的表型。

    本实验从免疫组化方面研究了突变型P53、 C-MYC蛋白的表达，发现两种蛋白在SCLC中均有较高表达。因此突变型P53、 C-MYC蛋白的高表达，可作为诊断SCLC的重要参考指标之一。两种蛋白与SCLC的生物学行为及手术预后有重要关系，有希望作为一项较好的判断SCLC预后的指标。SCLC的高侵袭力、高转移力和预后差与突变型P53、 C-MYC蛋白高表达的相互关系，需要积累更多的病历资料来确证。而阐明突变型P53、C-MYC的生物学特征和作用机制对于SCLC的诊断、生物学行为的判断、发生学及治疗等都具有重要意义，这方面的工作尚待进一步研究。

    ［参考文献］

    1  Stefanaki K,Rontogiannis D. Immunohistochemical detection of bcl2,P53,mdm2,and PZl wafl protein in smallcell lung carcinomas. Anticancer Res,1998,18:1689-1696.

    2  周清华.肺癌基础研究与临床治疗进展.北京:科学出版社,1999,181-211.

    3  Velculescu VE,ElDeiry WS. Biologic and clinical importance of the P53 tumor suppressor gene. Clin Chen,1999,42:858.

    4  Barr LF,Campbell SE.Protein kinase C-beta 2 inhibits cycling and decreases C-MYC-apoptosis in small cell lung cancer cells. Cell GrowthDiffer,1991,8（4）:381-392.

    5  Van Waardenburg RC,Meijer C,Burqer H,et al. Effects of C-MYC oncogene modulation on differentiation of human small cell lung carcinoma celllines.AnticancerRes,2000,18（lA）:91-95.

    6  Gasperi Campani A,Roncuzzi L.Chromosomal alterations,biological featuresand in vitro chemosensitivity of SCLC-Rl,a new cellline from human metastatic small cell lung carcinoma. Eur J Cancer,2002,34（5）:724-730.

    作者单位： 523018 广东东莞，东莞市人民医院普外肛肠科

  （编辑：卫  东）