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【摘要】 目的 建立飞廉药材中总黄酮的含量测定方法。方法 利用黄酮类与亚硝酸钠及硝酸铝，在碱性条件下显色，采用比色法对不同产地飞廉中总黄酮的含量进行测定。结果 芦丁浓度在0.1094～0.8752 mg/ml范围内与吸收度呈良好的线性关系，平均回收率为100.3%，RSD为0.71%。结论 该法重复性好，结果准确可靠，可作为飞廉质量控制的方法。
【关键词】 飞廉;总黄酮;比色法
Determination of total flavonoids in traditional mongolian materia medica of carduus crispus
WEN Ai-ping， YANG Lai-xiu，WANG Yu-hua, et al.Department of Pharmacy, Inner Mongolia Medical College，Hohhot 010059,China
Objective To establish the method of determination for total flavonoids in carduus crispus.Methods Flavonoids and sodium nitrite and aluminum nitrate produce color under alkaline conditions,using colorimetry to determine the total flavonoids in carduus crispus from different place of origin.Results Rutin showed good linear relationship in the range of 0.1094 ～ 0.8752mg/ml , The average recovery was 100.3% , RSD was 0.71%.Conclusion The methods was reproducible, the results was accurate and reliable.The methods can be used to control the quality of carduus crispus.
[Key words] carduus crispus;total flavonoids;colorimetry
飞廉为菊科植物飞廉(Carduus crispus L)的干燥地上部分，全草入中药，地上部分入蒙药，蒙药名为哈日-侵瓦音一乌日格斯，具有催吐巴达干，制伏痈疽，消肿的功能。主治消化不良，剑突巴达干，痈疽等症[1]，文献报道[2]飞廉也具有降压作用。有关其质量研究报道较少[3，4]，据文献报道，总黄酮的含量测定方法有紫外分光光度法[5，6]、薄层扫描法[7]、高效液相色谱法[8]、荧光分光光度法[9]、毛细管电泳法[10]等。本实验采用化学反应对飞廉中黄酮类成分进行定性鉴别，并采用分光光度法对总黄酮的含量进行了测定，为飞廉的研究和开发提供一定的科学依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 752型光栅分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，超声波震荡仪(天津奥特赛恩斯仪器有限公司) ，其他容量仪器均经校正。
1.2 试药 飞廉药材(样1采自大青山三岔口，样2采自锡盟赛罕乌拉，样3采自呼和浩特市土左旗，样4采自武川县黑大门，样5采自大青山林场)，芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，批号：100080-200706)，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液的制备
2.1.1 提取方法的考察 分别考察了回流提取法和超声提取法。
方法A(回流法)：取本品粉末0.5g，精密称定，置索氏提取器中，加80%乙醇回流提取至提取液为无色，回收乙醇，残渣加80%乙醇溶解并定容于25ml容量瓶中。
方法B(超声法)：取本品粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加80%乙醇25ml，称重，超声处理1h，放冷，再称重，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液作为供试品溶液。
取上述提取液，按“样品含量测定”项下操作，测定含量，结果表明：两种提取方法含量基本一致，因超声法操作简单，所需时间短，故选择超声法进行提取。
2.1.2 提取溶剂的选择 取本品粉末0.5g，分别以30%乙醇、80%乙醇、无水乙醇和甲醇各25ml作溶剂，采用超声法提取，测定。结果表明：采用80%乙醇作为提取溶剂总黄酮含量最高，故选择80%乙醇作为提取溶剂。
2.1.3 提取时间的考察 取本品4份各0.5g，精密称定，各加80%乙醇25ml分别超声处理20、40、60、90min，测定其含量。结果表明：提取60min黄酮总提取量已达最高，故选择提取时间60min。
2.1.4 供试品溶液的制备 取本品粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加80%乙醇25ml，称重，超声处理1h，放冷，再称重，用溶剂补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。
2.2 定性鉴别
2.2.1 盐酸-镁粉反应 取供试液各1ml，分置两支试管中，其中一支加入少量镁粉，并滴加浓盐酸数滴，同置于水浴上加热1min后，取出观察，不加盐酸镁粉的溶液为橙黄色，加盐酸镁粉变为红棕色。
2.2.2 三氯化铝反应 取供试液各1ml，分置两支试管中，其中一支加入少量1%三氯化铝溶液，不加三氯化铝溶液为黄色，加三氯化铝溶液为黄绿色荧光。
2.2.3 氨水反应 取供试液各1ml，分置两支试管中，其中一支加少量氨水，不加氨水溶液为橙黄色，加氨水溶液为黄绿色荧光。
2.3 含量测定
2.3.1 标准曲线的制备 精密称取120℃干燥恒重的芦丁对照品适量，加80%乙醇制成每1ml含芦丁0.2188mg的溶液作为对照品溶液。
分别精密吸取上述对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml置10ml量瓶中，精密加5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6min，精密加10%硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，放置6min，再加1mol/L氢氧化钠溶液4.0ml，分别用80%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15min，在510 nm波长处测定吸收值,以浓度对吸收度作直线回归，得回归方程为: C = 4.085×10-4+1.066A，r=0.9995。
结果表明：浓度与吸收度在0.1094～0.8752 mg/ml范围内呈良好的线性关系。
2.3.2 精密度实验 取同一供试品溶液5份，依法显色后,测得吸收度平均值为0.214，RSD为0.62%，表明该法的精密度较好。
2.3.3 稳定性实验 对显色后的供试品溶液，每隔10min测定吸收度，结果表明：显色后在30min内稳定，RSD为1.89%。
2.3.4 重复性实验 取本品(样品1)粉末6份各0.5g，精密称定，按“样品含量测定”项下操作，计算含量，结果总黄酮平均含量为0.50%，RSD为1.73%。
2.3.5 加样回收率试验 取已知含量的(0.5%)飞廉粉末9份各0.25g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入干燥恒重的芦丁对照品1mg、1.25mg和1.5mg各3份，以下按“样品含量测定”项下操作，测定吸收值，计算回收率，结果见1。表1 回收率试验结果
2.3.6 样品含量测定 精密量取供试品溶液2ml，置10ml量瓶中，按“标准曲线的制备”项下方法操作，测定吸收值，用回归方程计算样品中总黄酮含量，分别对5个产地的飞廉中总黄酮含量进行测定，结果见表2。表2 样品含量测定结果
3 讨论
本实验首次对飞廉总黄酮含量进行了测定，但属于哪种类型的黄酮还有待于进一步研究。
实验结果表明：不同产地采集的飞廉药材中总黄酮的含量差异较大，样品2中总黄酮含量最高，其次是样品3、样品4及样品5，样品1中总黄酮含量最少。该方法简便、快速、重复性好，结果准确可靠，可有效控制飞廉药材的质量。
【参考文献】
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