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【摘要】 目的 优选厚朴的最佳姜炙工艺。方法 以厚朴酚及和厚朴酚的含量为评价指标，采用均匀设计实验对干姜制厚朴的工艺进行优选。结果 最佳炮制工艺条件为用干姜12g/100g药材、闷润180min、50℃烘40min。 结论 优选出的工艺稳定可行。
【关键词】 厚朴;炮制;均匀设计法
Objective To optimize the best ginger Magnolia Sunburn process. Methods The uniform design was used to optimize supersonic extraction process of magnolol and honokiol in Magnolia, the rate of magnolol and honokiol in Magnolia. Results The optimal extracting procedure was as follows: 12 grams dried ginger used in every 100 grams Magnolia, moistenend for 180min, baked for 40 minutes at 50 ℃. Conclusion The optimum extracting procedure is reasonable and stable.
[Key words] Magnolia; process; uniform design
厚朴为木兰科植物Magnolia officinalis Rehd. et Wils. 或Magnolia officinalis Rehd. et Wils. var. biloba Rehd.et Wils.的干燥干皮、根皮及枝皮。厚朴药材资源丰富，为常用中药，性温，味苦、辛，具有抗菌、消炎、抗胃溃疡、抗氧化等作用[1]，由于对人的咽喉有一定的刺激作用，故内服一般不生用，姜制后可消除对咽喉的刺激性，同时可增强宽中和胃的作用，《中国药典》2010年版(一部)仅收载了姜制厚朴，但没有具体的工艺。但是在炮制过程中因各因素的不同会引起其有效成分含量的差异，从而影响到厚朴饮片的质量。故本实验选取其主要成分厚朴酚、和厚朴酚的含量为评价指标，采用均匀设计实验对其炮制工艺进行优选，为制订姜厚朴饮片标准奠定理论基础。
1 仪器与试药
厚朴(关岭)药材样品：购至药材市场或自采，经贵阳中医学院赵俊华教授鉴定为木兰科植物厚朴Magnolia officinalis Rehd.et Wils.干燥干皮及枝皮。Aglient 1100高效液相色谱仪(自动进样器，四元泵，DAD检测器)，HP1100/ WIND3D化学工作站;超声波清洗机(北京创新德超声电子研究所)。AE240电子天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司],厚朴酚对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110729-200310)，和厚朴酚对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110730-200609)，甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 方法
按照均匀设计法设计实验，采用高效液相色谱法，对厚朴中的厚朴酚、和厚朴酚进行含量测定。
2.1.1 色谱条件[2]
色谱柱为Diamonsil C18 柱(150 mm×4.6 mm，5μm);流动相：甲醇-水(78：22);检测波长：λ=294nm;流速：1ml/min;柱温：25℃;进样量10μl。
2.1.2 对照品溶液的制备
2.1.2.1 厚朴酚对照品溶液的制备
精密称取厚朴酚对照品适量于100ml容量瓶中，加甲醇溶液溶解并稀释至刻度制成0.0380mg/ml的对照品储备液。
2.1.2.2 和厚朴酚对照品溶液的制备
精密称取和厚朴酚对照品适量于100ml容量瓶中，加甲醇溶液溶解并稀释至刻度制成0.0309mg/ml的对照品储备液。
2.1.3 供试品溶液的制备
取厚朴药材0.1g精密称定，置于具塞三角锥形瓶中，加入50ml甲醇，称重，超声提取60min，取出放凉，称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，洗涤药渣，加甲醇定容至50ml。
2.1.4 标准曲线的绘制
2.1.4.1 厚朴酚标准曲线的绘制
精密量取厚朴酚对照品溶液适量，加甲醇制成浓度为11.4、15.2、22.8、30.4、38.0μg/ml的对照品溶液，分别精密吸取10μl注入高效液相色谱仪，记录其峰面积。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行回归。得回归方程：Y=14599X-13049;r= 0.9999;厚朴酚在0.114～0.38μg范围内呈良好线性关系。
2.1.4.2 和厚朴酚标准曲线的绘制
精密量取和厚朴酚对照品溶液适量，加甲醇制成浓度为9.27、12.36、15.45、18.54、21.63μg/ml的对照品溶液，分别精密吸取10μl注入高效液相色谱仪，记录其峰面积。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行回归。得回归方程：Y=16967X-237.8，r= 0.9999;和厚朴酚在0.093～0.22μg范围内呈良好线性关系。
2.1.5 精密度试验
精密吸取厚朴酚对照品溶液与和厚朴酚对照品溶液10μl，重复进样5次。厚朴酚RSD=0.62%;和厚朴酚RSD=0.62%。
2.1.6 稳定性试验
按“ 2.1.3” 项下方法，称取厚朴约0.1g(精密称定)，制成供试品溶液，分别在0、2、6、8、10h精密吸取10μl注入高效液相色谱仪，记录其峰面积。厚朴酚RSD=1.23%，和厚朴酚RSD=1.07%。
2.1.7 重复性试验
按 “2.1.3” 项下方法，称取厚朴约0.1g(精密称定)，制成供试品溶液，分别精密吸取10μl注入高效液相色谱仪，记录其峰面积，重复6次。厚朴酚RSD=1.67%，和厚朴酚RSD=1.96%。
2.1.8 加样回收试验
称取同一厚朴样品约0.05g精密称定，共5份。分别精密加入对照品溶液(厚朴酚浓度为0.25mg/ml，和厚朴酚浓度为0.1052mg/ml)3.5ml，按“2.1.3”项下方法制备成供试品溶液。分别精密吸取10μl注入高效液相色谱仪，记录其峰面积。厚朴酚RSD=1.39%，和厚朴酚RSD=1.13%。
2.2 实验安排
精密称取厚朴丝(宽2～3mm)50g，采用均匀设计法考察4个因素即闷润时间(A)、干姜用量(B)、烘烤时间(C)及烘烤温度(D)，为获得最佳工艺条件，针对以上条件做4因素6水平的均匀实验。研究因素及其水平见表1。表1 因素水平表
2.3 样品含量测定
按上述不同炮制方案得到6个厚朴炮制供试样品，粉碎，过40目筛，备用。按“2.1.3”项下方法，制备不同炮制方法的厚朴供试品溶液，分别精密吸取10μl注入高效液相色谱仪，记录其峰面积，计算结果见表2～4。表2 均匀试验安排表3 均匀试验结果表4 预期结果
2.4 回归分析
通过spss13.0多元线性回归的逐步回归，求得回归方程为：Y=2.606+0.009X1+0.114X2 (R=0.955，F=14.489，P=0.029)，P<0.05，F检验通过，方程具有显著意义。由回归方程可知，闷润时间和干姜的用量对厚朴酚、和厚朴酚的含量起着决定性的作用，而烘制时间和烘制温度没有显著影响。
2.5 优化结果验证试验
取优化条件下的厚朴炮制药材3份，进行验证实验，测厚朴酚与和厚朴酚的总含量，结果分别为5.49、5.65、5.58，平均含量为5.57，RSD为1.49% 。验证结果与均匀设计实验预测结果5.58基本接近。
3 讨论
实验拟定厚朴的炮制工艺为：闷润时间180min，干姜用量[3]12g/100g药材，50℃烘40min。试验中干姜用量过多是否会影响厚朴本身的功效，以及是否会引起患者的不适，都具有不确定性。实验中干姜的用量是按《贵州省中药炮制规范》中规定的12g/100g药材。在实际生产中，从含量高耗能低易保存的角度出发故拟定了以上条件。 中药在炮制过程中由于受炮制时间、温度、辅料用量等因素的影响，有效成分的含量就会有差异，从而影响饮片的质量。采用均匀设计法对上述因素进行优化来提高厚朴饮片的质量，由于不考虑“整齐可比”性，因而可大大减少试验次数，且试验次数与各因素所取的水平数相等又可以减少试验次数。本实验利用spss13.0多元线性回归的逐步回归建立回归方程，能很好地拟合炮制过程，表明该转化工艺稳定、可行，为制订干姜厚朴饮片标准提供了理论依据。
【参考文献】
1 李杰萍，梁统，周克元，等.厚朴酚对趋化三肽激活的大鼠中性粒细胞功能的影响.中国药科大学学报，2003，34(3)：260.
2 国家药典委员会.中华人民共和国药典，一部.北京：中国医药科技出版社，2010：345.
3 贵州省食品药品监督管理局.贵州省中药饮片炮制规范.贵阳：贵州科技出版社，2005：28.