Literature
首页合作平台在线期刊中华中西医杂志2004年第5卷第12期论著

艾迪注射液对膀胱癌细胞端粒酶活性的抑制作用

来源:INTERNET
摘要:【摘要】目的探讨艾迪注射液对膀胱癌细胞端粒酶活性的影响,从理论上阐明艾迪对膀胱癌的治疗作用及其机理。方法用艾迪注射液对22例膀胱癌进行膀胱灌注。采用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测膀胱癌细胞端粒酶活性。将端粒酶提取液分别稀释10倍和100倍后再进行检测,对膀胱癌细胞端粒酶活性强度进行半定量分析。...

点击显示 收起

  【摘要】 目的 探讨艾迪注射液对膀胱癌细胞端粒酶活性的影响,从理论上阐明艾迪对膀胱癌的治疗作用及其机理。方法 用艾迪注射液对22例膀胱癌进行膀胱灌注。采用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测膀胱癌细胞端粒酶活性。将端粒酶提取液分别稀释10倍和100倍后再进行检测,对膀胱癌细胞端粒酶活性强度进行半定量分析。结果 艾迪注射液膀胱灌注前、后膀胱癌细胞端粒酶活性表达的阳性率分别为86.4%和40.9%(P<0.01)。端粒酶活性强度按“-、+、++、+++”划分,膀胱灌注前、后分别为3例、5例、9例、5例和13例、5例、3例和1例,灌注后膀胱癌细胞端粒酶活性强度明显降低(P<0.01)。结论 艾迪注射液可抑制膀胱癌细胞端粒酶的活性,即对膀胱癌细胞的生长具有抑制作用。

关键词 膀胱肿瘤 艾迪注射液 端粒酶 治疗学

Function of AIDI injection in inhibiting cellular

 telomerase activity of bladder cancer

Qin Zike,Zhou Fangjian,Zhang Pei,et al.

Department of Urology of Tumor Hospital,Sun Yat-sen University of Medical Science,Guangzhou510060.

【Abstract】 Objective To explore the influences of AIDI injection on cellular telomerase activity of bladder cancer,and expound theoretically the function and its mechanism in treating bladder cancer.Methods AIDI injection was used in intravesical instillation for22cases of bladder cancer.The cellular telomerasectivity of tissues of bladder cancer was detected by telomeric repeat amplification protocol(TRAP)assay.The intensitiy of cellular telomerase acˉtivity of bladder cancer was analysed semi-quantitatively from results of test of cellular telomerase activity after diluˉtion of telomeric solution to1/10and1/100respectively.Results The positive rates of telomerase activity of bladder cancers beforeand after treatments with AIDI injection are86.4%and40.9%respectively(P<0.01).Divided by‘-,+,++,+++’,the intensities of telomerase activity before and after the treatments were3cases,5cases,9cases,5cases and13cases,5cases,3cases,1cases repectively,and the intensities of telomerase activity decreased obviously after the treatments(P<0.01).Conclusion The treatment with AIDI injection for bladder cancer is effecˉtive in inhibiting the telomerase activity,namely inhibiting the growth of bladder cancer cells.

Key words bladder neoplasm AIDI injection telomerase treatment

艾迪(原名“爱迪”)注射液(以下简称艾迪)是一种纯中药制剂,含斑蝥、人参、黄芪及刺五加等,经现代科学方法精制提炼而成,具有清热解毒、消瘀散结及补益精气的功效。已广泛用于原发性肝癌肺癌、肠癌、鼻咽癌、泌尿系肿瘤、恶性淋巴瘤及妇科肿瘤等多种肿瘤的治疗 [1,2] 。本研究用艾迪进行膀胱灌注,通过检测膀胱灌注前、后肿瘤细胞端粒酶活性的变化,探讨艾迪对膀胱癌的作用及其机理。

1 材料与方法

1.1 标本取材 本组22例住院接受手术治疗的膀胱癌患者。男18例,女4例,年龄36~79岁,平均为57.2岁。肿瘤标本全部经病理证实为膀胱移行细胞癌。其中Ⅰ级3例,Ⅱ级13例,Ⅲ级6例。入院前门诊行膀胱镜检查时即留取肿瘤标本。入院后于手术前6~9天用艾迪50ml行膀胱灌注,每天1次,共灌注5次。艾迪由贵州益佰制药有限公司提供。手术当日再次留取肿瘤标本。所有标本的收集均于组织离体后半小时内完成并放置-80℃低温冰箱保存(不超过3个月),分批进行实验。

1.2 端粒酶提取 每例肿瘤标本取50mg组织,进行液氮研磨,然后加入200μl的冷冻洗脱缓冲液,4℃,10000rpm离心2min,去上清液后重复洗脱离心1次。沉淀物用100μl裂解冲洗重新悬浮,并于4℃下孵育裂解1h,每20min震荡一次。而后于4℃、15000rpm离心30min,将上清液移出分装即为提取液,放于-80℃低温冰箱中保存待用。每例提取液经考马斯亮蓝法测定蛋白浓度,1mg/ml蛋白为标准反应浓度。

1.3 端粒酶活性测定 用TRAP-eze(TM)kit端粒酶活性试剂盒(Gene公司)进行检测,方法按说明书进行。每例标本检测体积50μl反应液中包含2μl提取液、2μCiα- 32 P)(47kBq)dCTP(杜邦公司)和2units TaqDNA多聚酶(Promega公司);反应液于30℃下延长30min,然后按94℃30s、72℃1min30s进行32个PCR循环,所得反应产物在15%的非变性聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳、分离,电泳后凝胶与X线胶片置于-80℃低温冰箱中作放射自显影24h,观察X线胶片出现6bp和6bp整数倍的“梯形”条带为阳性结果。

为了对端粒酶活性强度进行分析,实验参照Kamata等 [3] 所述方法将端粒酶提取原液分别稀释10倍和100倍,再用同样方法分别进行端粒酶活性的检测。原液中端粒酶活性表达阴性者为“-”;原液中端粒酶活性表达阳性而10倍稀释液中表达阴性者为“+”;10倍稀释液中表达阳性而100倍稀释液中表达阴性者为“++”,100倍稀释液中端粒酶活性表达仍阳性者为“+++”。

1.4 统计学方法 采用Wilcoxon秩和检验及方差分析进行。

2 结果

在端粒酶提取原液中,测得膀胱灌注前有19例(86.4%)标本其肿瘤细胞端粒酶活性为阳性,膀胱灌注后只有9例(40.9%)标本的端粒酶活性为阳性。治疗后端粒酶活性的阳性表达率明显降低(P<0.01)。端粒酶提取原液经稀释后,检测结果将膀胱癌细胞端粒酶活性强度按“-、+、++、+++”划分,膀胱灌注前分别为3例、5例、9例和5例;膀胱灌注后分别为13例、5例、3例和1例。膀胱灌注后肿瘤细胞端粒酶活性强度明显降低,差异有非常显著性,P<0.01。

3 讨论

膀胱癌属于中医尿血、血淋、癃闭等范畴,其主要病因病机是由于湿热久郁下焦,热毒瘀结膀胱,日久脾肾两虚,膀胱气化不利所致。因此,治疗上应选择补中益气、散结消瘀的药物,以期达到扶正与祛邪相结合的目的。中西医结合治疗膀胱癌已收到一定效果 [4] 。艾迪含斑蝥、人参、黄芪和刺五加等,其中斑蝥具有破散结、直接抑制肿瘤的作用;而人参、黄芪、刺五加等则具有大补元气,提高机体免疫功能的作用。该药物将直接抗肿瘤与免疫调节有机结合,提高了肿瘤的治疗效果。临床用于中晚期恶性肿瘤,如原发性肝癌、肺癌、大肠癌、鼻咽癌、肾癌、恶性淋巴瘤及子宫颈癌等的治疗,收到了良好的效果 [1,2]

目前,端粒酶被认为是恶性肿瘤最具特异性和普遍性的肿瘤标志物,对肿瘤的诊断和治疗具有重要指导意义。随着现代医学和分子生物学的不断发展,抑制肿瘤细胞端粒酶的活性为肿瘤治疗提供了新思路和方法。Feng等 [5] 用反义hTR(human telomerase RNA)转染Hela细胞,结果导致细胞中端粒酶RNA序列不断丢失,细胞在分裂23~26次后开始发生衰老、死亡。之前我们曾报道膀胱癌细胞端粒酶活性表达阳性率为82.60%。肿瘤细胞端粒酶活性强度与病人年龄、性别、肿瘤大小、数目无关,但与膀胱癌分级、 分期及预后有关,端粒酶活性增高提示肿瘤分化差、易浸润,病人预后不良。卡介苗细胞壁骨架联合白细胞介素2可使膀胱癌细胞端粒酶活性降低、诱导肿瘤细胞凋亡 [6] 。本研究使用艾迪进行膀胱灌注后,肿瘤细胞端粒酶活性明显降低,表明该治疗能有效地抑制膀胱癌细胞端粒酶活性,即抑制膀胱癌细胞的生长。作用机理可能是:一方面通过斑蝥的直接抗肿瘤作用导致端粒酶结构破坏;另一方面通过激活机体的免疫反应,产生一些细胞因子,如IL-2和IFN等,这些细胞因子再通过激活体内的免疫效应细胞,如LAK细胞、NK细胞及CTL细胞(细胞毒性T淋巴细胞)等作用于肿瘤细胞,抑制端粒酶的活性或抑制端粒酶的RNA的表达,使肿瘤细胞死亡 [7]

目前,中医中药用于膀胱癌的防治研究很少。艾迪注射液是近年研制开发的新型抗肿瘤药物,用于膀胱癌的治疗尚未见报道。本研究将艾迪注射液用于膀胱癌的治疗,即有类似化疗药物(如丝裂霉素MMC)的直接抗肿瘤作用,也达到了生物制剂(如BCG)的免疫调节功能,提高膀胱癌的治疗效果。同时,艾迪注射液的毒副反应少 [8] ,用于膀胱灌注十分安全,克服了BCG或化疗药物治疗膀胱癌的严重毒副反应,适合城市及乡村各层次医院广泛推广使用。同时也是中医中药治疗膀胱癌的一种新的尝试。

作者: 秦自科 周芳坚 张蓓 陈小君 李永强 韩辉 刘卓炜 2005-5-20
医学百科App—中西医基础知识学习工具
  • 相关内容
  • 近期更新
  • 热文榜
  • 医学百科App—健康测试工具