FHIT基因表达与宫颈鳞癌发病关系*

【摘要】  目的 探讨抑癌基因脆性组氨酸三联(fragile histine triad，FHIT)基因在宫颈鳞癌中的表达及其意义。方法 应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法观察40例宫颈鳞癌、30例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和30例正常宫颈组织中FHIT基因、HPV16 E6的表达。结果 FHIT基因在正常宫颈组织、CIN和宫颈鳞癌组织中的阳性表达率分别为：97%、67%、30%，各组间比较差异有显著性(χ2=43.595，P<0.001)。FHIT基因阳性表达在宫颈鳞癌病理分级、临床分期中的比较，差异无显著性(χ2=3.378，χ2=3.315，P>0.05)。结论 宫颈鳞癌中FHIT基因表达减少或缺失提示其在宫颈鳞癌的发生发展中起重要作用，可能是宫颈鳞癌发病机制之一。通过对FHIT基因的致病机制进一步研究，有助于揭示宫颈癌的发病机制，有可能用于临床宫颈癌诊断、预防和基因治疗。

【关键词】  宫颈肿瘤;基因;肿瘤抑制;免疫组织化学;FHIT基因

　 Objective To study tumor suppressor gene fragile histidine triad (FHIT) expression and its significance in cervical squamous carcinomas (CSC).Methods Immunohistochemical staining for FHIT, HPV16E6 were performed by SP methods in 40 cases of CSC's, 30 cases of cervical intraepithelial neoplasias (CIN), and 30 cases of normal cervical epithelium.Results The express of FHIT in 97% of normal cervical epithelium, 67% of CIN and 30% of the CSC, FHIT expression showed significant statistical difference (χ2=43.595，P<0.001). The express of FHIT in the degree of differentiation and clinic stages of CSC indicates no statistical difference (χ2=3.378，χ2=3.315，P>0.05).Conclusion The FHIT gene expression deletion in the CSC indicate that these two factors play an important role in the CSC's development strategy. The FHIT gene deletion might be the one of the CSC's pathogenesises(or might be the causes of CSC).The results of this study that FHIT gene biological effects on CSC' development and its interaction in CSC could help reveal the pathogenesis of CSC. The factor could be the potential CSC clinical diagnosis indicator and useful in CSC's precaution and gene therapy.

　　[Key words] uterine cervical neoplasms;genes;tumor suppressor;immunohistochemistry;FHIT gene

　　宫颈癌仍是威胁全世界妇女健康的重大问题。在全球妇女恶性肿瘤的发病率中位居第二，在发展中国家中最为常见，我国每年宫颈癌的新发病例和死亡数分别约为13.5万和5万[1]。HPV感染是宫颈癌的根本原因[2～4]，而抑癌基因的失活被认为是重要的致癌因素， FHIT基因是近年来发现的候选抑癌基因[5]。本研究应用免疫组织化学法检测FHIT基因在宫颈鳞癌中的表达水平及其意义，探讨与宫颈鳞癌发生发展的关系。

　　1 材料与方法

　　1.1 研究对象

　　选自兰州大学第二医院1995—2005年间手术或活检的宫颈鳞癌标本40例，所有患者术前均未经放化疗或其他特殊治疗，患者年龄27～70岁，平均54.2岁，国际妇产科联盟(FIGO，2000)临床分期：Ⅰ期15例，Ⅱa期17例，Ⅱb期8例;组织学分级：Ⅰ级8例，Ⅱ级20例，Ⅲ级12例。另收集30例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和30例正常宫颈组织标本作为对照组。

　　1.2 研究方法

　　采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法。兔抗人FHIT多克隆抗体，免疫组织化学过氧化物标记的链霉卵白素SP试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。

　　1.3 结果判断

　　肿瘤组织FHIT基因表达产物定位于细胞浆;以各种抗体在细胞胞浆或胞核着棕黄色颗粒为主。每例切片在20个高倍视野下进行细胞计数，每个视野计数50个细胞，共1000个细胞。按免疫组化切片中肿瘤显色深浅计分：A细胞浆或核无染色，0分(-);B细胞浆或核呈淡棕色云雾状，1分(+);C细胞浆或核呈棕色颗粒状，2分(+ +);D细胞浆或核呈均匀深棕色，3分(+ + +)。计算每张切片中瘤细胞浆或核显色深浅(A、B、C、D)各占百分数a、b、c、d，然后计算A×a+B×b+C×c+D×d,以得分0分(-)、1分(+)均列为阴性，得分2分(+ +)为低表达，得分3分(+ + +)为高表达。评分法按文献[6]进行。

　　1.4 统计学处理

　　采用SPSS 10.0统计软件进行卡方检验和秩和检验，检验水准α=0.05。

　　2 结果

　　2.1 FHIT基因在正常宫颈组织、CIN和宫颈鳞癌组织中表达

　　见表1，图1～3。FHIT基因在正常宫颈组织、CIN和宫颈鳞癌组织的阳性表达率分别为：97%、67%、30%，各组阳性等级表达经Kruskal-Wallis H检验比较，三者差异有显著性(χ2=43.595，P<0.001)。表1 FHIT基因在正常宫颈组织、CIN和宫颈鳞癌组织中表达的比较　　图2 FHIT在CIN低表达，SP法(×20)(++)图3 FHIT在宫颈鳞癌阴性表达，SP法(×20)(+)

　　2.2 FHIT基因阳性表达的病理分级比较

　　见表2。FHIT基因阳性表达在宫颈鳞癌病理分级中的比较，经卡方检验，差异无显著性(χ2=3.378，P>0.05)。表2 FHIT基因阳性表达与宫颈鳞癌病理分级比较

　　2.3 FHIT基因阳性表达与宫颈鳞癌临床分期的比较

　　见表3。FHIT基因阳性表达在宫颈鳞癌临床分期中的比较，经卡方检验，差异无显著性(χ2=3.315， P>0.05)，见表3。表3 FHIT基因阳性表达与宫颈鳞癌临床分期的比较

　　3 讨论

　　宫颈癌确切的病因至今尚不清楚，高危型HPV感染、细胞癌基因的激活和抑癌基因的失活均参与了宫颈癌的发生和发展[2～4]。FHIT基因定位于宫颈癌等位基因缺失高发区3p14.2内，与人类多种恶性肿瘤的发生关系密切。目前，FHIT基因在宫颈癌发生发展中的作用尚不明确。

　　本研究中FHIT基因在宫颈鳞癌组织的阳性表达率为30%，与文献报道相近[7，8]，与正常宫颈组织组和CIN组间差异均有显著性。对CIN的研究显示33%HSILs和8%LSILS有FHIT基因表达减少或缺失[8]，Greenspan等[9]的研究表明在正常宫颈组织FHIT基因的表达均未见异常，随着CIN向宫颈癌的演变，FHIT基因的突变率也逐渐增多。提示FHIT基因表达下降与宫颈鳞癌的发生、发展密切相关。本研究中FHIT基因阳性表达在宫颈鳞癌病理分级及临床分期中的比较，差异无显著性，这一结果与Nakagawa等[10]关于FHIT异常表达并非宫颈鳞癌进展结果的推论一致。但有研究显示，FHIT基因表达降低是晚期宫颈癌患者预后不良的独立指标[11]。因此，笔者认为FHIT基因缺失是宫颈鳞癌发生的早期事件，而其在宫颈鳞癌进展中的作用需今后进一步深入研究[12]。

　　本研究结果显示，宫颈鳞癌中FHIT基因表达减少或缺失提示其在宫颈鳞癌的发生发展中起重要作用，可能是宫颈鳞癌发病机制之一。今后通过对FHIT基因的致病机制的进一步研究，有助于揭示宫颈癌的发病机制，有可能用于临床宫颈癌诊断、预防和基因治疗。

【参考文献】
  　1 魏丽惠.宫颈病变诊断和治疗中的过度与不足. 中国妇产科临床杂志,2009，10:83-84.

　　2 Zur Hausen H.Papillomaviruses and cancer: from basic studies to clinical application. Nat Rev Cancer,2002,2:342-350.

　　3 Sjoeborg KD, Tropé A, Lie AK, et al. HPV genotype distribution according to severity of cervical neoplasia.Gynecol Oncol,2010,118(1):29-34.

　　4 Quint KD,de Koning MN,van Doorn LJ, et al. HPV genotyping and HPV16 variant analysis in glandular and squamous neoplastic lesions of the uterine cervix.Gynecol Oncol,2010,117(2): 297-301.

　　5 Giarnieri E, Zanesi N, Bottoni A, et al. Oncosuppressor proteins of fragile sites are reduced in cervical cancer.Cancer Lett,2010,289(1)：40-45.

　　6 李亚松，石松生，杨卫忠.P73蛋白在脑膜瘤中表达的意义.福建医科大学学报，2004,38:164.

　　7 Yoon SO. Abnormal fragile histidine triad (Fhit) expression in invasive cervical adenocarcinoma: association with tumor aggressiveness.Hum Pathol,2007,38(2):326-331.

　　8 Birrer MJ, Hendricks D, Farley J, et al. Abnormal Fhit expression in malignant and premalignant lesions of the cervix.Cancer Res,1999,59(20)：5270-5274.

　　9 Greenspan DL,Connolly DC,Wu R,et al.Loss of FHIT expression in cervical carcinoma cell lines and primary tumors.Cancer Res,1997,57:4692-4698.

　　10 Nakagawa S, Watanabe S, Yoshikawa H, et al. Mutational analysis of human papillomavirus type 16 E6 protein: transforming function for human cells and degradation of p53 in vitro.Virology, 1995, 212(2): 535-542.

　　11 Krivak TC, Mcbroom JW. Abnomal FHIT expression in advanced cercival carcinoma: a poor prognoatic factor. Cancer Res,2001,61:4382-4385.

　　12 Wistuba II, Montellano FD, Milchgrub S, et al. Deletions of chromosome 3p are frequent and early events in the pathogenesis of uterine cervical carcinoma.Cancer Res,1997,57(15):3154-3158.