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【摘要】 目的 探讨冰冻保存红细胞采用三种洗脱方法，比较其对红细胞回收率影响，为临床应用提供质量依据。方法 对（-70±5）℃保存6年的10份冰冻红细胞，解冻后采用三种洗脱方法处理红细胞，采用氰化法测定血红蛋白，并根据容量计算出洗涤前后各袋血红蛋白的总量，计算出红细胞回收率。结果 用方法一洗脱红细胞,回收率明显高于其他两种方法，方法二回收率低于标准。结论 方法一先离心法，红细胞回收率明显高于其他两种方法。
【关键词】 冰冻保存；回收率；洗脱
自1949年英国学者Polge发现了甘油的低温保护作用以来，血细胞冰冻保存技术取得了较快的发展并逐步应用于临床。在深低温状态下，细胞内的新陈代谢减慢甚至停滞（-65 ℃），血细胞可贮存较长时间。但细胞在降温、复温过程中，会对细胞造成冷冻损伤，必须加入一些保护剂或采用一些特殊的技术手段，以维护血细胞的外形和生理功能。笔者对（-70±5）℃保存6年的10份冰冻红细胞解冻后，采用三种洗脱方法处理红细胞，比较其对冰冻红细胞回收率影响，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料 CPD-A抗凝全血400 ml；红细胞冷冻保护剂：57%甘油、3%乳酸钠、0.2%磷酸氢二钠、0.03%氯化钾；三珠空袋；9%氯化钠溶液（北京博德桑特输血器材科技开发中心）；0.9%氯化钠溶液（山东齐都药业）；羟乙基淀粉40氯化钠（山东长富洁晶药业有限公司）。
1.2 仪器 无菌导管连接机（德国费森尤斯中国投资公司）；大容量离心机（德国）；平板式离心机（德国）；恒温水浴箱（苏州市医用仪器厂）。
1.3 血样的采集和处理 将无菌采集全血滤白后,离心去除上层血浆得到浓缩红细胞制剂。通过无菌导管连接浓缩红细胞制剂袋分成二份转移至三珠无菌空袋内，每单位血液加入160 ml红细胞冷冻保护液，由慢到快，逐渐提高滴速，并使血液制剂的血袋始终保持震荡状态，血袋内有玻璃珠，起搅拌作用，让甘油缓慢均匀的和红细胞混合。滴加完毕后，室温静置30 min,使甘油充分进入细胞。将甘油化的红细胞制剂平整地放入纸盒，移入专用深低温冰箱［（-70±5）℃］内冰冻保存。
1.4 解冻融化 将冰冻的红细胞从专用深低温冰箱（-65 ℃）中取出，迅速浸入37 ℃水浴箱中，不断摇动使血袋与水充分接触，加速其融化。但不能用力去挤压血袋，减少红细胞在融化过程中的机械损伤，融化好的血袋要在室温静止10 min，让红细胞得到充分休息，增强细胞的抗破坏能力。完全融化至袋内无冰晶，时间为4~6 min。
1.5 洗涤去甘油 待冰冻红细胞制剂完全融化后,进入净化间将冰冻红细胞直接用无菌一针一通管连接,甘油化的红细胞的内环境是高渗的，为防止红细胞遭到人为破坏，一般采用梯度洗涤法。
方法一：先离心。将血袋内甘油液分出,加9%氯化钠液80 ml,静置5 min后,加0.9%氯化钠液400 ml。离心去除上清液，加0.9%氯化钠液500 ml。离心去上清液加0.9%氯化钠至连袋240 ml。
方法二：1 u红细胞加入9%氯化钠液80 ml,6%羟乙基淀粉100 ml,静置5 min后，加6%羟乙基淀粉100 ml。离心去除上清液，加0.9%氯化钠液500 ml。离心去上清加0.9%氯化钠液至连袋240 ml。
方法三：1 u红细胞加9%氯化钠液80 ml,静置5 min后，加0.9%氯化钠液400 ml。离心去除上清液，加0.9%氯化钠液500 ml。离心去上清加0.9%氯化钠液至连袋240 ml。
1.6 检测标准 我国冰冻解冻去甘油红细胞回收率为≥80%［1］。
1.7 测定方法 计算红细胞回收率。
1.8 统计学处理 各组数据采用均数±标准差（x±s）表示,方差分析，组间比较采用t检验。
2 结果
红细胞低温保存［（-70±5）℃］6年后，方法一洗脱红细胞,回收率明显高于其他两种方法，方法二回收率低于标准（表1）。 表1 三种方法洗脱红细胞回收率结果 注：F=1371.4，P＜0.05。方法一与方法三比较，t=7.94,P＜0.01
3 讨论
烟台市中心血站于2001年开始将冰冻解冻红细胞制剂应用于临床,并对长期保存冰冻红细胞保存效果进行研究,现对6年低温保存的冰冻红细胞解冻后,检测其各项指标、平均值均符合国家规定的质量标准［1］。本实验对三种方法进行比较，其中方法一与另两种方法比较,差异有显著统计学意义。冰冻保存红细胞是目前唯一能够使红细胞保存时间最长的方法。甘油是目前冰冻保存红细胞最为常用的保护剂，可减少冰晶对红细胞的机械损伤和渗透压改变引起的化学损伤。在减少溶血率、提高红细胞回收率方面起重要作用［2］。有文献报道在甘油化前将红细胞与甘油充分混合可以降低其冰冻损害，从而获得理想的红细胞回收率［3］。在甘油化时为避免损伤红细胞,注意滴加红细胞低温保护剂应缓慢均匀,以使甘油充分扩散,渗透入红细胞。冰冻保存时应将血袋内的空气全部排空,缩小体积，加快冰冻速度，同时保证降温和融化过程传热均匀迅速，降低红细胞溶血的发生率。本实验为提高长期保存冰冻红细胞质量提供了技术依据。
【参考文献】
1 中华人民共和国国家标准.全血及成分血质量标准.中华人民共和国国家监督检验检疫总局,2001-10-22.
2 曹丽，张西春，杨莉娅.冰冻解冻红细胞制备洗涤过程中相关问题探讨.实用医技杂志,2005,12（3）:591-592.
3 沈武，陆瑶，徐雪瑾，等.温度对冰冻红细胞保存的影响.临床医学与检验,2005,2（7）:105-106.
作者单位：山东烟台，烟台市中心血站 山东烟台，烟台市传染病医院