点击显示 收起
银翘解毒薄膜衣片系由金银花、连翘、薄荷等9味中药组成，其中主药金银花含绿原酸含量较高，为此，我们采用HPLC法测定了其中绿原酸的含量，发现方法可行，重现性好，可作为银翘解毒薄膜衣片的质量标准。
1 仪器与试药
Waters510高效液相色谱仪;Waters486紫外检测器;Waˉters PC800色谱工作站;Unicam UV530紫外分光光度计;KQ-100超声清洗器。绿原酸对照品（批号:0753-9910供含量测定用中国药品生物制品检定所提供）。
银翘解毒薄膜衣片（批号:000807、001010、001211佛山德众药业有限公司）。乙腈:色谱纯;其它试剂:均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 Hypersil C 18 （4.6×200mm，5μm，大连依利特公司）不锈钢柱;流动相:乙腈-水-磷酸（10∶90∶0.4）;流速:1ml/min;检测波长:327nm;柱温:室温。在此条件下，绿原酸与其它成分能够较好地分离（图1-A、B）。
2.2 线性关系考察 精密称取绿原酸对照品10.10mg，置于100ml棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取1、2、4、6、8ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别吸取10μl，注入高效液相色谱仪，测定。以对照品浓度为横座标，以峰面积为纵座标，绘制标准曲线，进行线性回归，结果绿原酸在0.101～1.01μg范围内线性关系良 好，回归方程为Y=52165X+28174，r=1.000。
2.3 供试溶液的制备
2.3.1 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1ml中含40μg的溶液，作为对照品溶液。
2.3.2 供试品溶液的制备 取本品10片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取约2片，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减少的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.4 精密度试验 精密吸取绿原酸对照品溶液（40μg/ml）各10μl，连续进样5次，结果RSD为1.33%。
2.5 重现性试验 精密称取同一供试品（批号:000807）5份，依法平行测定5次，结果RSD为1.92%。
2.6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液（批号:000807），每间隔1h进样1次，共进样6次，结果供试品溶液在6h内基本稳定，RSD为1.55%。
2.7 回收率试验 称取已测知含量的样品（批号:000807，含量为16.2591mg/g）5份，各约2片量，精密称定，分别精密加入对照品适量，分别按含量测定方法处理后进样测定并计算回收率。结果见表1。
表1 样品中绿原酸回收率测定结果（略）
2.8 样品测定 分别称取样品，按供试品溶液的制备方法制备，分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，结果见表2。
2.9 空白试验 取按处方比例及制法制备的缺金银花阴性样品，按供试品溶液的制备及测定方法进行处理和测定，结果空白溶液无干扰（图1-C）。
表2 样品测定结果（略）
图1 银翘解毒薄膜衣片HPLC图谱（略）
3 讨论
3.1 测定波长的选择 取绿原酸对照品溶液在200～700nm波长范围内扫描，结果绿原酸在327nm波长处有最大吸收，故选择测定波长为327nm。
3.2 流动相的选择 药典收载“金银花”含量测定项下的流动相为乙腈-水-磷酸（15∶85∶0.1），经试验，供试品中绿原酸未能有效分离，经过优化流动相配比，特别是增加酸 度，选用乙腈-水-磷酸（10∶90∶0.4）作为流动相时，绿原酸与其它成分峰的分离度好，且能基线分离。
3.3 提取方法的选择 分别对样品进行了50%甲醇、甲醇、70%乙醇超声处理和加热回流等的摸索，结果以50%甲醇超声处理为佳。通过对超声时间的考察，发现30min已将样品中的绿原酸提取完全。
作者单位:528200广东省佛山市南海中医院
528000广东省佛山市药品检验所