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【摘要】 目的 通过检测异位内膜病灶与子宫腺肌症、子宫肌瘤在位内膜组织中血管内皮生长因子（VEGF）含量对比，研究血管内皮生长因子（VEGF）在子宫内膜异位症（EMs）发病中的作用。方法 2002年7月～2003年8月在我院妇科进行腹腔镜手术的50例EMs患者，增殖期30例，分泌期20例;对照组子宫腺肌症10例，子宫肌瘤25例（作为内膜对照），在位内膜增殖期17例，分泌期18例。采用免疫组化S-P法，鼠抗人VEGF单克隆抗体（MAB-0243-1）即用型检测，按VEGF染色强度及面积的定量分析计算出阳性单位。结果 VEGF在子宫内膜异位症病灶染色均为阳性，呈现棕色颗粒，主要分布于腺体细胞和间质个别细胞，含量差异具有显著性;子宫内膜异位症病灶、子宫腺肌症在位内膜VEGF阳性单位高于子宫肌瘤在位内膜，并且不随月经周期而改变，与r-ASRM分期无关。结论 VEGF在异位内膜的过高持续表达为子宫内膜异位症的存在与发展提供可能。
关键词 子宫内膜异位症 血管内皮生长因子 免疫组化
Distribution and expression of vascular
endothelial growth factor in endometriosis
Wang Ningning，Zhuang Guanglun，Huang Jianzhao，et al.
First Affiliated Hospital of Zhongshan University，Guangzhou，Guangdong510080.
【Abstract】 Objective Comparing VEGF content in endometriosis，adenomyosis and eutopic endometrium of myoma，we want to showthe function of VEGF in endometriosis mechanism.Methods 50cases of endometriosis（inˉcluding30cases with proliferative stage and20cases with secretory stage）were diagnosised by laparoscopy from July，2002to August，2003.Endometrium controls were from10cases adenomyosis and25cases myoma incuding17cases with proliferative stage and18cases with secretory stage.We used immunohistochemical S-P method and mouse anti-human monocloned antibody（MAB-0243-1）.Then we calculated the intensity and area of positive unitof VEGF.Results Brown granules were VEGF positive among the gland epithelium cells and some stromal cells and the differˉence was significant.Content of VEGF in endometriosis lesion and eutopic endometrium of adenomyosis were higher than that of eutopic endometrium of myoma，and could not change from proliferative stage to secretory stage.It was alˉso no relation to r-ASRM.Conclusion High and persistent expression of VEGF in ectopic endometrium may play an important role inexsiting and developing endometriosis.
Key words endometriosis VEGF immunohistochemistry
子宫内膜异位症（endometriosis，EMs）的发病机制目前尚存争议，症状顽固、治疗后易复发，恶变率0.7%～1.0%，其中血管生成为异位内膜的继续存在与持续生长提供基础。作为调节血管生长的主要因子，血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）尽管在子宫内膜异位症中的作用受到关注 ［1～4］ ，但其在子宫内膜病灶的表达分布方面尚存争议 ［5］ 。我们通过检测异位内膜病灶与在位内膜组织中VEGF含量对比，以期揭示VEGF在EMs发病中的作用。
1 资料与方法
1.1 研究对象 取自2002年7月～2003年8月在我院妇科进行腹腔镜手术的50例子宫内膜异位症患者，年龄34～51岁，平均36岁。术前3个月未进行激素治疗，月经规律。 按美国生育医学会修订分期（r-ASRM），子宫内膜异位症Ⅰ～Ⅱ期15例，Ⅲ～Ⅳ期子宫内膜异位症35例。对照组35例，年龄35～49岁，平均42岁，选无增殖型改变、无恶变倾向的切除子宫的患者，其中子宫腺肌症10例，子宫肌瘤25例（作为正常内膜对照），在位内膜增殖期17例，分泌期18例。
1.2 方法
1.2.1 标本取材 在腹腔镜手术时切除的卵巢子宫内膜异位症病灶组织、剖腹切除的子宫腺肌症在位内膜与子宫肌瘤的在位内膜组织，使用10%甲醛固定，常规脱水，然后进行石蜡包埋，H-E染色。筛选出可见完整的腺体，包括柱状腺上皮与间质细胞，而缺乏此结构的组织不予选用。
1.2.2 免疫组化检测 载玻片用APES进行防脱片处理。石蜡包埋后连续切片，厚度为4μm，切片脱蜡和水化，高压抗原修复处理后行免疫组化测定。采用S-P法，一抗采用鼠抗人VEGF单克隆抗体（MAB-0243-1）即用型（由迈新生物工程公司提供）。染色步骤参照说明进行，二氨基联苯胺（DAB）显色，脱水，透明，固封。用已知胃癌组织作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。
1.2.3 结果判定 VEGF染色阳性为细胞质内出现棕黄或棕褐色颗粒。结果观察阳性细胞的分布与强度。采用德国ZEISSAxiotron研究型显微镜经JVC ky-F30B3-CCD彩色图像摄录输入仪，图像分析系统（物镜20倍）进行VEGF染色强度及面积的定量分析 ［6］ 。用平均辉度反映阳性强度，总阳性面积及阳性面积百分率反映阳性分布范围。每一切片分别测量3个随机选择的腺体和间质的平均辉度和总阳性面积（单位:μm 2 ），取其平均值。根据腺体与间质所占阳性面积计算出阳性单位。
1.3 统计学方法 采用SPSS10.1软件进行分析，计量资料的均数比较采用秩和t检验，P<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 VEGF蛋白阳性分布 50例子宫内膜异位症、25例正常内膜与10例子宫腺肌症在位内膜VEGF染色均为阳性，呈现棕色颗粒，主要分布在腺体细胞和间质个别细胞及血管内皮细胞（见图1，2）。
2.2 VEGF阳性单位比较 见表1～3。
表1 VEGF在子宫内膜异位症与在位内膜之间的阳性单位比较 略
本表1提示，在子宫内膜异位病灶与正常在位内膜VEGF主要集中在腺体，而间质较少，差异具有显著性，P<0.05;子宫腺肌症在位内膜暂无统计学差异。而子宫内膜异位症病灶、子宫腺肌症在位内膜VEGF阳性单位高于正常在位内膜，P<0.05。
表2 子宫内膜异位症与在位内膜月经周期VEGF阳性单位变化 略
表2中VEGF阳性单位正常在位子宫内膜在分泌期明显高于增殖期，差异有显著性，P<0.05。而在异位子宫内膜还是子宫腺肌症的在位内膜在分泌与增殖期的VEGF阳性单位均未发现随着月经周期的变化差异，P>0.05。
表3示，异位子宫内膜异位病灶增殖与分泌期的腺体或间质VEGF阳性单位均未随r-ASRM分期增加而增多。
表3 子宫内膜异位症病灶VEGF阳性单位与r-ASRM分期关系 略
3 讨论
VEGF是由两个亚基以二硫键相连的二聚体糖蛋白，相对分子量在（34～46）×10 3 ，它通过与血管内皮细胞特异性受体结合，起到促内皮增生与血管形成的作用。在正常人的子宫内膜中，VEGF主要分布在腺上皮及周围间质细胞中，并且随着卵巢激素
的调节呈现周期性变化 ［7］ 。这一点在本实验中得到证实，另外我们通过观察与计算阳性单位证实在异位病灶中，VEGF主要集中在腺上皮细胞内，少部分散布于间质细胞中，具有统计学意义，这一结果与Donnez等 ［4，8］ 的结果相同;尽管子宫腺肌症在位内膜可能由于病例少而未得出结果，但我们从计算出的结果已看出趋势。曾经有人采用双荧光显色作CD14与VEGF标记，显示在异位灶间质中分泌VEGF的细胞是巨噬细胞。
在本研究中，我们发现异位的内膜组织与子宫腺肌症较在位的内膜组织的VEGF含量明显