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首页医源资料库在线期刊中华现代临床医学杂志2008年第6卷第12期

妇宁洗液的质量标准研究

来源:《中华现代临床医学杂志》
摘要:方法采用薄层色谱法对妇宁洗液中的苦参、蛇床子、连翘、盐酸小檗碱进行定性鉴别,并用高效液相色谱法对制剂中的蛇床子所含成分蛇床子素进行了含量测定。结果薄层色谱法色谱斑点清晰,蛇床子素进样量在0。蛇床子素。高效液相色谱法StudyonqualitycontrolofFuninglotionJIAOZhi-hai,YUANLi-ping。...

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【摘要】  目的 建立妇宁洗液的质量标准。方法 采用薄层色谱法对妇宁洗液中的苦参、蛇床子、连翘、盐酸小檗碱进行定性鉴别,并用高效液相色谱法对制剂中的蛇床子所含成分蛇床子素进行了含量测定。结果 薄层色谱法色谱斑点清晰,蛇床子素进样量在0.03848~0.3848 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999)。结论 所用方法简便准确,重现性好,为妇宁洗液质量控制提供了方法。

【关键词】  妇宁洗液;薄层鉴别;蛇床子素;高效液相色谱法

Study on quality control of Funing lotion

    JIAO Zhi-hai,YUAN Li-ping.The Third People’s Hospital Affiliated to Huaihua Medical School,   Huaihua 418000,China

    [Abstract]  Objective  To develop the quality control of Funing lotion.Methods  Radix sophorae flavescentis,Fructus cnidii,Fructus forsythiae and Berberine Hydrochloride in Funing lotion were identified by TLC. Matrine were determined for osthole’s  ingredient in the pharmaceutical preparat HPLC.Results  TLC spots were clear. Matrine showed a good linear relationship at the range of  0.03848~0.3848 μg(r=0.9999).  Conclusion  This method is sensitive, quick and accurate for the quality control of Funing lotion.

    [Key words]  Funing lotion;TLC;osthole; HPLC

    妇宁洗液是由蛇床子、苦参、百部、黄柏、连翘、黄连、蒲公英等11味中药加工制成的复方制剂,具有清热解毒,消炎除湿,止痛止痒,除臭杀虫之功效,用于真菌、滴虫引起的阴道炎、外阴瘙痒、宫颈炎,亦可用于疥癣、湿疹、皮炎、肛裂痔痛的治疗,为我院应用多年的特色制剂,为保证该制剂的内在质量,笔者采用薄层色谱法对其中的苦参、蛇床子等进行了定性鉴别,并采用高效液相色谱法对蛇床子中蛇床子素的含量测定进行了方法学研究,现报告如下。

    1  仪器与试药

    LC-20AT高效液相色谱仪,SPD-M20AVP检测器,LCsolution工作站(日本岛津);苦参碱对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号:110805-200306);蛇床子素对照品(中国药品生物制品检定所,批号:0822-200204);连翘对照药材(中国药品生物制品检定所,批号:908-8904);盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110713-200208);妇宁洗液(湖南怀化市第三人民医院,批号070928,071027,071206);甲醇、磷酸为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯。硅胶G(青岛海洋化工厂)。

    2  方法与结果

    2.1  薄层色谱鉴别  苦参取本品50 ml,加浓氨溶液3 ml,振摇,加氯仿20 ml,浸渍,分取氯仿层,水层加氯仿提取2次,每次10 ml,合并氯仿提取液,置水浴上蒸干,残渣加乙醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。另取苦参碱对照品加乙醇制成每1 ml含1 mg的溶液,作为对照品溶液;取缺苦参的阴性样品,按供试品溶液制备方法同法处理,作为阴性对照品溶液,照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ  B)试验,吸取上述三种溶液各5 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以苯-丙酮-甲醇(8∶3∶1.5)[1]为展开剂,展开,取出晾干,喷以碘化铋钾试液显色,供试品溶液色谱中,在与对照品溶液色谱相应的位置上显相同颜色的斑点,而缺苦参的阴性样品无干扰,结果见图1。

    蛇床子取本品50 ml,加乙醚提取两次(每次25 ml),合并提取液,挥干,残渣加乙醇1 ml使溶解,作为供试品溶液,另取蛇床子素对照品加乙醇制成每1 ml中含1 mg的溶液,作为对照品溶液;取缺蛇床子的阴性样品,按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ  B)试验,吸取供试品溶液15 μl,对照品溶液2 μl及阴性对照品溶液15 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以苯-醋酸乙酯(30∶1)[1]为展开剂,展开,取出晾干,置紫外光灯254 nm下检视,供试品溶液色谱中,在与对照品溶液色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点,而缺蛇床子的阴性样品无干扰,结果见图2。

    连翘取本品50 ml,用醋酸乙酯振摇提取2次,每次10 ml,合并提取液,蒸干,残渣加乙醇1 ml使溶解,滤过,滤液作为供试品溶液;另取连翘对照药材3 g,加水40 ml,置水浴中加热回流1.5 h,滤过,滤液浓缩至10 ml,同法制成对照药材溶液;取缺连翘的阴性样品,按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液;照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ  B)试验,吸取上述3种溶液各10 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇(20∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以醋酐-硫酸(20∶1)[2]溶液,在105  ℃加热10 min,放冷,置紫外光灯(254 nm)下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。而缺连翘的阴性样品无干扰,结果见图3。

    盐酸小檗碱取本品40 ml,加甲醇10 ml,加热回流40 min,滤过,滤液作为供试品溶液;另取盐酸小檗碱对照品,加甲醇制成每ml含0.5 mg的溶液作为对照品溶液;取缺黄连、黄柏的阴性样品,按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液;照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ  B)试验,吸取上述3种溶液各5 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.3)[3]为展开剂,加入双槽展开缸中,另一槽加入等体积浓氨溶液,预平衡15 min,展开8 cm,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。而缺黄连、黄柏的阴性样品无干扰,结果见图4。

    2.2  蛇床子素的含量测定

    2.2.1  色谱条件与系统适应性试验:色谱柱:Diamonsil-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:甲醇-水-磷酸(70∶30∶0.1);流速:1.0 ml/min;柱温:室温;紫外检测波长:322 nm;进样量:5 μl[1]。

    2.2.2  溶液的制备  (1)对照品溶液的制备:精密称取蛇床子素对照品12.03 mg,置25 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,再精密吸取1 ml至25 ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,制成每1 ml含蛇床子素19.25 μg的对照品溶液。(2)供试品溶液制备:精密量取本品50 ml,用乙醚提取3次,每次30 ml合并乙醚液,蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至10 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,即得[1]。(3)阴性样品溶液:按处方比例称取除蛇床子外的各药,并按标准工艺制备缺蛇床子的阴性样品溶液,按上述供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。

    2.2.3  系统适应性试验  在以上色谱条件下,取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液分别进样5 μl,所得色谱图见图5。

     由上述色谱图可见,在本试验条件下,蛇床子素的保留时间约为21.5 min;蛇床子素与相邻峰达到基线分离且分离度达到9.9;按蛇床子素计理论塔板数大于3000,阴性样品溶液无干扰。

    2.2.4  标准曲线的制备  精密吸取浓度为19.25 μg/ml的蛇床子素对照品溶液。分别进样2.0、5.0、10.0、15.0、20.0 μl,测定峰面积,以进样量(μg)为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),进行线性回归(n=5),得回归方程:Y=3.3304×106X-3.922×103,r=0.99999。结果表明蛇床子素在0.03848~0.3848 μg范围内线性关系良好。

    2.2.5  精密度试验  精密吸取浓度为19.25 μg/ml的蛇床子素对照品溶液5 μl,重复进样5次。测得蛇床子素峰面积平均值为315 612,RSD值为0.68%。

    2.2.6  重复性试验  取同一批样品(070828)5份,分别按供试品溶液制备方法制备供试品溶液,按样品含量测定方法测定,结果蛇床子素的平均含量为2.8 μg/ml,RSD值为0.98%。

    2.2.7  稳定性试验  取同一样品(070828)溶液,在0、2、4、6、8、10、12 h,分别进样5 μl,依法测定。结果蛇床子素峰面积平均值为229 655,RSD值为1.12%,12 h内稳定性良好。

    2.2.8  回收率试验  精密吸取已知含量为2.8 μg/ml的样品(批号为070928)的溶液25 ml,共9份,分别精密加入浓度为19.25 μg/ml的蛇床子素对照品溶液(2.9、2.9、2.9、3.6、3.6 、3.6 、4.3、4.3、4.3 ml),按上述方法制备供试液,测定,并计算回收率,结果见表1。

    2.2.9  样品含量测定  取3批样品,依法制备供试品溶液,分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液5 μl,注入高效液相色谱仪,测定,按外标法计算,结果见表2。表1  蛇床子素回收率表2  妇宁洗液中蛇床子素的含量

    3  讨论

    在蛇床子、连翘薄层鉴别时,根据相关文献,曾尝试在365 nm紫外线灯下检视[1],但经过试验发现,在365 nm紫外线灯下检视,斑点不清晰,而在254 nm紫外线灯下检视,则色谱斑点清晰、结果明显,故该鉴别确定在254 nm紫外线灯下检视结果。

    因处方中黄连、黄柏均含有效成分盐酸小檗碱,故以缺二者的组方同法制成阴性样品溶液,以盐酸小檗碱为对照品进行薄层鉴别,该方法斑点清晰,结果明显。

    本品中蛇床子为方中君药,用量大,成分清楚,故采用HPLC法测定该制剂中蛇床子素的含量,结果表明,HPLC法重现性好、回收率高,准确可行,可作为该制剂的定量方法。

    用HPLC法测定蛇床子素含量,文献中有多种流动相[1,3],比较了多种比例的甲醇—水—磷酸的分离效果,以甲醇—水—磷酸(70∶30∶0.1)为优,其与杂质峰分离度为9.9,保留时间适中。

【参考文献】
  1 国家药品监督管理局.国家中成药标准汇编(中成药地方标准上升国家标准部分,外科、妇科分册),2002,345-353.

2 国家药品监督管理局.国家中成药标准汇编(中成药地方标准上升国家标准部分,内科肺系一分册),2002,388-389.

3 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京:化学工业出版社,2006,214-220.


作者单位:湖南怀化,湖南省怀化医专附属怀化市第三人民医院

作者: 2009-8-24
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