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【摘要】 目的分析EDTA-K2引起血小板假性减少的原因。方法利用迈瑞BC-3000全自动血细胞分析仪对EDTA-K2与枸橼酸钠两种抗凝剂的血标本进行PLT检测，以及全自动分析仪稀释模式下检测和手工计数法测定，并进行比较。结果EDTA-K2抗凝血测得PLT值明显低于正常范围，枸橼酸钠抗凝血、末梢稀释血及手工计数测得PLT值均在正常范围内。结论EDTA-K2能促使某些人的PLT聚集和产生卫星现象而导致PLT假性减少。
【关键词】 乙二胺四乙酸;枸橼酸钠;血小板假性减少;血小板聚集;卫星现象
乙二胺四乙酸(EDTA)能与血液中Ca2+结合成螯合物，而使Ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。EDTA-K2具有对血液标本中的细胞形态和计数影响非常小等优点，国际血液学标准化委员会(ICSH)1993年建议将EDTA-K2作为血常规检验的抗凝剂。随着全自动血细胞分析仪的推广使用，EDTA-K2已在临床广泛使用[1]。但EDTA盐能引起血小板的粘附与聚集，使全自动血液分析仪无法正确识别，使血小板计数明显低于实际数值，这种由EDTA盐引起假性血小板减少的现象被称为EDTA依赖性假性血小板减少症(EDTA-PTCP)。 对于EDTA-PTCP国内外均有报道，临床发生率约为0.09%~0.21%。本科于2011年10月—2012年4月，在血常规检测中发现3例EDTA-PTCP典型病例，现分析如下。
1材料与方法
1.1一般资料病例1：男，46岁，因肝癌伴腹水入院治疗;病例2：男，58岁，贲门癌术后入院化疗;病例3：女，73岁，因肺心病入院治疗。3例患者均进行常规对症治疗。
1.2仪器与试剂迈瑞BC-3000全自动血细胞分析仪及迈瑞公司配套试剂;湖南安信医疗高分子材料有限公司生产的真空采血管;成都迈科公司生产的快速瑞氏染液;1%草酸铵血小板稀释液及白细胞稀释液(科室自配)。
1.3方法
1.3.1仪器法
1.3.1.1全血模式测定分别用EDTA-K2抗凝管和枸橼酸钠抗凝管抽取静脉血并混匀，按仪器标准操作规程在全自动血细胞分析仪全血模式进行测定，记录PLT与WBC值。
1.3.1.2稀释血液模式测定严格操作规程，准确吸取患者无名指末梢血20μl,加入仪器设定的标准量稀释液中，混匀静置5min后进行稀释模式下测定，记录PLT与WBC值。
1.3.2手工法按第三版《全国临床检验操作规程》，准确吸取手指末梢血20μl加入到0.38ml草酸铵血小板稀释液中充分混匀，待完全溶血后再次混匀，取血小板悬液1滴冲入计数池内，静置10~15min后，高倍镜计数血小板数量。同样的方法手工计数白细胞数量。
1.3.3血涂片瑞氏染色观察分别取EDTA-K2抗凝血与手指末梢血制作血涂片，经瑞氏染色，在油镜下观察血小板形态。2结果3例患者入院初次抽静脉血化验，用EDTA-K2抗凝血查血常规，结果PLT均低于正常值，与临床医师沟通了解到患者均无出血症状，随后三患者均重新采血，分别用不同抗凝剂全血、稀释血上机复查及手工计数。3例患者的结果见表1~3。表1病例1不同检验方法PLT与WBC计数表2病例2不同检验方法PLT与WBC计数 表3病例3不同检验方法PLT与WBC计数
血涂片瑞氏染色结果：3例患者的手指末梢血的涂片中，血小板散在分布，形态正常，数目较多，未见明显聚集现象。EDTA-K2抗凝血涂片可见血小板聚集现象或与单核细胞、淋巴细胞有相互粘连及被吞噬现象，也可见血小板围绕淋巴细胞呈现卫星现象。3分析EDTA-K2作为血细胞分析的常用抗凝剂有很大的优点，但对有些患者或者健康人的血液的血小板有一定的聚集作用，造成假性血小板减少，分析原因有以下两点：(1)EDTA-K2可使血液发生免疫介导，产生冷抗血小板抗体，使血小板互相发生凝集现象，这种EDTA依赖的冷抗血小板自身抗体还能直接作用于血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa上，同时这种与血小板结合后的自身抗Fc端又可与淋巴细胞或单核细胞膜上Fc受体结合，出现卫星现象[2]。(2)EDTA-K2可导致血小板活化，使血小板形态发生改变，导致血小板膜表面某种隐匿性抗原表位发生构象改变，这些活化的血小板与血浆中的自身抗体结合后，激活了细胞膜中的某些能活化血小板纤维蛋白的原受体的活性物质，促使血小板与纤维蛋白原聚集成团[3]。这两种原因在表象上都表现为血小板的体积增大。目前血液分析仪多采用电阻抗法为原理进行血细胞分类和计数，血细胞为相对非导电性质，悬浮在电解质溶液中的颗粒在通过计数小孔时可引起电阻的变化，从而对血细胞进行计数和体积测定，可见它只是以细胞体积大小来进行测定。由于EDTA-K2可引起血小板的聚集或发生卫星现象，分析仪不能识别凝集的血小板，导致血小板计数偏低;当血小板聚集成堆与白细胞体积接近时，可被分析仪当作白细胞进行计数，这就造成了血小板假性减少和和白细胞假性增多。EDTA-PTCP可见于正常人，但多数情况下伴某些疾病，如癌症、自身免疫性疾病、肺心病、肝病及一些原因不明的疾病。虽然发生率不高，但应加以重视，对于血小板减少而无出血症状的患者，一定要用不同方法进行复查，以防误诊。对于诊断为EDTA-PTAP的患者要告知以后查血常规时不要使用EDTA盐抗凝，以免造成不必要的检查和治疗。
【参考文献】
1邦显，刘思景.抗凝剂EDTA-K2引起的血小板减少原因分析.检验医学与临床，2011,8(19):2357.
2宓庆梅，施巍宇.EDTA依赖性假性血小板减少症1例.中华检验医学杂志,2004,27(10):719.
3高琼.EDTA盐依赖性血小板减少症1例分析.中国误诊学杂志，2012,12(3):584.