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【摘要】 目的 筛选从黄柏中提取小檗碱的最佳方法。方法 采用酸性乙醇、石灰乳、酶解、酸性水和中性乙醇分别提取药材黄柏中的小檗碱，以紫外分光光度法测定盐酸小檗碱含量并进行比较。结果 用酸性乙醇提取得率最高，比传统乙醇提取小檗碱的产量提高了1.887倍。结论 不同的提取方法对黄柏中小檗碱的得率存在较大差异，用酸性乙醇为最优提取工艺。
【关键词】 黄柏;小檗碱;提取工艺
Objective To select suitable method of berberine extraction from Phellodendron amurense.Methods Berberine was extracted with different methods： acid-alcohol method， lime-water method， acidic water method and enzymatic hydrolysis method， the content of berberine was assayed by ultraviolet spectrophotometry and compared.Results The extraction rate of acid-alcohol method was higher than that of other methods. Compared with traditional ethanol technology， the acid-alcohol extraction yield of berberine was increased by 1.887.Conclusion Different extracting method has important influence on extraction rate of berberine， the optimum extraction process was acid-alcohol method.
[Key words] Phellodendron amurense; berberine; extracting process
黄檗(Phellodendron amurense Rupr.)是芸香科(Rutaceae)黄檗属(Phellodendron)植物[1]。黄檗的干燥树皮作为中药黄柏的基源载入《中华人民共和国药典》，通常所称为关黄柏或川黄柏[2]。黄柏的有效成分主要为小檗碱，在关黄柏中含量约0.60%～1.64%，川黄柏中含量约1.37%～5.8%[3]。
小檗碱是一种常用的广谱抗菌药，抵抗多种原因引起的腹泻， 并具有抗病原体作用[4]，通常用于治疗原发性高血压、心律失常、高脂血症、消化性溃疡和2型糖尿病等疾病[5]。常用的小檗碱提取方法有：醇提、酸水、石灰乳、酶解和酸性乙醇等。本实验以黄柏为原料，分别用以上5种方法提取其中的小檗碱，并对各种方法的得率进行了比较，以期筛选出适于黄檗中小檗碱提取的最佳方法。
1 材料与方法
1.1 实验材料与药品
黄柏(甘肃天森药业有限公司天水中药饮片厂，产地：吉林，经甘肃省西和县人民医院鱼宝珍药剂师鉴定为关黄柏);盐酸小檗碱标准品(中国药品生物制品检定所);纤维素酶R-10(西安博精生物技术有限责任公司，日本);其他化学试剂均为国产分析纯。TB-114电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);UV-1700型紫外-可见分光光度计(日本岛津)。
1.2 实验方法
1.2.1 标准曲线的绘制[6]
精密称取盐酸小檗碱对照品，用水溶解，于10ml容量瓶中定容，得浓度为0.1mg/ml的储备液。精密吸取小檗碱储备液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6和0.7ml于25ml量瓶中，分别用蒸馏水定容至刻度。用蒸馏水作空白，于波长345nm处测定其吸光度A，以小檗碱质量浓度C为横坐标，吸光度A为纵坐标作图，绘制标准曲线。
1.2.2 提取方法
1.2.2.1 酸性乙醇[7]
称取黄柏粉10g，于250ml圆底烧瓶中，加100ml 0.2%硫酸：无水乙醇=1：1溶液，60℃加热回流2次，每次1h。药渣用热乙醇洗涤，合并于前2次的提取液，将提取液减压蒸馏乙醇至膏状，用100ml热水溶解，趁热过滤，滤液待用。
1.2.2.2 石灰乳[8]
称取黄柏粉10g，用6倍量的1%石灰乳浸泡24h。双层纱布过滤，药渣再用6倍量的石灰乳浸泡24h。合并2次浸泡液，抽滤。将滤液蒸干，用100ml热水溶解，趁热过滤，滤液待用。
1.2.2.3 酶解[9]
称取黄柏粉10g，加8倍量pH 4.5的柠檬酸缓冲液，50℃恒温6h，酶解，纤维酶的用量为30mg/g，滤过，滤液中加入0.3ml H2SO4放置10h，过滤，滤液蒸干，用100ml热水溶解，趁热过滤，滤液待用。
1.2.2.4 酸性水[10，11]
称取黄柏粉10g，用0.5%的硫酸水溶液冷浸提取，过夜，滤过，滤液蒸干，用100ml热水溶解，趁热过滤，滤液待用。
1.2.2.5 中性乙醇[5]
称取黄柏粉10g，放入250ml圆底烧瓶中，用100ml 50%的乙醇作提取液，60℃加热回流2次，1h/次，再放置浸泡1h，抽滤，合并3次滤液，减压蒸馏乙醇直至膏状，用100ml热水溶解，趁热过滤，滤液待用。
1.2.3 小檗碱含量测定
准确量取一定量稀释10倍的提取液各3ml，测吸光度A，根据测得的吸光度A，用回归方程计算出对应的小檗碱浓度，并计算小檗碱的提取率。
1.2.4 稳定性实验
根据以上实验结果，重新称取3份黄柏粉，每份10g，用酸性乙醇提取小檗碱，用乙醇提取法作对照，以验证酸性乙醇提取小檗碱结果的稳定性。
2 结果
2.1 标准曲线
结果表明，盐酸小檗碱在0.4～2.8mg/L质量浓度范围内呈良好的线性关系。 根据绘制的标准曲线，作出回归方程：A= 0.2564C (R2=0.9990)，式中A为吸光度，C为溶液浓度。
2.2 不同提取方法所得
小檗碱含量的比较 根据不同的方法对黄柏中小檗碱进行了提取，并结合上述实验所得的回归方程进行计算，结果见表1。 表1 不同方法提取小檗碱的结果
2.3 稳定性实验测定结果
见表2。表2 稳定性实验结果
3 讨论
本实验方法用于实验室小规模提取，简单可靠，由于黄柏中含有大量的黏液细胞，吸水膨胀后妨碍其他组织细胞吸水膨胀及组织中有效成分的溶出、扩散，不利于小檗碱的提取[13]。实验若在均匀设计[14]过程中，充分考虑黄柏的粉碎度的影响，将有可能进一步提高其提取率。酸性乙醇作为一种简便高效的提取方法在将来会有良好的应用前景。
【参考文献】
1 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志.北京：科学出版社，1997：99-103.
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13 孙静，张俏，杜文娟，等.黄柏中小檗碱乙醇提取工艺优选.现代中医药，2008，29(3)：76-77.
14 王振华，杜勤，许晓峰，等.黄柏提取工艺的均匀设计优选.中成药，2000，22(7)：466- 468.